李威特,江 霖,吳佳韓,陳 婷,羅君誼,孫加節,張永亮,習欠云
(華南農業大學 動物科學學院 廣東省動物營養調控重點實驗室/國家生豬種業工程技術中心,廣東 廣州 510642)
MicroRNA(miR)是一類由內源基因編碼的長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子,它們參與轉錄后基因表達的調控[1]。作為近年來研究的新的調控介導熱門分子,且在機體中參與了基本代謝中的能量代謝、糖類合成、脂肪合成、細胞發育等過程[2-4];同時,microRNA可參與疾病的進程,作為疾病治療的新靶標[5-7]。此前,對參與胰島素調節的microRNA的研究發現,miR-378可以靶向降低p110α基因的表達,抑制胰島素信號的傳遞[8];miR-183的表達減少,會提高牙髓細胞轉化為胰島細胞的分化效率[9];另有研究發現,下調miR-181a可以上調Sirtuin-1基因表達,并改善胰島素敏感性。但是,目前對參與到胰島素信號傳導的microRNA并沒有全部被發現。本試驗為了研究潛在的microRNA參與到胰島素信號傳導的過程,選擇了5種microRNA(miR-146a-5p、miR-143a-3p、miR-125b-2、miR-130a-3p和miR-28a-3p)為研究目標,觀察胰島素對他們的影響,為之后進一步的研究提供有效的數據。
1.1 試驗材料人胰島素(I2643,Sigma);PCR儀(2720thermalcycle,廣州吉泰生物科技有限公司);實時熒光定量PCR儀(Stratagene,古泰生物科技有限公司);羅氏血糖儀活力型(ROCHE,瑞士)。
1.2 實驗動物miR-130a全身性敲除小鼠由賽業(廣州)生物科技有限公司制備。試驗小鼠的擴繁和飼養于華南農業大學動物實驗中心,遵循SPF級動物飼養條件。實驗動物的飼養和應用遵照《美國國立衛生研究院實驗動物應用指南》進行,并通過了華南農業大學實驗動物倫理委員會的批準。……