無創(chuàng)DNA陽性結(jié)果的驗證分析及臨床意義

奉 淼

（遼寧省葫蘆島市中心醫(yī)院，遼寧 葫蘆島 125001）

無創(chuàng)DNA檢測是臨床常用的產(chǎn)前診斷技術(shù)，其具備無創(chuàng)的優(yōu)勢，因而臨床實(shí)際開展率較高[1-2]。隨著新一代DNA測序技術(shù)的不斷優(yōu)化與改進(jìn)，其診斷準(zhǔn)確性不斷提升。但與羊膜腔穿刺相比，準(zhǔn)確性仍存在較大的差異，在臨床實(shí)際檢測過程中存在較高的假陽性率，因而其臨床應(yīng)用價值也存在較大的爭議[3-4]。本研究旨在驗證分析無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測（無創(chuàng)DNA）的陽性結(jié)果，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月至2019年1月在本院建檔產(chǎn)檢且行無創(chuàng)DNA檢測顯示結(jié)果陽性的80例產(chǎn)婦作為研究對象。所有產(chǎn)婦均符合無創(chuàng)DNA檢測指征，無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果提示高風(fēng)險后，均行羊膜腔穿刺進(jìn)行確認(rèn)。80例產(chǎn)婦中，初次妊娠者31例，再次妊娠者49例；年齡30～42歲，平均（36.14±6.02）歲；無創(chuàng)DNA檢測時間12～20周，平均（16.08±4.15）周；檢測結(jié)果：42例21-三體陽性，14例18-三體陽性，6例13-三體陽性，18例性染色體異常。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合無創(chuàng)DNA檢測指征，自愿進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測；無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果提示染色體異常高風(fēng)險；自愿進(jìn)行羊膜腔穿刺產(chǎn)前診斷；產(chǎn)婦和家屬均自愿參與本次研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：不同意實(shí)施羊膜腔穿刺者；存在羊膜腔穿刺禁忌證者；終止妊娠后失訪者等。

1.3 檢測方法 針對80例無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果陽性產(chǎn)婦，通過產(chǎn)前診斷指導(dǎo)進(jìn)行羊膜腔穿刺，后行染色體FISH和核型分析；經(jīng)B超引導(dǎo)定位后，采用羊水專用穿刺針經(jīng)腹部穿刺，抽取15 mL羊水，均分為2份，分別進(jìn)行染色體FISH和核型分析；1份羊水經(jīng)離心培養(yǎng)后，加入秋水仙堿收獲細(xì)胞，固定后制片、烤片，G顯帶染色分析；1份羊水采用CSP18/X/Y探針和GLP13/21探針行系統(tǒng)案例熒光原位雜交（fluorescent in situ hybridization，F(xiàn)ISH）分析。

1.4 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計羊膜腔穿刺檢測診斷結(jié)果，并與無創(chuàng)DNA診斷結(jié)果比較，計算無創(chuàng)DNA診斷的準(zhǔn)確率和假陽性率，對比確診者染色體核型分析與無創(chuàng)DNA診斷結(jié)果。追蹤隨訪1年，觀察產(chǎn)婦妊娠結(jié)局及嬰兒生長發(fā)育情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 羊膜腔穿刺與無創(chuàng)DNA診斷結(jié)果比較 80例無創(chuàng)DNA陽性結(jié)果產(chǎn)婦行羊膜腔穿刺確診57例存在染色體異常，13例為假陽性（28.75%），總準(zhǔn)確率為71.25%；其中42例無創(chuàng)DNA提示21-三體者診斷準(zhǔn)確率（92.54%）最高，顯著高于18-三體、13-三體、性染色體異常，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；6例無創(chuàng)DNA提示13-三體者（33.33%）診斷準(zhǔn)確率最低，顯著低于18-三體、性染色體異常者等，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其次為18-三體（78.57%）和性染色體異常（77.78%）者。見表1。

表1 無創(chuàng)DNA陽性患者診斷結(jié)果與羊膜腔穿刺診斷結(jié)果比較

2.2 羊膜腔穿刺確診者染色體核型分析和無創(chuàng)DNA結(jié)果比較 無創(chuàng)DNA結(jié)果顯示染色體異常風(fēng)險，羊膜腔穿刺后染色體核型分析可確認(rèn)胎兒的染色體異常位置與具體突變。見表2。

表2 57例羊膜腔穿刺確診者染色體核型分析和無創(chuàng)DNA結(jié)果比較

2.3 妊娠結(jié)局統(tǒng)計 80例無創(chuàng)DNA陽性結(jié)果孕婦中，57例羊膜腔穿刺確診者均終止妊娠，進(jìn)行引產(chǎn)處理；13例經(jīng)羊膜腔穿刺確認(rèn)無染色體異常的產(chǎn)婦均繼續(xù)妊娠，其中足月分娩11例，2例早產(chǎn)者，分別于33周胎膜早破分娩，35周胎兒宮內(nèi)窘迫終止妊娠；13例胎兒出生后，均無外觀異常，隨訪1年顯示，患兒無外觀異常，生長發(fā)育均正常，與產(chǎn)前診斷（羊膜腔穿刺）結(jié)果一致。

3 討 論

染色體異常是新生兒先天性疾病中的高發(fā)類型，其中21-三體綜合征發(fā)生率最高，此外，18-三體和13-三體等疾病也較為常見，該類疾病屬于染色體非整倍體疾病。羊膜腔穿刺是產(chǎn)前診斷的確診依據(jù)，診斷準(zhǔn)確率極高，但其屬于有創(chuàng)檢查，存在較多的禁忌證，導(dǎo)致母嬰風(fēng)險較高，因而在實(shí)際應(yīng)用中需慎重使用[5-7]。

無創(chuàng)DNA檢測可通過血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行基因測序，并對測序結(jié)果進(jìn)行生物信息分析，然后發(fā)現(xiàn)其中的染色體非整倍體，提示是否存在染色體數(shù)目增加或減少的情況。與羊膜腔穿刺相比，無創(chuàng)DNA檢測安全、快速，但其檢測準(zhǔn)確性相對不足[8-10]。相關(guān)文獻(xiàn)報道顯示，其假陽性者占比較高，準(zhǔn)確率為60%～80%。本研究發(fā)現(xiàn)，80例產(chǎn)婦經(jīng)羊膜腔穿刺檢查確診57例存在染色體異常，假陽性率為28.75%，總準(zhǔn)確率僅為71.25%，可知其陽性結(jié)果的準(zhǔn)確率不理想。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，無創(chuàng)DNA提示21-三體者診斷準(zhǔn)確率最高，其次為18-三體和性染色體異常者，13-三體者診斷準(zhǔn)確率最低，可知無創(chuàng)DNA對21-三體者的診斷準(zhǔn)確性較為理想，18-三體和性染色體異常診斷準(zhǔn)確性均不足80%，13-三體診斷準(zhǔn)確率過低，不具有診斷價值，可見無創(chuàng)DNA提示21-三體者高風(fēng)險者診斷價值較高，其他類型染色體異常準(zhǔn)確性不足。本研究還發(fā)現(xiàn)，無創(chuàng)DNA結(jié)果僅提示染色體異常風(fēng)險，羊膜腔穿刺后染色體核型分析可確認(rèn)胎兒的染色體異常位置與具體突變，提示無創(chuàng)DNA檢測存在明顯的局限性。此外，在實(shí)際產(chǎn)前診斷中，無創(chuàng)DNA檢測受限于母體染色體異常、異體輸血、移植治療等因素，這類產(chǎn)婦不可進(jìn)行無創(chuàng)DNA檢測，建議行羊膜腔穿刺檢查。隨著孕周的增加，無創(chuàng)DNA檢測也存在下降的問題，最佳檢測時間為孕15～18周，應(yīng)嚴(yán)格把控檢測時機(jī)，避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果打擊產(chǎn)婦家屬的情緒，減少不必要的無創(chuàng)DNA檢測。

綜上所述，無創(chuàng)DNA對21-三體診斷準(zhǔn)確性相對較高，結(jié)果陽性者存在較高的染色體異常風(fēng)險，但不能將其作為確診依據(jù)，需進(jìn)一步聯(lián)合其他產(chǎn)前診斷方式確診。