30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑高效液相色譜分析

余德勉，張常慶，王丹斌，萬(wàn)娜娜，王陳杰

(上海悅聯(lián)生物科技有限公司，上海 201215)

氟吡菌胺[1]是德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司開(kāi)發(fā)的新型吡啶酰胺類殺菌劑，主要用于防治各類蔬菜和葡萄上的常見(jiàn)卵菌綱病害，如霜霉病、疫病、晚疫病、猝倒病等，具有保護(hù)和光譜治療作用。氰霜唑[1]是日本石原產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社開(kāi)發(fā)，為磺胺咪唑類殺菌劑，屬于保護(hù)性殺菌劑，對(duì)霜霉病，疫病，根腫病，猝倒病等有特效。對(duì)卵菌綱真菌如霜霉菌、假霜霉菌、疫霉菌、腐霉菌以及根腫菌綱的蕓苔根腫菌具有很高的生物活性。

氟吡菌胺和氰霜唑的單劑或其他復(fù)配制劑的分析方法已有報(bào)道[2-6]，但30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑復(fù)配制劑的分析方法還未見(jiàn)報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法，采用C18不銹鋼柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，對(duì)30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑(15%+15%)中有效成分氟吡菌胺和氰霜唑同柱分析和定量，此方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)和分析。

1 試驗(yàn)操作

1.1 儀器與試劑 電子天平(梅特勒AL-204)、高效液相色譜儀(島津SPD-20A)、超聲清洗機(jī)；甲醇、乙腈、氟吡菌胺標(biāo)樣、氰霜唑標(biāo)樣、30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑。

甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；水：二次重蒸蒸餾水；氟吡菌胺標(biāo)樣：已知氟吡菌胺含量≥98.0%；氰霜唑標(biāo)樣：已知氰霜唑含量≥98.0%。高效液相色譜儀：具紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；色譜柱：Φ4.6mm×150mm不銹鋼柱，內(nèi)裝Kromasil C18/5μm為填充料的不銹鋼柱。

1.2 分析條件 Φ4.6mm×150mm不銹鋼柱，內(nèi)裝Kromasil C18/5μm為填充料的不銹鋼柱，流動(dòng)相為(甲醇：乙腈：水=35：35：30)混合溶液，流量：1.0mL/min，柱溫：室溫(溫差變化≤2℃)，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm，進(jìn)樣體積：20μL，保留時(shí)間：氟吡菌胺約5.0min，氰霜唑約7.0min。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 稱取氟吡菌胺標(biāo)樣0.05g和氰霜唑標(biāo)樣0.05g(精確到0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，加乙腈超聲振蕩5min使樣品溶解，冷卻至室溫定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確吸取5～50mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

1.4 試樣溶液配制 稱取含0.05g氟吡菌胺或0.05g氰霜唑(精確到0.000 2g)樣品，置于50mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩5min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，用移液管準(zhǔn)確吸取5～50mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾。

1.5 有效成分測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰2針的響應(yīng)值變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑測(cè)試中標(biāo)樣和試樣溶液的典型色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑標(biāo)樣色譜圖

圖2 30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑試樣色譜圖

1.6 結(jié)果計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中氟吡菌胺(氰霜唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)分別按式(1)計(jì)算：

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中氟吡菌胺(氰霜唑)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氟吡菌胺(氰霜唑)峰面積的平均值；

m1—氟吡菌胺(氰霜唑)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

P—標(biāo)樣中氟吡菌胺(氰霜唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相和波長(zhǎng)選擇 首先對(duì)30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑中有效成分氟吡菌胺、氰霜唑在DAD條件下做紫外吸收掃描(圖3)，(圖3)并結(jié)合分析中助劑雜質(zhì)干擾因素，選定檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。在甲醇、乙腈、水中調(diào)節(jié)比例，將氟吡菌胺和氰霜唑進(jìn)行有效分離，同時(shí)避免助劑和雜質(zhì)干擾，最后確定為甲醇：乙腈：水=35：35：30作為流動(dòng)相，在此條件下對(duì)30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑中氟吡菌胺、氰霜唑峰純度掃描。30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑中氟吡菌胺、氰霜唑的峰純度均>99.9%，30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑中氟吡菌胺、氰霜唑中有效成分出峰位置無(wú)明顯物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖3 氟吡菌胺、氰霜唑紫外吸收?qǐng)D

2.2 線性結(jié)果分析 按照標(biāo)準(zhǔn)要求準(zhǔn)確配制一系列不同濃度的氟吡菌胺和氰霜唑標(biāo)樣溶液，然后文中測(cè)定步驟進(jìn)行分析檢測(cè)，分別以氟吡菌胺和氰霜唑的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，氟吡菌胺和氰霜唑的峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算一元線性回歸方程。線性相關(guān)性測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表1)。

表1 有效成分線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度結(jié)果分析 任取一批30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑，按文中測(cè)定步驟連續(xù)測(cè)定氟吡菌胺、氰霜唑質(zhì)量分?jǐn)?shù)，分別計(jì)算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)，精密度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表2)。

表2 氟吡菌胺、氰霜唑精密度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)表

2.4 準(zhǔn)確度結(jié)果分析 準(zhǔn)確稱取5份空白試樣，并分別加入定量的氟吡菌胺、氰霜唑標(biāo)樣，然后按文中測(cè)定步驟測(cè)定氟吡菌胺、氰霜唑標(biāo)樣的加入量，同理論值進(jìn)行比較，計(jì)算回收率。準(zhǔn)確度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表3)。

表3 準(zhǔn)確度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)表

3 結(jié)論

試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本文中開(kāi)發(fā)的30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑分析方法具有良好的線性、精密度和準(zhǔn)確度，符合農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量分析要求，對(duì)于保證30%氟吡菌胺·氰霜唑懸浮劑產(chǎn)品質(zhì)量，維護(hù)消費(fèi)者的利益將起到積極作用