江原鈍綏螨低溫貯藏技術

張栩浩 張貝 鄭薇薇 張宏宇

摘要 ：柑橘全爪螨Panonychus citri是湖北省柑橘園中常見害螨，可造成柑橘樹落花、落葉、落果。在生產無公害水果時利用生物防治技術來控制果園中的害蟲是一項重要技術。江原鈍綏螨Amblyseius eharai在湖北省柑橘園中是柑橘全爪螨的優勢捕食螨。利用江原鈍綏螨控制柑橘全爪螨的技術中需要考慮到江原鈍綏螨的低溫貯藏問題。本試驗研究了低溫貯藏過程中的溫度和冷藏時間對江原鈍綏螨的影響。結果表明，江原鈍綏螨在5、7、9℃這3種冷藏溫度下存活率和7 d內產卵數量不同。冷藏5～15 d內，不同溫度冷藏后存活率無顯著性差異，但用7℃冷藏可使該螨有較高的產卵量，產卵量在17.1～18.1粒之間;冷藏20～60 d內用5℃冷藏可使該螨有較高的存活率和較高的產卵量，其存活率在26.7%～66.7%之間，產卵量在13.3～17.1粒之間;由此可見，冷藏時間在15 d內用7℃冷藏效果最佳;冷藏時間為20～60 d，用5℃冷藏會使該螨的存活率和冷藏后產卵量都最佳。本研究可為江原鈍綏螨低溫貯藏技術奠定理論基礎，對害螨生物防治具有重要的實踐指導價值。

關鍵詞 ：江原鈍綏螨; 低溫貯藏; 存活率; 產卵量

中圖分類號： S 476.2

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2019535

Cold storage technology of Amblyseius eharai

ZHANG Xuhao#， ZHANG Bei#， ZHENG Weiwei*， ZHANG Hongyu*

（College of Plant Science & Technology， Institute of Urban and Horticultural Entomology， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China）

Abstract ：Panonychus citri is a common pest mite in citrus orchards in Hubei province， causing blossom loss， fallen leaves and fallen fruits in citrus. The use of biocontrol techniques to manage pests in orchards plays an important role in the production of pollutionfree fruits. Amblyseius eharai is a dominant predator mite of P.citri in citrus orchards in Hubei. The cold storage of A.eharai needs to be considered in applying A.eharai to control of P.citri. This study was aimed to investigate the effects of temperature and cold storage time on A.eharai in the cold storage process. The results showed that A.eharai exhibited different survival rates and amounts of oviposition in seven days under three cold temperatures （5， 7℃ and 9℃）. There was no significant difference in the survival rate of the mite after 5-15 d of cold storage at different temperatures， but the mites had a higher egglaying capacity when stored at 7℃. The number of eggs was approximately 17.1-18.1. Refrigeration at 5℃ for 20-60 d gave rise to higher survival rates （26.7% to 66.7%） and more egg deposition （13.3 to 17.1）. Therefore， 7℃ is the best choice within 15 d of cold storage， but 5℃ can result in the best survival rate and the most egg deposition if stored for 20-60 d. This study lays a theoretical foundation for the cold storage technology of A.eharai， and provides an important practical guidance for biological control of pest mites.

Key words ：Amblyseius eharai; refrigeration; survival rate; amount of oviposition

柑橘全爪螨Panonychus citri是一種廣泛分布于我國南方各地的常見害螨。近年來隨著全球氣候變暖，柑橘全爪螨的為害期變長，發育速度加快，一年可發生15～18代。柑橘全爪螨的幼螨、若螨、成螨都能吸食柑橘葉片、嫩枝、幼果等部位的汁液。使受害部位由綠轉白，更可導致落葉、落花、落果[1]。柑橘全爪螨的傳統防治方法大多使用化學藥劑。然而傳統化學藥劑高毒性、高殘留，容易在水果上產生農藥污染，不利于生產無公害食品。而且近年來由于農藥的不合理使用，柑橘全爪螨出現了不可忽視的抗藥性[2]。而綠色防控技術可以在減輕害蟲為害的同時生產出健康無公害的水果。近年來常見的綠色防控技術之一就是利用天敵生物來控制害蟲。

天敵生物可分為捕食性天敵和寄生性天敵，目前防控中常使用捕食螨控制害螨為害。植綏螨科Phytoseiidae有許多捕食性天敵。例如在水杉上釋放黃瓜新小綏螨Neoseiulus cucumeris控制劉氏短須螨Brevipalpus lewisi，3個月后防效可達75.28%[3]。利用黃瓜新小綏螨在柑橘園中防治柑橘全爪螨，釋放20 d后具有明顯效果，而且具有較長的防效持續期[4]。在溫室草莓種植中，利用黃瓜新小綏螨防治二斑葉螨Tetranychus urticae，最高防效可達90%以上[5]。由此可見，捕食螨具有重要的實用價值。

在使用天敵生物防治害蟲時，理想情況是生產出天敵生物后立刻在田間釋放，此時控制害蟲的效果是最好的。但實際上生產和應用往往不同步，此時，就需要考慮天敵生物的貯藏問題。天敵生物的貯藏技術以冷藏貯藏最為常見。前人的研究多數關注寄生蜂、瓢蟲等天敵昆蟲，例如異色瓢蟲Harmonia axyridis在冷藏后產卵量提高，同時捕食能力沒有變化[6]。白蛾周氏嚙小蜂Chouioia cunea的蛹在誘導進入滯育后進行冷藏，可以極高地提高其出蜂率，在3℃貯藏45 d，出蜂率從40%提高到95%左右[7]。而冷藏對稻螟赤眼蜂Trichogramma japonicum的產卵量、壽命、種群趨勢等性狀產生了負面影響[8]。二化螟盤絨繭蜂Cotesia chilonis在冷藏后也受到了相似的負面影響[9]。在一些針對捕食螨的低溫貯藏技術的研究中發現，有良好保濕作用的冷藏基質可以提高智利小植綏螨Phytoseiulus persimilis冷藏后的存活率[10]。在研究加州新小綏螨Neoseiulus californicus的低溫貯藏技術時發現，以葉片和葉螨作為貯藏基質比花粉為貯藏基質更有利于該螨的存活，并且發現溫度控制在4～7℃，貯藏時間不長于20～25 d時存活率最高可達95.56%[11]。考慮到具有應用價值的捕食螨種類較多[1215]，而且螨的種群延續與生態環境關系較大，不同地區具有不同的優勢種群，因此，開發與本地氣候相適宜的捕食螨相關技術非常必要。

江原鈍綏螨Amblyseius eharai是湖北省天然存在的一種捕食螨，也是柑橘園中柑橘全爪螨的優勢捕食螨。該螨在低溫貯藏中的表現研究較少。本試驗對江原鈍綏螨在低溫冷藏后群體產卵量、存活率的變化的研究將為低溫貯藏江原鈍綏螨提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試螨源

試驗所用江原鈍綏螨來源于華中農業大學園藝與城市昆蟲研究所，采自湖北省宜昌市當陽農戶的柑橘樹上，在室內以柑橘全爪螨為食進一步飼養純化而得。使用實驗室前人優化過的飼養方法進行飼養，人工飼料配方為麥麩80%、蒸餾水10%、酵母6%、茶樹花粉4%（購自武漢康思農蜂業華中農業大學店）。捕食螨置于（24±1）℃，相對濕度（90±5）%，光周期L∥D=16 h∥8 h智能人工氣候培養箱中飼養。在實驗室內采用上述方法和條件培養多代作為供試材料。

1.2 試驗方法

試驗設3個低溫梯度，分別為5、7、9℃。每個溫度梯度設不同的冷藏時間，從0～60 d，每隔5 d設置1個冷藏時間，冷藏時間為0 d即正常飼養作為對照。按1.1節的方法飼養，每個處理設3次重復。

冷藏處理：每個溫度準備36個小飼養盒（3次重復×12個冷藏時間），對照組準備3個小飼養盒（即3次重復）。每個盒內裝40 g飼料，用毛筆小心地挑取100頭粉螨放到飼養盒內。再用毛筆小心挑取10頭24 h內交配過的江原鈍綏螨雌成螨，每盒10頭。將放入江原鈍綏螨的飼養盒扣緊，并在飼養盒上貼上標簽，用記號筆標明處理溫度、存放日期。然后置于對應溫度、全黑暗的智能人工氣候箱中。

每個冷藏時間結束后在室溫（25℃）條件下檢查江原鈍綏螨的存活情況。將盒內飼料倒在大培養皿里，放在顯微鏡下觀察，5 min內能夠活動的江原鈍綏螨數量視為存活數量。然后對存活的江原鈍綏螨懷卵雌成螨進行產卵量的調查。每個處理隨機取15頭存活懷卵雌成螨進行測試，（在冷藏后期存活率較低時每個處理隨機取3頭）。每個處理3個重復。對每頭處理過的江原鈍綏螨雌成螨產卵量連續追蹤記錄7 d。在此期間，使用正常飼養的方法飼養存活的雌成螨。

1.3 數據統計與分析

數據采用SPSS 23軟件進行單因素方差分析和多重比較。

2 結果與分析

2.1 冷藏溫度和冷藏時間對江原鈍綏螨存活率的影響

江原鈍綏螨在不同冷藏溫度和不同冷藏時間下存活率見表1，由表中數據得出，3種冷藏溫度條件下，江原鈍綏螨的存活率都隨著冷藏時間的延長而降低。其中，在5℃條件下，冷藏25 d時該螨的存活率為63.3%，相比于對照組（0 d）96.7%的存活率顯著降低;5～20 d，該螨的存活率在66.7%～86.7%，無顯著差異;25～40 d，該螨的存活率在50.0%～63.3%，無顯著差異;45～55 d，該螨的存活率在33.3%～46.7%，無顯著差異;60 d時，江原鈍綏螨的存活率降低至26.7%。

在7℃條件下，冷藏25 d時該螨的存活率為60.0%，顯著低于對照組（0 d）96.7%的存活率;5～20 d該滿的存活率在73.3%～90.0%，無顯著差異;25～35 d內該螨的存活率在50.0%～60.0%，無顯著差異;40～45 d該滿的存活率在26.7%～40.0%，無顯著差異;50～60 d該螨的存活率在16.7%～23.3%，無顯著差異。

在9℃條件下，冷藏20 d時該螨的存活率為70.0%，顯著低于對照組（0 d）96.7%的存活率;5～15 d該螨的存活率在80.0%～96.7%，無顯著差異;

20 d與25 d該螨的存活率分別為70.0%和56.7%，兩者無顯著差異;30～40 d該螨的存活率在36.7%～53.3%，無顯著差異;45～55 d該螨的存活率在13.3%～23.3%，無顯著差異;60 d時該螨的存活率減少至10.0%。

同一貯藏時間不同貯藏溫度江原鈍綏螨存活率對比可以發現，整體趨勢是溫度越低，存活率下降越慢。5～10 d時，9℃貯藏存活率最高，15～20 d時，7℃貯藏存活率最高，25～60 d時，5℃貯藏存活率最高。

2.2 冷藏溫度和冷藏時間對江原鈍綏螨冷藏后產卵量的影響

2.2.1 5℃下不同冷藏時間對江原鈍綏螨冷藏后產卵高峰期的影響

在5℃冷藏條件下，江原鈍綏螨經歷不同冷藏時間后單頭雌蟲7 d內產卵量結果見表2。其結果顯示，冷藏0、20、40 d后，在第3天產卵量最多，分別為2.2、3.3、3.0粒。冷藏5 d后，在第3、4天產卵量最多，均為3.3粒。冷藏10、25、30 d后，在第5天產卵量最多，分別為3.1、3.3、3.5粒。冷藏15 d后，在第6天產卵量最多，為2.7粒。冷藏35、45、50、55 d后，在第4天產卵量最多，分別為3.3、3.3、3.7、3.7粒。冷藏60 d后，在第2天產卵量最多，為3.3粒。綜上，在5℃條件下，冷藏時間對江原鈍綏螨冷藏后產卵量的影響較大，總體來講，有8個處理在第3天或第4天出現1次最大產卵量，可認為產卵高峰在5℃冷藏后第3天或第4天出現。

2.2.2 7℃下不同冷藏時間對江原鈍綏螨冷藏后產卵高峰期的影響

在7℃冷藏條件下，江原鈍綏螨經歷不同冷藏時間后單頭雌蟲7 d內產卵量結果見表3。其結果顯示，冷藏0、30 d后，在第3天產卵量最多，分別為2.2粒，2.9粒。冷藏5、15、20、45、50、60 d后，在第4天產卵量最多，分別為3.2、3.3、2.5、3.0、3.7、3.0粒。冷藏10 d后，在第4、5天產卵量最多，均為3.3粒。冷藏25 d后，在第6天產卵量最多，為2.9粒。冷藏35、55 d后，在第5天產卵量最多，分別為3.3、3.0粒。冷藏40 d后，在第3、4、6天產卵量最多，均為2.7粒。綜上，可以發現在7℃下，冷藏時間差異對江原鈍綏螨冷藏后產卵量的影響較大，總體來講，有10個處理在第3天或第4天出現1次最大產卵量，可認為產卵高峰在7℃冷藏后第3天或第4天出現。

2.2.3 9℃下不同冷藏時間對江原鈍綏螨冷藏后產卵高峰期的影響

在9℃冷藏條件下，江原鈍綏螨經歷不同冷藏時間后單頭雌蟲7 d內產卵量結果見表4。其結果顯示，冷藏0 d后，在第3天產卵量最多，為2.2粒。冷藏5、10、35 d后，在第5天產卵量最多，分別為3.3、3.1、3.3粒。冷藏15 d后，在第3、4天產卵量最多，均為2.9粒。冷藏20、25、30、40、45、50、55、60 d后，在第4天產卵量最多，分別是2.8、2.8、3.1、3.3、3.7、3.7、3.0、3.3粒。綜上，可以發現在9℃下，冷藏時間差異對江原鈍綏螨冷藏后產卵量的影響較大，總體來講，有10個處理在第3天或第4天出現1次最大產卵量，可認為產卵高峰在9℃冷藏后第3天或第4天出現。

2.2.4 不同冷藏時間和冷藏溫度對江原鈍綏螨冷藏后7 d內產卵總數的影響

江原鈍綏螨雌成蟲在不同冷藏溫度和冷藏時間后7 d內總產卵量見表5。結果表明，3種冷藏溫度下，冷藏后單雌7 d內總產卵量在數值上均高于對照組（0 d）雌成蟲。

5℃冷藏溫度下，冷藏5 d處理的單雌7 d內總產卵量最多，為19.8粒，顯著高于對照組（0 d）、冷藏10、15、45、50、55、60 d的總產卵量。7℃冷藏溫度下，冷藏15 d處理的單雌7 d內總產卵量最多，為18.1粒。在數值上比冷藏時間5、10 d的產卵量分別高出1.0、0.9粒，相比于其他冷藏時間高出3.0粒以上。在統計學上顯著高于對照組（0 d）的總產卵量。9℃冷藏溫度下，冷藏5、15 d處理的單雌7 d內總產卵量最多，分別為16.9粒和16.8粒，顯著高于對照組（0 d）的總產卵量。

該結果表明，冷藏溫度和冷藏時間的差異對江原鈍綏螨冷藏后單雌7 d內總產卵量的影響較大。總體來講，該螨在5、7℃和9℃下冷藏后，產卵量相比于未冷藏有顯著增加。但是暫未發現產卵量增長規律與冷藏時間、冷藏溫度存在明顯關系。

3 討論

本試驗結果表明，不同的冷藏溫度和冷藏時間均能對江原鈍綏螨的存活率和冷藏后的產卵量產生較大影響。簡單來說，短期冷藏可以增強江原鈍綏螨的產卵能力，但是冷藏時間過長也會降低其存活率。因此在生產實踐中應該根據實際情況靈活調整冷藏時間。在不同冷藏溫度和冷藏時間對江原鈍綏螨存活率的影響試驗中，隨著冷藏時間從0 d延長到60 d，該螨的存活率從96.7%降低至10.0%～26.7%。存活率隨著冷藏時間的延長而降低，所以應盡量做到生產之后立即使用。不得不冷藏時，應該根據需要冷藏的時間合理地選擇冷藏溫度，將冷藏損失盡可能降低。例如，從產地運輸到使用地的時間一般不會大于5 d，在冷鏈運輸時可使用9℃進行冷藏，既節省冷藏費用，又能保持與對照組相近的存活率。銷售時，預期貨架期在5～15 d內用7℃冷藏可使該螨有較高的存活率和較高的7 d產卵量;預期貨架期在20～35 d內，5℃冷藏可使該螨有較高的存活率和較高的7 d產卵量。3個溫度下冷藏40～60 d，存活率較低，所以不推薦冷藏超過35 d。

前人研究發現，捕食螨在低溫貯藏過程中的主要死亡原因為脫水、饑餓、凍傷。為此，前人采用低氣壓、高濕度貯藏的方法處理加州新小綏螨，在冷藏30 d時仍有近96%的存活率[1620]。應對饑餓死亡的方法通常是改變貯藏基質。一般來說有兩種方法，一種是在基質中添加捕食螨可以食用的花粉，但是效果并不理想。另一種是添加捕食螨的捕食獵物如螨、薊馬等。Morewood通過這種方式處理的智利小植綏螨在7.5℃冷藏28 d后具有97%的存活率[21]。針對凍傷死亡，可在基質中噴灑冷凍保護劑來保護捕食螨。例如Riddick等在冷藏智利小植綏螨時用5%～20%（V/V）的甘油作為保護劑，冷藏88 d后，噴灑20%甘油的捕食螨仍有22%的存活率，同時噴灑水的捕食螨僅有2%的存活率[22]。在冷藏前通過對捕食螨低溫馴化也可以提高其存活率，例如Jensen等將Gaeolaelaps aculeifer在10℃下馴化4 d后再于-2℃冷藏24 h，發現仍有80%的存活率，同等條件下，在20℃馴化的捕食螨僅有20%的存活率[23]。本試驗中在冷藏時為江原鈍綏螨提供了獵物和花粉，但是冷藏時間超過35 d后存活率小于50%，說明江原鈍綏螨冷藏期間死亡的主要原因可能不是饑餓，而是脫水死亡或者凍傷，具體原因需要進一步試驗來驗證。

在江原鈍綏螨7 d產卵量的試驗中，經過3種溫度冷藏后，第1天產卵量在多數情況下都低于其他幾天的產卵量。產卵的高峰大多集中在結束冷藏后的第3天、第4天。前人在加州新小綏螨的冷藏技術研究中，也發現了類似的情況，冷藏結束后的雌性成蟲需要1～2 d才能恢復產卵。這段恢復所需的時間與冷藏時間有關。10℃下冷藏10 d需要1 d恢復產卵，冷藏20 d時需要2 d[24]。綜合7 d的數據來看，冷藏5～10 d后的7 d總產卵量都高于對照組的產卵量。其原因可能是低溫環境更接近該螨越冬的生活環境，從而使其在經過冷藏以后進入了快速繁殖的模式。其他冷藏時間例如在5、7、9℃冷藏60 d后，7 d內產卵總數分別為14.0、14.7、16.3粒。其產卵總數相對于對照組的10.2粒來說還是比較高的。由此可見，限制江原鈍綏螨貯藏技術的瓶頸主要在存活率。因此，改良江原鈍綏螨冷藏技術的方向應該集中于研究如何提高該螨冷藏后的存活率。

根據本試驗結果，江原鈍綏螨在7、9℃冷藏15 d內，其存活率與對照組無顯著差異。同時，其7 d內產卵總數比對照組顯著增加。也就是說經過15 d內的7、9℃冷藏后，江原鈍綏螨的產卵能力出現顯著提高。說明在應用中根據實際情況，可以適當低溫處理江原鈍綏螨一段時間，從而提升一定的產卵能力。

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（責任編輯：楊明麗）