津力達(dá)顆粒對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠代謝紊亂及FGF21/AMPK信號(hào)通路的影響

劉 妍，李翠茹，常麗萍,，高懷林

1.河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050091

2.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，絡(luò)病研究與創(chuàng)新中藥國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050035

3.河北以嶺醫(yī)藥研究院，國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室（心腦血管絡(luò)病），河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050035

4.河北以嶺醫(yī)院，國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)絡(luò)病學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，河北 石家莊 050091

2005年國(guó)際糖尿病聯(lián)盟公布的數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)代謝綜合征患病率為14%～16%，且80%糖尿病患者、50%糖尿病前期患者均患有代謝綜合征[1-2]。腹型肥胖是代謝綜合征最重要的特征，目前臨床上對(duì)肥胖所致的代謝綜合征尚無(wú)有效的治療方法。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（fibroblast growth factor 21，F(xiàn)GF21）是FGF 家族中的一員，可作用于肝臟、脂肪等組織，增強(qiáng)肝臟脂肪的氧化，促進(jìn)白色脂肪組織脂質(zhì)分解并增強(qiáng)其胰島素敏感性[3]。刺激FGF21表達(dá)可抑制高脂飲食誘導(dǎo)的體質(zhì)量增加，增加胰島素敏感性，改善胰島素抵抗，改善糖、脂代謝，從而治療肥胖[4]。FGF21 可通過(guò)激活成纖維生長(zhǎng)因子受體1（fibroblast growth factor receptors 1，F(xiàn)GFR1）/β-Klotho 蛋白的受體復(fù)合物發(fā)揮生物性能[5]。磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-dependent/activated protein kinase，AMPK）是一種能量代謝傳感器，在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和葡萄糖穩(wěn)態(tài)中起重要作用，當(dāng)機(jī)體缺氧、缺血、葡萄糖消耗過(guò)多時(shí)，磷酸化的（p-AMPK）被激活[6-7]。內(nèi)分泌FGF21 信號(hào)可通過(guò)FGFR1/β-Klotho 通路直接激活A(yù)MPK 途徑，也可通過(guò)刺激脂聯(lián)素和皮質(zhì)類(lèi)固醇分泌間接激活A(yù)MPK 信號(hào)，調(diào)控代謝紊亂[8]。沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator 1，SIRT1）是FGF21介導(dǎo)的AMPK 信號(hào)通路的下游靶點(diǎn)，與FGF21 具有雙向激活作用，均在調(diào)節(jié)糖脂代謝過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。

津力達(dá)顆粒由人參、黃精、蒼術(shù)、苦參、麥冬、地黃等中藥組成，具有保護(hù)胰島β 細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能、增加胰島素分泌、減輕體質(zhì)量、改善糖脂代謝水平、增強(qiáng)胰島素敏感性等作用[9-13]。但其改善胰島素抵抗及代謝綜合征的具體作用機(jī)制尚不明確，因此，本研究探討了津力達(dá)顆粒對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠相關(guān)代謝綜合征的作用及與FGF21/AMPK 信號(hào)通路的相關(guān)性，為津力達(dá)顆粒的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性C57BL/6J 小鼠，5～6 周齡，體質(zhì)量18～22 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SYXK（冀）2015-0064。動(dòng)物飼養(yǎng)于河北省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)藥研究院以嶺藥業(yè)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，溫度20～25 ℃，相對(duì)濕度50%～70%，12 h 晝夜光照交替，5 只/籠，自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)河北以嶺中醫(yī)研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)SYXK（冀）2020-003。

1.2 藥品與試劑

津力達(dá)顆粒（9 g/袋，批號(hào)S-130901）購(gòu)自石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、三酰甘油（triglycerides，TG）試劑盒（批號(hào)分別為19-0115、19-0514、19-0418、19-0605）購(gòu)自北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司；血糖試紙購(gòu)自美國(guó)強(qiáng)生公司；葡萄糖購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；Eastep?Super 總RNA 提取試劑盒（批號(hào)0000343931）購(gòu)自上海普洛麥格公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒購(gòu)自日本Takara 公司；引物購(gòu)自上海生工生物科技有限公司；FGF21 抗體、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體、SIRT1 抗體、羊抗兔二抗（批號(hào)分別為UD275587、GR3298310-2、GR3250046-11、GR309266-5）購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司；FGFR1 抗體、β-Klotho 抗體（批號(hào)分別為10002055、00060022）購(gòu)自美國(guó)Proteintech 公司；AMPK 抗體、p-AMPK抗體購(gòu)自美國(guó)CST 公司；蛋白上樣緩沖液、RIPA裂解液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；BCA 蛋白定量試劑盒、蛋白酶、磷酸酶抑制劑、蛋白Marker染液購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司。

1.3 儀器

Tek TEC 5 組織包埋機(jī)（櫻花醫(yī)療科技有限公司）；Leica SM2010R 平推式切片機(jī)（德國(guó)Leica 公司）；KA-1000A 離心機(jī)（中國(guó)飛鴿公司）；PrimoVert倒置顯微鏡（德國(guó)Zeiss 公司）；5417R 高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Eppendorf 公司）；XW-80A 漩渦混合儀、TS-8 轉(zhuǎn)移脫色搖床（海門(mén)其林貝爾儀器制造有限公司）；ABT220-5DM 萬(wàn)分電子天平（德國(guó)Kern 公司）；7300 Real-Time PCR System（美國(guó)ABI 公司）；穩(wěn)豪血糖儀（美國(guó)強(qiáng)生公司）；7080 全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；HZ-2011K-C 恒溫?fù)u床（太倉(cāng)華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；ACCUBLOCK 數(shù)顯干式加熱器（美國(guó)Labnet 公司）；221BR 半干轉(zhuǎn)膜儀（日本Bio-Rad 公司）；ERS301 電泳儀（美國(guó)CE 公司）；MDF-U73V 超低溫冰箱（日本Sanyo 公司）；Milli-Q Integral 3 純水機(jī)（美國(guó)Millipore 公司）。

2 方法

2.1 分組與給藥

根據(jù)文獻(xiàn)方法[14]，將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、津力達(dá)顆粒（3.8 g/kg）組，每組15 只。對(duì)照組小鼠喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料，其余各組小鼠喂食高脂飼料；津力達(dá)顆粒于研缽中研碎，溶于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，配制成質(zhì)量濃度為0.19 g/mL 的混懸液，給藥組ig 混懸液（20 μL/g），對(duì)照組和模型組ig 等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，1 次/d，連續(xù)13 周。每日觀察小鼠毛色、活動(dòng)、食欲、死亡及精神狀態(tài)狀態(tài)等情況；每周稱(chēng)定小鼠體質(zhì)量并記錄小鼠日攝食、飲水量。

2.2 小鼠腹腔內(nèi)葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)方法[15]，末次給藥后，各組小鼠ipD-葡萄糖（1.5 g/kg），分別在0、15、30、60、90、120 min 用血糖儀測(cè)定各組小鼠血糖水平。將各時(shí)間點(diǎn)的血糖值繪制成糖耐量曲線并計(jì)算血糖曲線下面積（GTT-AUC）。

2.3 津力達(dá)顆粒對(duì)小鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C 水平的影響

末次給藥后，各組小鼠禁食不禁水16 h 后，ip 10%水合氯醛（10 μL/g）麻醉，摘眼球取血，4 ℃、4000 r/min 離心15 min，吸取上清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組小鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。

2.4 津力達(dá)顆粒對(duì)小鼠肝臟和脂肪組織病理變化的影響

小鼠脫頸椎處死，置于冰上，剪開(kāi)背部皮膚，迅速分離兩側(cè)肩胛部棕色脂肪組織、附睪白色脂肪組織和肝臟組織，分別稱(chēng)定質(zhì)量，固定于4%多聚甲醛溶液中，脫水、切片、脫蠟、水化、染色、封片后進(jìn)行常規(guī)HE 染色，于顯微鏡下觀察各組小鼠肝臟、脂肪組織病理變化。

2.5 津力達(dá)顆粒對(duì)小鼠肝臟和脂肪組織中FGF21/AMPK 通路相關(guān)基因表達(dá)的影響

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)提取脂肪和肝臟組織的總RNA 并合成cDNA，進(jìn)行qRT-PCR 分析。引物序列：FGF21 上游引物為5’-TGGAATGGATGAGATCTAGAGTTGG-3’、下游引物為5’-GAGCTCCAGGAGACTTTCTGGA-3’；FGFR1 上游引物為5’-TACAAGGTTCGCTATGCCAC-3’、下游引物為5’-TGCGGAGATCGTTCCACGAC-3’；GAPDH 上游引物為5’-CCTGGAGAAACCTGCCAAGTATG-3’、下游引物為5’-GAGTGGGAGTTGCTGTTGAAGTC-3’。

2.6 津力達(dá)顆粒對(duì)小鼠肝臟和脂肪組織中FGF21/AMPK 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

分別稱(chēng)取肝臟、脂肪組織，研磨后加入50 μL含蛋白酶抑制劑的RIPA 蛋白裂解液，于冰上裂解30 min，使用超聲波細(xì)胞破碎儀破碎細(xì)胞，4 ℃、12 000 r/min 離心20 min，吸取上清液，按照BCA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定蛋白質(zhì)量濃度，加入蛋白上樣緩沖液，95 ℃加熱10 min，使蛋白變性。蛋白樣品經(jīng)12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF 膜，封閉2 h 后，分別加入FGF21、FGDR1、Klotho、AMPK、p-AMPK、SIRT1、GADPH 抗體，4 ℃孵育過(guò)夜；加入二抗，孵育1 h。采用Odyssey成像系統(tǒng)掃描并通過(guò)圖像分析軟件進(jìn)行分析。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠體質(zhì)量和脂質(zhì)累積的影響

圖1 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠體質(zhì)量的影響 (±s,n=15)Fig.1 Effect of Jinlida Granules on body weight of obese mice (±s,n=15)

圖2 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠棕色脂肪質(zhì)量 (A)、白色脂肪質(zhì)量 (B)、肝臟質(zhì)量 (C)、食物攝入量 (D) 和飲水量 (E) 的影響 (±s,n=15)Fig.2 Effect of Jinlida Granules on brown fat weight (A),white fat weight (B),liver weight (C),food intake (D),and water intake (E) of obese mice (±s,n=15)

如圖1所示，與對(duì)照組比較，自第1 周起，模型組小鼠體質(zhì)量顯著升高（P＜0.05、0.01、0.001）；與模型組比較，自第3 周起，津力達(dá)顆粒組小鼠體質(zhì)量顯著降低（P＜0.01、0.001）。如圖2所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠棕色脂肪質(zhì)量、白色脂肪質(zhì)量、肝臟質(zhì)量明顯升高（P＜0.05、0.001），食物攝入量和飲水量顯著降低（P＜0.001）；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠棕色脂肪質(zhì)量、白色脂肪質(zhì)量、肝臟質(zhì)量顯著降低（P＜0.05、0.001），食物攝入量和飲水量無(wú)明顯變化。

如圖3所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠脂肪細(xì)胞體積增大，肝臟脂肪性空泡增多；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組棕色脂肪組織和白色脂肪組織細(xì)胞體積變小，肝臟脂肪變性程度減輕。表明津力達(dá)顆粒可有效預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠棕色脂肪組織、白色脂肪組織、肝臟脂質(zhì)積累。

3.2 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠糖脂代謝紊亂的影響

圖3 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠棕色脂肪組織、白色脂肪組織和肝臟組織病理變化的影響 (HE,×200)Fig.3 Effect of Jinlida Granules on pathological changes of brown adipose tissue,white adipose tissue,and liver tissue in obese mice (HE,× 200)

糖脂代謝紊亂是高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠的顯著特征。如圖4所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平明顯升高（P＜0.001）；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠血清TG、LDL-C 水平顯著降低（P＜0.01、0.001），HDL-C 水平顯著升高（P＜0.001）。如圖5所示，與對(duì)照組比較，模型組不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平及GTT-AUC 均明顯升高（P＜0.001），葡萄糖耐量受損明顯；與模型組比較，津力達(dá)顆粒可顯著改善葡萄糖注射后的血糖水平（P＜0.01、0.001）及GTT-AUC（P＜0.001）。表明津力達(dá)顆粒可有效改善高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠糖脂代謝紊亂。

圖4 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠血清TC (A)、TG (B)、LDL-C (C) 和HDL-C (D) 水平的影響 (±s,n=15)Fig.4 Effect of Jinlida Granules on levels of TC (A),TG (B),LDL-C (C),and HDL-C (D) in serum of obese mice(±s,n=15)

3.3 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠肝臟FGF21/AMPK 通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響

如圖6-A、B 所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠肝臟FGF21 mRNA 水平升高，F(xiàn)GFR1 mRNA 水平降低；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠肝臟FGF21、FGFR1 mRNA 水平均顯著升高（P＜0.05、0.01）。如圖6-C、D 所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠肝臟FGFR1、p-AMPK/AMPK 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05），Klotho、AMPK、p-AMPK 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05、0.01、0.001）；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠肝臟FGF21、p-AMPK、p-AMPK/AMPK 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05、0.001），Klotho、AMPK、SIRT1 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。表明津力達(dá)顆粒可有效激活FGF21/AMPK 信號(hào)通路，從而改善肝臟脂質(zhì)代謝紊亂。

3.4 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠脂肪組織 FGF21/AMPK 通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響

如圖7-A 所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠脂肪組織FGF21 mRNA 水平降低；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠脂肪組織FGF21 mRNA 水平顯著升高（P＜0.01）。如圖7-B、C 所示，與對(duì)照組比較，模型組小鼠脂肪組織FGFR1 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.01），Klotho、p-AMPK、SIRT1 蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05、0.01、0.001）；與模型組比較，津力達(dá)顆粒組小鼠脂肪組織FGF21、AMPK、p-AMPK 蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.05、0.001）。表明津力達(dá)顆粒可有效激活FGF21/AMPK信號(hào)通路，從而改善脂肪組織脂質(zhì)代謝紊亂。

4 討論

研究表明，F(xiàn)GF21 可促進(jìn)能量消耗、脂肪利用和脂質(zhì)排泄，F(xiàn)GF21 已成為治療肥胖、血脂異常、2 型糖尿病、脂肪肝疾病、代謝綜合征的新型靶點(diǎn)[16-17]。在肥胖小鼠中，F(xiàn)GF21 的激活可減少脂質(zhì)積累、改善葡萄糖耐量，進(jìn)而增強(qiáng)胰島素敏感性[18-20]；此外，F(xiàn)GF21 可有效增加棕櫚酸酯誘導(dǎo)的分化型人骨骼肌成肌細(xì)胞HSMMs 對(duì)葡萄糖的攝取，可有效改善相關(guān)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[21]。然而，肥胖小鼠和2 型糖尿病患者中FGF21 表達(dá)升高，但其胰島素敏感性降低、下游信號(hào)調(diào)節(jié)受損，推測(cè)可能與機(jī)體在肥胖狀態(tài)下，產(chǎn)生FGF21 抵抗，F(xiàn)GF21代償性增高密切相關(guān)[22-23]。此外，相關(guān)研究表明，艾蒿[24]、新橙皮苷[25]、艾塞那肽[26]、n-3 長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸[27]等中藥及小分子化合物可激活FGF21，改善肝臟、脂肪組織脂質(zhì)積累。

圖5 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平 (A) 和GTT-AUC (B) 的影響 (±s,n=15)Fig.5 Effect of Jinlida Granules on blood glucose level at different time points (A) and GTT-AUC (B) in obese mice(±s,n=15)

圖6 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠肝臟FGF21/AMPK 通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響 (±s)Fig.6 Effect of Jinlida Granules on expression of FGF21/AMPK pathway related genes and proteins in liver of obese mice(±s)

圖7 津力達(dá)顆粒對(duì)肥胖小鼠脂肪組織FGF21/AMPK 通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響 (±s)Fig.7 Effect of Jinlida Granules on expression of FGF21/AMPK pathway related genes and proteins in adipose tissue of obese mice (±s)

中成藥津力達(dá)顆粒由人參、黃精、蒼術(shù)、苦參、麥冬、生地黃、制何首烏、山茱萸、茯苓、佩蘭、黃連、知母、淫羊藿、丹參、葛根、荔枝核、地骨皮17 味中藥組成。人參為君藥，補(bǔ)益脾之絡(luò)氣，使脾氣旺而津液自生。黃精滋養(yǎng)脾陰，輔助人參，使脾陰足，運(yùn)化自健；蒼術(shù)燥濕解郁運(yùn)脾，苦參清熱燥濕，使熱清濕化，氣化自暢，3 藥共為臣藥，養(yǎng)脾陰、化脾濕、瀉脾熱、運(yùn)脾氣，并行不悖，相得益彰。佐藥麥門(mén)冬生津止渴，生地黃壯水滋陰，何首烏善補(bǔ)益肝腎；山茱萸補(bǔ)腎澀精，諸藥共佐黃精，不僅脾陰得滋，肝腎之陰亦得以滋填。佐藥茯苓，淡滲利濕，助脾健運(yùn)，佩蘭芳香悅脾，以除陳氣，用佐蒼術(shù)，奏效尤速。黃連清熱燥濕、瀉火解毒用之佐苦參效力倍增，又佐以知母，滋陰降火、清熱止渴。地骨皮去骨熱消渴，佐苦參，瀉肝腎虛火而不傷陰。淫羊藿扶腎陽(yáng)而溫脾土，丹參祛瘀生新、調(diào)經(jīng)順脈亦為佐藥。葛根、荔枝核共為使藥，葛根“氣味皆薄，最能升發(fā)脾胃清陽(yáng)之氣”，荔枝核“行散滯氣”使得氣機(jī)暢達(dá)，津液自易輸布；二藥共用，調(diào)暢氣機(jī)，使益氣滋陰之藥直達(dá)病所。全方諸藥合用，補(bǔ)益脾之絡(luò)氣、滋養(yǎng)脾之陰津，配以清脾熱、化脾濕、溫脾陽(yáng)、活血、行氣諸藥，治脾諸法并行不悖、相得益彰，使脾氣旺而運(yùn)化健，脾陰足而津自生，消渴病諸癥悉除。津力達(dá)顆粒中的活性成分達(dá)森海因鈉、葛根素、丹酚酸B、淫羊藿苷B、淫羊藿苷C、淫羊藿苷、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rc 和人參皂苷Rb2具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化、清除氧自由基、抑制炎癥反應(yīng)等多種藥理活性[28-29]。

長(zhǎng)期的高脂飲食飼養(yǎng)可導(dǎo)致小鼠能量失衡、代謝紊亂。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠脂肪和肝臟組織中產(chǎn)生了脂質(zhì)蓄積和胰島素抵抗；津力達(dá)顆粒顯著抑制高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠體質(zhì)量、脂肪組織和肝臟組織質(zhì)量，顯著降低血清TG、LDL-C 水平，升高血清HDL-C 水平，并有效改善葡萄糖耐量。表明津力達(dá)顆粒可有效改善脂質(zhì)代謝紊亂及葡萄糖穩(wěn)態(tài)，可顯著降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠發(fā)生高脂血癥和胰島素抵抗的風(fēng)險(xiǎn)。

為了考察津力達(dá)顆粒調(diào)節(jié)糖脂代謝作用與FGF21 的相關(guān)性，本研究檢測(cè)了肝臟、脂肪組織FGF21 及其相關(guān)受體基因及蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示，津力達(dá)顆粒組小鼠肝臟FGF21 mRNA 和蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)，表明津力達(dá)顆粒可激活FGF21，從而改善肝臟脂質(zhì)積累。FGF21 能否發(fā)揮生物活性與其受體FGFR1、共受體β-Klotho 密切相關(guān)[30]。結(jié)果顯示，津力達(dá)顆粒組小鼠肝臟FGFR1 mRNA水平升高，表明FGF21 敏感性增加，但FGFR1 蛋白表達(dá)水平未見(jiàn)明顯差異，可能與其磷酸化水平相關(guān)。津力達(dá)顆粒組共受體β-Klotho 蛋白水平較模型組降低，但顯著高于對(duì)照組，此結(jié)果與在高熱量喂養(yǎng)條件下，Klotho-/-小鼠能量升高、β-Klotho 效能降低，產(chǎn)生抵抗，進(jìn)而代償性分泌增多一致[31]；津力達(dá)顆粒組小鼠脂肪組織FGF21 mRNA 表達(dá)顯著上調(diào)，表明津力達(dá)顆粒可激活FGF21、改善脂肪蓄積；津力達(dá)顆粒組FGFR1 蛋白表達(dá)升高，表明FGF21 敏感性增加，β-Klotho 未出現(xiàn)顯著差異。綜上，津力達(dá)可通過(guò)激活FGFR1/β-Klotho 受體復(fù)合物，進(jìn)一步增強(qiáng)FGF21 在調(diào)節(jié)葡萄糖、脂質(zhì)代謝、保存能量穩(wěn)態(tài)方面的積極作用。

FGF21 可能通過(guò)激活A(yù)MPK 調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞的能量穩(wěn)態(tài)，從而增強(qiáng)線粒體的氧化功能[32]。AMPK作為細(xì)胞能量傳感器，AMPK 的激活可調(diào)節(jié)細(xì)胞和體內(nèi)的能量代謝，改善胰島素敏感性[33]。然而，當(dāng)暴露于持續(xù)的代謝負(fù)擔(dān)時(shí)，如代謝綜合征或2 型糖尿病中，AMPK 活性失調(diào)[34]。本研究進(jìn)一步考察肝臟、脂肪組織AMPK 信號(hào)通路中相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，津力達(dá)顆粒組小鼠肝臟、脂肪組織中p-AMPK、p-AMPK/AMPK 蛋白表達(dá)水平明顯升高，表明AMPK 途徑在津力達(dá)顆粒激活FGF21、改善糖脂代謝中發(fā)揮重要作用。此外，SIRT1 作為AMPK 的下游分子，可調(diào)控能量代謝相關(guān)基因表達(dá)[35]。津力達(dá)顆粒可有效降低小鼠肝臟中SIRT1 蛋白表達(dá)水平，可能與其中樞抑制效應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)，而脂肪組織中其蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化。

綜上所述，津力達(dá)顆粒可有效改善高脂飲食誘導(dǎo)的代謝紊亂，如肥胖、血脂異常、葡萄糖耐受異常、肝臟脂肪變性、白色脂肪過(guò)度蓄積等。津力達(dá)顆粒對(duì)肝臟、白色脂肪組織形態(tài)和分子生物學(xué)有顯著影響。此外，津力達(dá)顆粒可通過(guò)激活FGF21/AMPK 信號(hào)通路，改善肝臟、脂肪組織脂質(zhì)代謝紊亂。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突