植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞生長(zhǎng)性能、屠宰性能以及血清免疫和抗氧化功能的影響

宋小燕 彭 涵 余春林 陳家磊 楊 禮 胡陳明 張?jiān)鰳s 邱莫寒 夏 波 熊 霞 蔣小松 杜華銳 李晴云 楊朝武*

(1.四川省畜牧科學(xué)研究院，動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 610066；2.四川大恒家禽育種有限公司，成都 610066)

抗生素濫用導(dǎo)致的藥物殘留和抗藥性問(wèn)題受到越來(lái)越多的重視，歐盟自2006年開(kāi)始嚴(yán)禁在飼料中添加抗生素，此后許多國(guó)家相繼出臺(tái)了相應(yīng)政策控制抗生素的使用。我國(guó)宣布藥物飼料添加劑在2020年全部退出。飼料端“禁抗”，養(yǎng)殖端“減抗、限抗”大勢(shì)已定，尋找安全、高效的替代新產(chǎn)品成為當(dāng)前畜牧產(chǎn)業(yè)的一項(xiàng)重要課題。

近年來(lái)益生菌用于家畜、家禽養(yǎng)殖的研究增多，結(jié)果表明相當(dāng)多的益生菌制劑能有效調(diào)節(jié)動(dòng)物胃腸道的微生態(tài)平衡，增強(qiáng)機(jī)體的免疫和抗病力，促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能[1-5]。再加上安全、無(wú)耐藥性、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，益生菌有望成為一種理想的抗生素替代品。植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)是乳酸菌的一種，屬乳桿菌科乳桿菌屬，是典型的兼性厭氧菌，發(fā)酵糖類的能力很強(qiáng)，且只發(fā)酵產(chǎn)生乳酸，廣泛分布于發(fā)酵的蔬菜、果汁和乳制品中[6]，較耐鹽，與其他乳酸菌的區(qū)別在于此菌的活菌數(shù)比較高，能大量的產(chǎn)酸，并與其他乳酸菌有協(xié)同作用。植物乳桿菌主要廣泛應(yīng)用于乳制品生產(chǎn)，包括功能性酸乳、發(fā)酵豆乳、干酪、功能性乳酸菌飲料中。隨著畜牧產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，植物乳桿菌開(kāi)始作為飼料添加劑在畜禽生產(chǎn)領(lǐng)域應(yīng)用。現(xiàn)有的一些研究結(jié)果表明，植物乳桿菌能促進(jìn)動(dòng)物腸道有益菌增殖，降低病原菌的數(shù)量，豐富腸道菌群的多樣性，具有促生長(zhǎng)、防腹瀉、增強(qiáng)機(jī)體免疫和抗病力的效果[7-10]。本文以植物乳桿菌為研究對(duì)象，研究飼糧中添加不同水平的植物乳桿菌對(duì)地方優(yōu)質(zhì)品種肉雞——大恒肉雞生長(zhǎng)性能、屠宰性能以及血清免疫和抗氧化功能的影響，為優(yōu)質(zhì)肉雞無(wú)抗健康養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 植物乳桿菌

試驗(yàn)用植物乳桿菌菌種由中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所提供，經(jīng)復(fù)活、傳代培養(yǎng)，活菌數(shù)在1×109～1×1010CFU/mL。每周做1次菌液培養(yǎng)，計(jì)數(shù)、稀釋成試驗(yàn)中需要的菌液濃度，按20～40 mL/kg直接添加到飼糧中，采用逐級(jí)混合法混合均勻，為保證植物乳桿菌活性，飼糧未經(jīng)高溫制粒、未添加抗生素。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和基礎(chǔ)飼糧

大恒肉雞是四川大恒家禽育種有限公司聯(lián)合四川省畜牧科學(xué)研究院，利用我國(guó)地方雞種遺傳資源，采用現(xiàn)代家禽遺傳育種技術(shù)育成的青腳、麻羽、白皮肉雞。挑選健康的1日齡大恒商品代肉雛雞2 400只，公母各占1/2，分開(kāi)飼養(yǎng)，公雞和母雞各隨機(jī)分為5個(gè)組，每個(gè)組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40只雞。對(duì)照組(Ⅰ組)飼喂基礎(chǔ)飼糧，基礎(chǔ)飼糧中不含抗生素；試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加1×105(Ⅱ組)、1×106(Ⅲ組)、1×107(Ⅳ組)和1×108(Ⅴ組)CFU/kg的植物乳桿菌。基礎(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)中肉用仔雞營(yíng)養(yǎng)需要配制，采用玉米-豆粕型飼糧，料型為粉料。整個(gè)試驗(yàn)期分3個(gè)飼養(yǎng)階段，1～21日齡飼喂肉小雞料，22～42日齡飼喂肉中雞料，43～70日齡飼喂肉大雞料，各階段基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于2019年8—10月在四川大恒家禽育種有限公司進(jìn)行，全程采用階梯式籠養(yǎng)，自由采食和飲水，光照、免疫等日常管理均按公司管理手冊(cè)進(jìn)行。試驗(yàn)期共70 d。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)開(kāi)始日、21日齡、42日齡和試驗(yàn)結(jié)束日對(duì)每只雞進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算各階段的平均日增重(ADG)；記錄各個(gè)組每個(gè)重復(fù)的飼糧消耗量，計(jì)算平均日采食量(ADFI)，根據(jù)平均日增重和平均日采食量計(jì)算料重比(F/G)。

1.4.2 屠宰性能

試驗(yàn)結(jié)束日從每個(gè)重復(fù)中選取4只接近平均體重的健康試驗(yàn)雞進(jìn)行屠宰，頸部放血處死，去毛，瀝干水分后進(jìn)行屠宰性能測(cè)定，包括屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、腿肌率和腹脂率，測(cè)定方法參考《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》[11]。

1.4.3 血清免疫功能

試驗(yàn)第70天從各組隨機(jī)抽出8只試驗(yàn)雞，空腹翅靜脈采血5 mL于離心管中，37 ℃靜置30 min后，室溫3 000 r/min離心10 min，取上清分裝于1.5 mL離心管中，-20 ℃保存待測(cè)。血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)和干擾素-γ(INF-γ)含量采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。往預(yù)先包被雞免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體，37 ℃溫育60 min并徹底洗滌。用底物3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞免疫球蛋白呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD)值，計(jì)算樣品濃度。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4.4 血清抗氧化功能

采集70日齡試驗(yàn)雞血清進(jìn)行抗氧化指標(biāo)測(cè)定，檢測(cè)血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。GSH-Px可以促進(jìn)過(guò)氧化氫(H2O2)與還原型谷胱甘肽(GSH)反應(yīng)生成水和氧化型谷胱甘肽(GSSG)，GSH-Px的活性可用其酶促反應(yīng)的速度來(lái)表示，測(cè)定此酶促反應(yīng)中GSH的消耗，則可求出酶的活性。GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸陰離子呈現(xiàn)較穩(wěn)定的黃色，在412 nm處測(cè)其OD值即可算出GSH含量。由于H2O2和GSH在沒(méi)有酶的條件上，也能進(jìn)行氧化還原反應(yīng)(稱非酶促反應(yīng))，所以必須扣除非酶促反應(yīng)引起的GSH減少的部分。測(cè)定主要步驟包括酶促反應(yīng)和顯色反應(yīng)，分別在酶管和非酶管中進(jìn)行。T-SOD活性采用羥胺法測(cè)定，黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后者氧化羥胺形成硝酸鹽，在顯色劑作用下呈紫紅色，于波長(zhǎng)550 nm處有最大吸收峰。當(dāng)被測(cè)樣品含T-SOD時(shí)，其對(duì)超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時(shí)測(cè)定管的OD值低于對(duì)照管的OD值，通過(guò)公式可求出樣品中的T-SOD的活性。MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定，過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的MDA可與TBA縮合，形成紅色產(chǎn)物，用酶標(biāo)儀在532 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用one-way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組(Ⅰ組)相比，飼糧添加1×107CFU/kg植物乳酸桿菌顯著提高了母雞70日齡體重(P<0.05)；公雞、母雞各階段平均日采食量、平均日增重和料重比各組差異均不顯著(P>0.05)，但隨著植物乳桿菌添加水平的提高，料重比呈下降趨勢(shì)。

表2 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞屠宰性能的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加不同水平植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率和腹脂率無(wú)顯著影響(P>0.05)，各組肉雞屠宰性能無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞屠宰性能的影響

2.3 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒優(yōu)質(zhì)肉雞血清免疫功能的影響

由表4可知，Ⅴ組公雞血清IgA和INF-γ含量顯著高于Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)，Ⅴ組公雞血清IgG含量顯著高于對(duì)照組、Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)，Ⅴ組公雞血清IgM和IL-2含量顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ組母雞血清IgA和IgG含量顯著高于對(duì)照組和Ⅱ組(P<0.05)。總體而言，飼糧添加高水平植物乳桿菌組大恒肉雞的血清免疫功能得到了提高。

表4 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞血清免疫功能的影響

2.4 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞血清抗氧化功能的影響

由表5可知，Ⅴ組公雞血清GSH-Px活性最高，顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.05)，血清T-SOD活性顯著高于Ⅲ組(P<0.05)；Ⅴ組母雞血清GSH-Px活性最高，顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)。各組大恒肉雞血清MDA含量差異不顯著(P>0.05)。

表5 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞血清抗氧化功能的影響

3 討 論

3.1 飼糧添加植物乳酸菌對(duì)大恒肉雞生長(zhǎng)性能的影響

益生菌進(jìn)入腸道后，會(huì)迅速繁殖，與有害菌群爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，抑制有害微生物的生長(zhǎng)。益生菌可直接調(diào)節(jié)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，或通過(guò)調(diào)控消化酶活性，改善腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。陸銀等[12]在飼糧中添加復(fù)合益生菌(蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和糞腸球菌)，結(jié)果表明復(fù)合益生菌能顯著提高21～35日齡愛(ài)拔益加(AA)肉雞的生長(zhǎng)性能。Shokryazdan等[13]研究表明，飼糧添加乳酸桿菌混合物可以顯著提高肉雞增重，改善飼料轉(zhuǎn)化率。郭欣怡等[14]報(bào)道飼糧添加乳酸菌、丁酸菌和復(fù)合菌制劑，其中復(fù)合菌制劑能顯著提高肉雞平均日增重，降低料重比，乳酸菌、丁酸菌在飼養(yǎng)后期使得料重比顯著降低。縣怡涵等[15]研究發(fā)現(xiàn)，7日齡開(kāi)始飼喂植物乳桿菌能顯著提高斷奶仔豬平均日采食量和平均日增重，降低料重比，促進(jìn)斷奶仔豬空腸和回腸絨毛發(fā)育，具有顯著的促生長(zhǎng)、抗腹瀉效果。本試驗(yàn)結(jié)果表明，植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，但隨著植物乳桿菌添加水平的提高，料重比呈下降趨勢(shì)。此外，性別不同植物乳桿菌適宜的添加水平也不同，Ⅲ組公雞體重最大，Ⅳ組母雞體重最大。以上結(jié)果說(shuō)明，植物乳桿菌的使用存在最佳添加水平，且可能受到動(dòng)物品種、性別、生長(zhǎng)階段和益生菌制劑質(zhì)量、實(shí)際飼養(yǎng)管理的條件等眾多因素影響。

3.2 飼糧添加植物乳桿菌對(duì)大恒肉雞屠宰性能的影響

屠宰性能是畜禽肉用性能的重要評(píng)定指標(biāo)，直觀地反映動(dòng)物機(jī)體組成及其產(chǎn)肉性能。蔡中梅[16]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加不同水平的巨大芽孢桿菌，添加水平達(dá)到60 mg/kg時(shí)鵝全凈膛率、半凈膛率顯著提高，各組胸肌率、腿肌率和腹脂率差異不顯著。黃金華等[17]研究結(jié)果表明，復(fù)合益生菌顯著提高了肉雞的半凈膛率和全凈膛率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各組肉雞屠宰性能差異不顯著。這與以上試驗(yàn)中益生菌表現(xiàn)出的效果差異較大，說(shuō)明不同的益生菌種類、益生菌組合對(duì)屠宰性能的影響可能存在差異，具體機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧添加植物乳酸菌對(duì)大恒肉雞血清免疫功能的影響

免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)具有抗菌、抗病毒等功效，是動(dòng)物體液免疫系統(tǒng)的重要組成成分。IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子具有免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)功能，是常用的細(xì)胞免疫檢測(cè)指標(biāo)。免疫球蛋白和免疫細(xì)胞因子水平可直接反映機(jī)體的免疫狀況。賈志新[18]報(bào)道在飼糧中添加丁酸梭菌可以顯著提高櫻桃谷肉鴨血清IgG和IgM含量。徐基利[19]發(fā)現(xiàn)適量的乳酸菌制劑能提高肉仔雞血清IgG和IgA含量，使機(jī)體的體液免疫功能增強(qiáng)。甄玉國(guó)等[20]研究表明，飼喂植物乳桿菌顯著提高肉仔雞血清IgG、IgA、IL-2和IFN-γ含量。Liu等[21]報(bào)道仔豬口服植物乳桿菌顯著降低腸道梭菌屬病原菌的數(shù)量，促進(jìn)腸道健康發(fā)育。本試驗(yàn)結(jié)果與以上研究結(jié)果類似，飼糧添加高水平植物乳桿菌時(shí)，大恒肉雞血清IgG含量和母雞血清IgA含量顯著提高，同時(shí)血清IgM、IL-2和IFN-γ含量也有所提高，該結(jié)果預(yù)示植物乳桿菌能夠提高大恒肉雞的血清免疫功能，而免疫功能與機(jī)體抗病力、生長(zhǎng)性能直接相關(guān)。

3.4 飼糧添加植物乳酸菌對(duì)大恒肉雞血清抗氧化功能的影響

GSH-Px特異性催化GSH對(duì)H2O2的還原反應(yīng)，是細(xì)胞內(nèi)H2O2和脂質(zhì)自由基的清除劑。T-SOD能清除自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。MDA是氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。田浪等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在黃羽肉雞飼糧中添加復(fù)合益生菌，顯著提高了肉雞血清總抗氧化能力(T-AOC)以及T-SOD和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性。袁文華等[23]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加丁酸梭菌和(或)乳酸菌顯著提高青年鴿肝臟CAT、T-SOD和GSH-Px活性，2個(gè)菌種復(fù)合添加顯著降低了肝臟MDA含量。廖秀冬[24]研究表明，飼糧添加丁酸梭菌可以顯著提高肉雞肝臟和血清抗氧化能力。吳凡等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在低蛋白質(zhì)水平飼糧中添加益生菌和有機(jī)酸復(fù)合制劑，青腳麻雞血清GSH-Px活性提高，血清T-SOD活性降低，血清MDA含量差異不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，高添加水平植物乳桿菌組肉雞血清GSH-Px和T-SOD活性較高，但差異不顯著，同時(shí)各組間肉雞血清MDA含量差異不顯著。這與上述試驗(yàn)結(jié)果不完全一致，說(shuō)明益生菌種類、添加水平、單菌或復(fù)合制劑等都可能影響抗氧化機(jī)能的改善作用，需要進(jìn)一步探究。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加高水平的植物乳桿菌能夠顯著提高大恒肉雞血清免疫功能，一定程度上增強(qiáng)血清抗氧化功能，對(duì)生長(zhǎng)性能和屠宰性能無(wú)顯著影響。