高表達線粒體融合蛋白2(MFN2)可抑制高BHBA活化的奶牛肝細胞NF-κB炎性通路

左冉坤，遲 良，董記紅，李心慰，王 哲，劉國文，劉煥奇*

(1.青島農業大學 動物醫學院，山東 青島 266109；2.吉林大學 動物醫學學院,吉林 長春 130062)

圍產期(通常是指產前3周和產后3周)是奶牛泌乳周期中非常關鍵的一個時期。產后奶牛由于干物質攝入減少，泌乳啟動，導致能量需求增加，使奶牛機體處于能量負平衡狀態，進而動員脂肪，脂肪分解增加，導致高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid，NEFA)血癥。當肝細胞吸收大量NEFA，超過了自身代謝能力時，可造成NEFA不完全被氧化，產生大量酮體，如β-羥丁酸(β-hydroxybutyrate，BHBA)、乙酰乙酸和丙酮，造成酮病的發生[1]。研究表明，酮病奶牛肝臟炎性水平顯著增加，肝臟NF-κB炎性通路顯著激活，炎性細胞因子TNF-α和IL-1β等濃度顯著升高[2-3]，與酮病奶牛的高BHBA血癥密切相關。

線粒體融合蛋白2(mitofusin 2，MFN2)，是定位于線粒體外膜的高度保守的GTP酶，能參與線粒體外膜的融合，對線粒體功能的發揮起著重要的作用[4-6]。而線粒體是脂肪酸氧化的主要場所[7-8]，并且線粒體的功能與NF-κB通路的活化有關[9]，然而，MFN2對奶牛肝細胞NF-κB通路的影響尚未見報道。因此，本研究采用Western blot和qRT-PCR技術檢測NF-κB炎性通路關鍵分子的蛋白和基因表達，探討高表達MFN2對高BHBA活化的NF-κB通路的影響，為奶牛酮病臨床病理學研究提供理論依據。

1 材料方法

1.1 主要試劑雙抗(青鏈霉素)、Tris和地塞米松均購自Sigma公司；胎牛血清和RPMI-1640購自Gibco公司；Trizol和Premix Ex-Taq購自TaKaRa公司。

1.2 奶牛肝細胞的分離與培養采用兩步灌流法分離原代肝細胞[10]。手術切除荷斯坦犢牛肝尾狀葉，用灌流液A (140 mmol/L NaCl,10 mmol/L HEPES,6.7 mmol/L KCl,0.5 mmol/L EDTA,2.5 mmol/L 葡萄糖;pH7.2～7.4,37℃)灌注肝臟12 min，流速為50 mL/min。然后用……