靈芝產區種質資源調查及雜交育種研究

左洪波，夏伯陽，王希亮，李華利，蘇小林，劉紅粉

（1.山東中泰藥業有限公司 山東，聊城 252000；2.聊城伯陽藥食真菌研究所 山東，聊城 252000 ）

靈芝具有著極高的藥用價值以及觀賞價值，造就其有著極大的市場開發前景。而從我國發展情況來看，我國在發展過程中對于中藥的重視程度較高，而靈芝更是在我國中藥領域占有十分重要的地位。而伴隨著時代的發展，新媒體的盛行，靈芝被更加廣泛的宣傳，民眾對其的認識程度也在不斷提升。在這種環境下，我國靈芝市場不斷發展，給我國靈芝種植業以更大的挑戰。而從我國靈芝種植情況來看，我國早期靈芝種植多是依靠從外國引進菌種，而這些菌種經過多年的連續性種植，已經產生一定的退化情況，造成靈芝整體質量降低。在這種情況下，我國也更加重視靈芝的選育工作，提升我國靈芝整體生產質量，讓靈芝能夠為我國醫療行業提供更大的價值，也能夠在我國發展過程中創造更大的經濟價值。

1 靈芝產區種質資源調查

靈芝作為一種中藥材，在我國有著極高的聲譽。其最早被收錄于《中國藥典》中，《本草綱目》中記載，靈芝在實際應用的過程中，具有明目，補肝氣；祛心腹五邪，益脾氣；主治咳逆上氣，益肺氣，通利口鼻。而在我國最早的醫學古籍《黃帝內經》中記載，靈芝入五經，補益五臟之氣，調六臟之陰陽，正氣存內，邪不可干。而從現階段我國的研究情況來看，靈芝在實際應用的過程中能夠在癌癥，腦溢血，心臟病等疾病治療中有著較為顯著的治療效果[1]。而靈芝也由于自身的藥效，越來越受到人們的關注。而伴隨著時代的發展，科技不斷的進步，靈芝養殖也成為可能。可以預期，靈芝在未來的發展中能夠更多的被應用于普通民眾生活中，也能發揮其更大的效益。

從世界范圍角度來看，現已經被發現的靈芝種類高達250 多種。而多數的靈芝集中在歐洲北部，南部，非洲中部，南美，以及亞洲東部。從我國靈芝分布情況來看，靈芝分布于我國29個省市，主要集中在海南，貴州，四川，安徽，吉林，云南等地。

國外關于靈芝的栽培養育研究主要集中在日本以及韓國，而現階段我國所人工養殖的靈芝栽菌株，也基本是從韓國與日本引進。日本最早是在1987年進行靈芝栽培養殖技術的研究，并在空調進行溫度調控的環境下，獲得袋栽和瓶栽研究成果。而從我國靈芝養殖技術發展實際情況來看，我國靈芝養殖技術在20世紀80年代左右開始發展，主要是進行段木靈芝栽培技術研究。而伴隨著時代的發展，我國在發展過程中，靈芝栽培技術也在不斷的進行改進與完善。從玻璃瓶小量栽種發展到短段木熟料栽種，而在這個過程中，靈芝的產量以及栽種周期得到了較為明顯的改善。而我國人工栽種靈芝所選用的原材料，也由原有的單一原木逐漸的轉向棉子殼，雜木屑等方向。

本文在研究的過程中主要是進行山東靈芝栽種情況的研究。山東是我國四大靈芝產地之一，其主要的品種為韓芝，品種是在1993年從韓國引入[2]。而這種靈芝伴隨著多年的連續性栽種，品種已經產生一定程度的菌種退化情況，靈芝整體質量以及產量明顯的下降。在這種情況下，山東地區積極的進行靈芝種質資源的收集并進行菌種選育方面的研究。將現有的靈芝品種與野生靈芝品種進行雜交。經過多年的實驗以及人工馴化，培養出抗雜菌能力強、子實體和孢子粉相對產量高、穩定、抗逆性強的優良品種新菌株御蕈堂靈芝1 號和2 號。而這兩種靈芝也成為現階段山東種植的主要的靈芝品種。

表1 子實體中多糖及三萜含量，孢子粉中多糖，三萜及油脂含量

1 雜交育種研究

1.1 資料與方法

1.1.1 資料 菌株的選擇：在進行清楚選擇的過程中，所選擇的部分可以分成對照組以及實驗組。對照組所使用的為山東1993年所引入的韓芝。而實驗組主要分成三個部分。山東泰安泰山野生泰山赤芝，吉林長白山野生靈芝以及昆崳山野生靈芝。再進行靈芝的采集以及標本的確定之后，將所采集的標本交由聊城伯陽藥食真菌研究所進行研究。

1.1.2 培養基的選擇 靈芝在雜交育種研究過程中，所使用的培養基有三種，分別為母種培養基原種和栽種培養基，生產培養基。本實驗在研究的過程中所使用的母種培養基為PDA 培養基，原種和栽種培養基主要是由中藥渣，木屑，麥麩，石膏，葡萄糖組成，以上幾種成分的比例為48:30：20:1:1。而在進行培養基調配的過程中需要保證料水的比在1:1.2 左右。Ph 值保持正常。生產培養基主要是由中藥渣，木屑，麩皮，玉米粉，石膏，生石灰以及過磷酸鈣組成。以上成分的比例約為48:30：15:3:1:2:1。

1.2 靈芝選育過程與方法

1.2.1 實驗組組織分離與母鐘篩選 主要分成三個步驟。第一步，再進行野生靈芝的采集后，在無菌環境下進行組織分離工作，并將每個野生靈芝標本分離成十支試管母鐘。第二步，培養孕育部分。將處理好的標本，放置在26℃左右的恒溫箱中，進行避光培養工作。這個過程的持續時間大概三天，而在這三天之內，相關的研究人員需要每天對試管進行檢查。在試管內部產生污染的情況下，需要將其丟棄。第三步，篩選部分。再進行靈芝母鐘培養之后需要選擇，生長情況最為良好，顏色干凈的母鐘進行實驗，并需要對已經選擇的部分進行進一步的純化。

1.2.2 初篩與復篩 這一部分工作主要分成兩個步驟。第一步，原種培養，選擇帶孔透氣且已經經過殺菌處理的玻璃培養瓶進行實驗組所篩選出的優良某種培養工作。在這個過程中需要注意，靈芝培養的過程中需要保證其溫度在26℃～28℃左右，且需要避光進行靈芝的培養工作[3]。第二步，栽培種培養，將篩選出來的實驗組菌株以及對照組菌株接種在同一個培養基中，溫度以及其他條件與原種培養條件一致。

1.2.3 試驗與比較 在進行實驗的過程中，為保證實驗的準確性，需要保證實驗在兩次以上。首先，在進行實驗的過程中需要選擇上述培養中，綜合得分較高的菌株進行培養。將菌株放在袋栽設備中進行培養，每種菌株需要進行100袋的實驗。之后對所有的數據進行詳細的記錄。

1.2.4 實地栽培試驗 實地栽培實驗與實驗室不同，其在實際應用的過程中是為檢驗實驗室所培養出的菌種是否適合自然環境。首先需要選擇合適的實驗場地，需要保證實驗組以及對照組實驗條件基本保持一致。使用兩頭接種的栽種方法進行種植，每個菌株栽種的數量為10000袋，并在栽種結束之后進行詳細的數據記錄。

1.3 檢驗標準

本實驗在進行檢驗的過程中，其檢驗標準是按照《中國藥典》中的方法對其子實體和孢子粉進行抽樣檢測。主要檢測的內容包括多糖及三萜含量，孢子粉中多糖，三萜及油脂含量。

2 結果

2.1 母種篩選情況

從某中篩選的時間角度來看，實驗組內菌株發菌的時間大概在7天左右，且菌絲潔白純正，整齊。相比于實驗組而言，對照組所需要的時間較長。平均時間在9d。

2.2 原種生長情況

從原種的生長情況來看，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝標本以及吉林長白山所采集的野生靈芝標本，在養殖的過程中，菌株發菌情況較為良好，菌絲潔白且茂密，而其所使用的時間平均為25天。而昆崳山品種在生長的過程中出現不良反應，部分出現生長緩慢甚至于死亡情況，故而，從研究中排除。而對照組在試驗的過程中，其菌株生長狀態與實驗組一致，而其所使用的時間在30天。

2.3 栽培種生長情況

山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝在試驗的過程中所使用的時間在30d，吉林長白山所采集的野生靈芝標本在實際生長的過程中所使用的時間在35d。而對照組在試驗的過程中所使用的時間在40d[4]。從栽培種的實際情況來看，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝生長情況最佳。

2.4 品種比較情況

在進行三次的重復實驗之后，兩種新品種的靈芝菌株整體表現較為優良。從污染角度上說，實驗組被污染的概率在3%，而對照組被污染概率在12%，從污染概率角度上來說，實驗組靈芝性能更加優發均速度角度上說，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝三次試驗平均發菌時間在34d左右，吉林長白山所采集的野生靈芝的發菌時間在39d左右。而對照組數據則不理想，時間在47d左右。故而從發菌時間角度分析，實驗 組的菌株更為優秀。

2.5 區域栽培情況

從發均速度角度上來說，其與實驗室實驗結果沒有明顯差異。而從污染對角度上來說，山東泰安泰山上所采集的野生泰山赤芝在培養過程中，其受污染的概率在1%左右。吉林長白山所采集的野生靈芝在培養過程中受污染的概率在3%。而對照組在試驗過程中其受到污染的概率在12.5%，其種植質量遠遠低于新品種，不符合企業種植的實際需求，難以創造更大的經濟利益。

2.6 活性成分測定

從研究的結果來看，兩種新品種的靈芝，其的質量較高，數據也在中國藥典要求之上。證明，新品種的靈芝有著較高的質量，能夠滿足現階段社會發展的同時，也能夠為企業創造更大的經濟利益。

3 討論與分析

從各個國家對于食藥用菌的研究情況來看，多數食用菌均來自野外，需要通過人工馴化才能夠在人們的生活中發揮更大的作用。通過人工的選擇，能夠更加具有針對性的定向的進行食藥用菌的馴化工作，使其在發展過程中能夠更多的保留對人類有益的部分。使其更加滿足現階段社會發展的實際需求，進而更好的服務與社會，服務于市場，為人們提供更加高質量的醫療功效以及食用功效。通過雜交育種研究工作能夠在找出更加優質的靈芝品種，使靈芝能夠在我國的法扎過程中創造更大的藥用價值以及經濟價值。