病原體特異性Ig M 抗體檢測在兒童呼吸道急性感染病原快速診斷中的價值研究

馬艷華 丁殿帥 全守東 孫少勇

朝陽市第二醫院兒科122000

呼吸道急性感染包括急性支氣管炎、急性肺炎、急性扁桃體炎、毛細支氣管炎等,是兒童最常見的疾病,如果診治不及時,可進展為重癥肺炎,出現呼吸衰竭甚至死亡,所以早期診斷出感染源種類對指導治療有重要意義。兒童呼吸道急性感染多是由細菌以外的病原體引起的,常見的病原體有呼吸道合胞病毒 (respiratory syncytial virus,RSV)、流感病毒A (influenza virus A,INFA)、流感病毒B (influenza virus B,INFB)等[1],目前病原體檢測的方法較多,包括抗原、抗體檢測、分離培養、PCR、核酸檢測等[2-3]。其中病原體分離培養準確性最高,但培養分離用時長,無法為臨床早期治療提供指導。PCR 具有較高的敏感性,但檢測要求高,難以完成快速檢測。特異性Ig M抗體檢測從取樣到獲得檢測結果只需要2 h左右。近年來陸續有特異性Ig M 抗體在呼吸道疾病診斷中應用研究的報道[4-7],但現有的報道主要是流行病學調查的研究,缺乏不同年齡、不同發病時間、不同疾病類型診斷準確率的報道。本研究通過分層分析,進一步探討特異性Ig M 抗體在兒童急性呼吸道感染的快速診斷價值,現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究為前瞻性研究。選取朝陽市第二醫院門診2018年10月至2018年12月482例患兒作為研究對象,男271例,女211例,年齡范圍為3個月至7歲,平均年齡 (4.7±1.6)歲,均參照《諸福堂實用兒科學(第8版)》呼吸道感染診斷標準,診斷為急性呼吸道感染。本研究經本院醫學倫理委員會批準,入組患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 采集所有受試患兒靜脈血3 ml,同時用鼻咽部細導管負壓吸取法采集鼻咽分泌物,3 000 r/min離心10 min,離心半徑為8 cm,分離血清和鼻咽分泌物脫落細胞。

1.2.2 特異性Ig M 抗體檢測 試劑盒為11種特異性Ig M 抗體試劑盒 (西班牙VIRCELL,S.L.公司),應用間接免疫熒光法對血清中特異性Ig M抗體進行檢測,嚴格按說明書進行操作。

1.2.3 直接免疫熒光法檢測 鼻咽分泌物脫落細胞經PBS洗滌后涂片,丙酮固定,采用直接免疫熒光法試劑盒 (美國Diagnostic HYBRIDS 公司)檢測抗原,嚴格按試劑盒說明進行操作。

1.3 觀察指標 (1)觀察特異性Ig M 抗體檢測急性呼吸道感染患兒RSV、腺病毒、INFA、INFB、副流感病毒、肺炎支原體的陽性符合率。噬肺軍團菌、肺炎衣原體、柯薩奇病毒A、柯薩奇病毒B、埃可病毒因檢出太少,故不進行比較。(2)觀察各年齡組患兒特異性Ig M 抗體檢測陽性符合率。 (3)觀察不同發病時間患兒特異性Ig M抗體檢測陽性符合率。(4)觀察不同疾病類型患兒特異性Ig M 抗體檢測陽性符合率。

1.4 統計學分析 采用SPSS 18.0統計軟件進行數據分析。計數資料以百分率表示,采用χ2檢驗進行比較。P ＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 特異性Ig M 抗體陽性結果分析 以直接免疫熒光法檢測結果為金標準,482例急性呼吸道感染患兒采用間接免疫熒光法進行檢測,共檢出254例患兒9種病原體,腺病毒、INFA、INFB、肺炎支原體的陽性符合率明顯高于RSV (P 值均＜0.05)。見表1。

表1 不同病原體特異性Ig M 抗體檢測結果分析

2.2 年齡對特異性Ig M 抗體結果的影響 1～2歲、3～4歲、≥5歲組患兒特異性Ig M 抗體檢測結果符合率均高于＜1歲組(P 值均＜0.05)。見表2。

表2 不同年齡呼吸道感染患兒特異性Ig M 抗體檢測結果分析

2.3 發病時間對特異性Ig M 抗體結果的影響 發病時間7～14 d、15～21 d、＞21 d 患兒特異性Ig M 抗體檢測結果符合率均高于＜7 d患兒 (P 值均＜0.05)。見表3。

表3 呼吸道感染患兒不同發病時間特異性Ig M 抗體檢測結果分析

2.4 不同疾病類型對特異性Ig M 抗體結果的影響 特異性Ig M 抗體檢測咽峽炎、支氣管炎、扁桃體炎、支氣管肺炎的符合率高于毛細支氣管炎和肺炎組(P 值均＜0.05)。見表4。

表4 不同疾病類型患兒特異性Ig M 抗體檢測結果分析

3 討論

急性呼吸道感染是季節性流行病,病原體可通過飛沫或空氣傳播,傳播速度快,冬春季常會造成局部流行,甚至大范圍爆發性流行。兒童是呼吸道疾病的高發人群,一旦感染發生不僅會影響生長發育,而且不及時治療或治療措施不當還會危及生命。所以,及時快速診斷感染病原體,對指導臨床治療,特別是合理使用抗病毒藥物或抗生素,具有重要意義[8]。Ig M 是由淋巴結漿細胞及脾臟分泌合成的免疫球蛋白,是潛伏病毒活化或病原體感染初次產生的特異性抗體,主要作用是凝集中和病毒、激活補體及免疫調節[9]。研究顯示,呼吸道感染發生后會產生包括Ig M、IgG 等特異性抗體,Ig M 出現的時間早于IgG。針對這一特點,可通過對血清特異性Ig M 抗體的檢測快速明確感染病原體[10]。因此,近年來血清特異性Ig M 抗體的檢測逐漸應用于臨床呼吸道感染性疾病的診斷中。趙博華等[11]檢測了1 928例急性呼吸道感染患兒的血清特異性Ig M 抗體,了解了當地兒童流行病學特點。冷紅春和顏云盈[12]檢測了646例急性呼吸道感染患兒的血清特異性Ig M 抗體,初步掌握了當地感染病原體構成情況,認為其在兒童急性呼吸道感染診斷中有重要的臨床價值。但上述文獻均未對發病年齡、發病時間、疾病類型等因素的影響進行分析,筆者認為應該進行分層分析,以便更精準地指導臨床工作。

直接免疫熒光法是將異硫氰酸熒光素直接標記于單克隆抗體上,熒光染色后于光鏡下觀察,準確性高,是國際公認的成熟抗原檢測方法[13]。本研究將其作為金標準,評價血清特異性Ig M 抗體檢測對兒童急性呼吸道感染的診斷價值。RSV 的特異性Ig M 抗體陽性符合率為67.11%,明顯低于腺病毒、INFA、INFB、肺炎支原體的陽性符合率。原因可能是RSV 是兒童最常見的呼吸道感染病原體之一,感染后未充分產生免疫,所以部分兒童會反復發生RSV 感染,而再次感染往往嚴重程度不及原發感染,血清特異性Ig M 水平較低,所以出現假陰性。本研究比較了不同年齡組患兒的陽性符合率,結果顯示,1～2歲、3～4歲、≥5歲組患兒特異性Ig M 抗體檢測結果符合率均高于＜1 歲組。原因可能是＜1歲患兒免疫反應較弱,在檢測時易出現假陰性。隨著年齡的增加,免疫功能增強,血清特異性Ig M 抗體水平升高,提高了陽性檢出率。

血清特異性Ig M 抗體是病毒感染后最早出現的抗體,一般在感染后1 周內出現,血清特異性Ig M 抗體升高對于確定病原學具有重要價值[14-15]。本研究結果也證實了這一點。本組患兒中發病時間7～14 d、15～21 d、＞21 d患兒特異性Ig M 抗體檢測陽性符合率均高于＜7 d組。由于檢測時發病時間是患兒家屬主訴確定,可能有一定的偏差,同時檢測時可能處于Ig M 產生的窗口期等因素,均會影響血清特異性Ig M 抗體的陽性檢出率。特異性Ig M 抗體檢測在不同的疾病中也存在差異,本研究結果顯示,咽峽炎、支氣管炎、扁桃體炎、支氣管肺炎的符合率高于毛細支氣管炎和肺炎組,但具體原因尚不清楚。

綜上所述,檢測血清Ig M 抗體可快速檢測兒童大部分呼吸道感染病原體,對兒童急性呼吸道感染的快速診斷有一定的臨床價值。采集血清標本對操作者技術沒有什么特殊的要求,而檢測抗原需要采集鼻咽分泌物,對操作者技術水平要求較高,所以前者更容易在臨床推廣。但檢測結果受年齡、發病時間、疾病類型的影響,提示在臨床應用時應結合患者實際情況進行個體化分析。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突