雌孕激素與HPV在宮頸癌發(fā)生中的交互作用及相關(guān)因素研究

張曉瑜，樊萍

(重慶市第五人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，重慶 400062)

宮頸癌是一種常見的女性惡性腫瘤，多發(fā)于35～45歲女性，且有逐年年輕化的趨勢[1]。宮頸癌的發(fā)展較為緩慢，從發(fā)生到發(fā)展過程漫長，可高達(dá)10年。此外，宮頸癌的早期臨床癥狀不明顯，不能及時確診和治療，給患者健康和生命造成威脅[2]。早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療是宮頸癌治療的關(guān)鍵，也是有效改善預(yù)后的關(guān)鍵。有研究[3]顯示，HPV與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，雌孕激素與之也有一定關(guān)系，且HPV與雌孕激素之間相互作用。本研究選擇72例宮頸癌患者和同時期的76名健康體檢者進(jìn)行研究，借以探討雌孕激素與HPV在宮頸癌發(fā)生中的相互作用以及與宮頸癌的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年6月至2019年12月重慶市第五人民醫(yī)院診治的72例宮頸癌患者作為研究對象，設(shè)為試驗(yàn)組；另選擇同時期在本院進(jìn)行體檢的76名健康女性作為研究對象，設(shè)為對照組。試驗(yàn)組患者年齡33～55歲，平均(44.36±9.55)歲；孕次0～5次，平均(2.01±1.04)次；產(chǎn)次0～4次，平均(1.33±1.04)次；腫瘤直徑(4.55±0.23)cm；Ⅰb2者29例，Ⅱa者24例，Ⅱb者19例；鱗癌67例，腺癌5例。對照組中，年齡32～57歲，平均(43.62±9.81)歲；孕次0～6次，平均(2.32±1.15)次； 產(chǎn)次0～4次，平均(1.35±1.02)次。本研究經(jīng)本院倫理委員會審核批準(zhǔn)同意，且兩組研究對象的年齡、孕產(chǎn)次等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。試驗(yàn)組納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)臨床資料完整；(2)經(jīng)病理檢測確診為宮頸癌；(3)病灶未發(fā)生轉(zhuǎn)移；(4)患者或家屬自愿簽署知情同意書。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)同時期體檢；(2)無婦產(chǎn)科現(xiàn)病史；(3)自愿參與研究。實(shí)驗(yàn)組和對照組排除標(biāo)準(zhǔn)[4]：(1)臨床資料不完整者；(2)合并惡性腫瘤者；(3)合并嚴(yán)重心、肝、腎疾病者；(4)哺乳期和妊娠期者；(5)不配合研究者。

1.2 方法

(1)標(biāo)本采集：通過宮頸刮片來采集對照組受試者的宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，并貯存-80 ℃中等待檢測。試驗(yàn)組患者的組織標(biāo)本于術(shù)后采集，貯存在液氮罐中等待檢測。在兩組受試者均處在卵泡期時，采集靜脈血3 mL，將分離的血清放置在-20 ℃冰箱中保存，等待檢測。(2)雌二醇(E2)和孕酮(P)水平檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(ELISA法)來檢測受試者的E2和P水平，試劑盒均來自美國Biocheck Inc公司。(3)HPVs、HPV16 E2 和 HPV16 E6的DNA序列檢測：分別采用酚-氯仿和異硫氰酸胍-酚氯仿提取法來提取試驗(yàn)組組織標(biāo)本和對照組宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中的DNA，對HPVL區(qū)的基因序列片段使用引物(所用引物序列見表1)，通過熱啟動聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測HPVs、HPV16 E2和E6的DNA。(4)計算：應(yīng)用生物學(xué)交互作用的相加作用模式對分析雌孕激素與HPV的相互作用。將HPVs、HPV16、E2、和P4個因素引入多元Logistic回歸模型，確定最終進(jìn)入多因素分析模型的變量。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組研究對象的E2和P水平；比較兩組研究對象的HPVs陽性率和HPV16陽性率；分析E2、P與HPV的交互作用；多因素分析宮頸癌發(fā)生中的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

表1 HPVs、HPV16 E2和HPV16 E6的DNA所用引物序列及長度

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象的雌二醇和孕酮水平比較

試驗(yàn)組的E2和P水平高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組研究對象的雌二醇和孕酮水平比較

2.2 兩組研究對象的HPVs和HPV16陽性率比較

經(jīng)檢測，試驗(yàn)組的HPVs和HPV16陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組研究對象的HPVs和HPV16陽性率比較[n(%)]

2.3 E2與HPV在宮頸癌發(fā)生中的交互作用分析

交互作用分析結(jié)果顯示，E2與 HPVs 呈正相加作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 E2與HPV在宮頸癌發(fā)生中的交互作用分析[n(%)]

2.4 孕酮與HPV在宮頸癌發(fā)生中的交互作用分析

交互作用分析結(jié)果顯示，P與 HPVs 不呈現(xiàn)相互作用，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

2.5 宮頸癌發(fā)生中相關(guān)因素的多元Logistic回歸分析

Logistic分析結(jié)果顯示，E2和HPVs對宮頸癌的發(fā)生有一定影響，且與宮頸癌的發(fā)生呈正相關(guān)(P<0.05)。見表6。

表5 P與HPV在宮頸癌發(fā)生中的交互作用分析[n(%)]

表6 宮頸癌發(fā)生中相關(guān)因素的多元Logistic回歸分析

3 討論

宮頸癌是一種常見的女性惡性腫瘤，發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，且臨床病死率較高，給廣大女性的身體健康和生命造成威脅[5]。宮頸癌的發(fā)展過程較長，且早期宮頸癌的臨床癥狀不明顯，若患者沒有得到及時診治貽誤最佳治療時機(jī)，會嚴(yán)重影響身體健康。

研究[6-8]表明，早婚早育、性生活年齡較小以及生產(chǎn)次數(shù)等是宮頸癌發(fā)病的相關(guān)危險因素。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者的E2水平、P水平、HPVs陽性率和HPV16陽性率均明顯高于健康對照組，提示宮頸癌發(fā)生還與HPV感染密切相關(guān)，降低宮頸癌發(fā)病率可以從控制HPV感染入手[9]。HPV感染導(dǎo)致癌變的原因有以下幾方面[10-12]：首先，HPV沒有細(xì)胞膜，組織特異性和細(xì)胞特異性較強(qiáng)；其次，HPV染色體進(jìn)入細(xì)胞后，其病毒核酸易與宿主細(xì)胞結(jié)合，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，損害細(xì)胞防御功能并促進(jìn)細(xì)胞增殖；此外，游離的HPV會感染宮頸粘膜上皮細(xì)胞促進(jìn)宮頸病變，并且HPV的編碼蛋白會與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白結(jié)合破壞其功能，導(dǎo)致細(xì)胞大量惡性增殖。

大量研究[13]顯示，高水平雌二醇會使得機(jī)體對HPV感染易感，二者協(xié)同作用促進(jìn)了宮頸病變的發(fā)生。E2通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞與胞漿受體結(jié)合，然后進(jìn)一步與HPV16靶基因控制區(qū)上激素應(yīng)答元件結(jié)合，從而促進(jìn)HPV16 E6和HPV16 E7的基因表達(dá)，增加宮頸癌發(fā)生的危險[14-15]。本研究應(yīng)用生物學(xué)交互作用的相加作用模式分析顯示，E2與 HPVs呈現(xiàn)正相加作用，這一結(jié)果與研究數(shù)據(jù)相符合，但并未發(fā)現(xiàn)P與HPV之間具有協(xié)同作用。此外，將HPVs、HPV16、P、E2引入宮頸癌發(fā)生的Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示E2和HPVs為最終變量，E2水平和HPVs陽性與宮頸癌發(fā)生呈正相關(guān)，這一結(jié)果表明E2水平升高可能是是HPV感染宮頸癌的協(xié)同作用因素，提示在臨床診斷過程中，同時出現(xiàn)HPV感染和高水平E2可以作為宮頸癌的有效篩查指標(biāo)。

綜上所述，高水平雌二醇和HPVs均是宮頸癌發(fā)生的相關(guān)因素，加強(qiáng)其檢查，有助于實(shí)現(xiàn)宮頸癌患者的早發(fā)現(xiàn)和早治療。