牙周修復中施加正畸力對牙周組織的影響

焉姝鶴，王海文，林茜茜，姜瑞，魯光偉

(1.西寧市第一人民醫院口腔正畸科；2.王海文診所口腔科，青海 西寧 810000)

牙周炎是由局部細菌所引起的一種慢性炎癥性疾病，其主要特征為牙齒支持組織被破壞、牙周附著物和骨質喪失[1]。牙周炎已影響著世界7.43億人口，是最常見的6大疾病之一[2-3]。雖然抗生素治療可減輕牙周組織的破壞，但由于牙周復雜的結構和細菌的耐藥性，很難完全清除牙周中的病原菌[4]。目前，牙周組織再生術是治療牙周炎的常用方法，其利用生物膜作用阻止齦溝上皮的跟面生長，通過誘導具有再生潛力的牙周膜細胞分化生長，進而形成新的牙周組織[5-6]。牙周組織再生術雖可改善患者癥狀，但因牙周組織解剖結構的復雜性和致病因素的多樣性，導致治療效果存在較大的差異，且易造成患者牙齒出現不同程度的錯位畸形，影響患者預后。而口腔正畸有利于重建口腔正常咬合關系，對改善牙周情況有重要意義[7]。此外，牙周炎常伴有不同程度的炎癥反應，炎癥反應程度體現了牙周炎病情的惡化程度[8]。基質金屬蛋白酶通過降解牙齦組織及其重塑在牙周炎的進展中起關鍵作用[9]，而牙周組織恢復重生功能是改善牙周炎的重要途徑，其中CXCL2、 CCL4和CCL7在牙周組織重塑中起到關鍵基因的作用[10]。因此，本研究通過探討牙周組織再生術施加正畸力對牙周組織情況的影響，以期為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2019年10月西寧市第一人民醫院收治的80例慢性牙周炎患者為研究對象，依據治療方式的不同將患者分為觀察組和對照組，每組各40例。觀察組中，男性28例，女性12例；年齡20～52歲，平均年齡(33.92±2.55)歲。對照組中，男性29例，女性11例；年齡20～53歲，平均年齡(34.51±3.09)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

納入標準：(1)符合牙周炎相關診斷標準[11]；(2)近3個月內未接受過藥物治療；(3)患病時間不超過2年者；(4)均知情同意。排除標準：(1)合并嚴重腦、心、肝、腎等系統性疾病者；(2)合并精神類疾病者；(3)合并高血壓、糖尿病等基礎性疾病者；(4)合并感染性、免疫類疾病者；(5)凝血功能異常者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 兩組患者入院后均接受基礎治療，醫師對患者牙齦局部采用過氧化氫溶液進行沖洗清潔，潔治上齦，刮治下齦，為患者跟面進行平整，并加強口腔衛生宣傳教育[12]。對照組患者采用牙周組織再生技術進行治療，治療前，檢查患者牙周袋位點，保證其深度<5 mm，并通過影像學進行觀察。根據每一位患者具體情況選擇植骨、引導性組織再生和植骨相互結合治療。觀察組患者采用牙周組織再生技術聯合口腔正畸治療。治療開始階段采用直徑為0.012 英寸的鎳鈦絲保證牙齒排列整齊，修復時牙間隙保留一定的牙間隙，進行修復與矯正[13]。治療后使用舌側報持絲固定患者的牙齒，指導患者正確掌握口腔矯治、維護方式，并動態監測患者的牙周情況。

表1 兩組臨床資料比較

1.2.2 牙周指標檢測 采用牙周探針檢查兩組治療前和治療后6周的菌斑指數(PLI)、附著喪失(AL) 、牙齦出血指數(BI)、探針深度(PD)和探針出血(BOP)情況。

1.2.3 牙周功能恢復情況評估 采用我院自制調查問卷對治療6周后患者牙周恢復情況進行評估，評估內容包括咀嚼功能、牙齦健康狀況、口腔清潔能力、美觀以及滿意度，總分100分，較為滿意>50分，50分以下表示患者不滿意。分值越高表示患者越滿意。同時記錄兩組患者治療后并發癥發生情況。

1.2.4 酶聯免疫吸附實驗(ELISA) 采用ELISA檢測齦溝液中腫瘤壞死因子-α (TNF-α)及白細胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的水平，測定基質金屬蛋白酶-1(MMP-1) 、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的含量。所用試劑盒購置于賽默飛世爾科技有限公司。

1.2.5 RT-qPCR 采用RT-qPCR法檢測兩組齦溝液中參與牙周組織重塑的關鍵基因CXCL2(113 bp)、 CCL4(237 bp)和CCL7(194 bp)的mRNA水平。 CXCL2正向引物：GTC CAC CTC GGT GTC CTC TT；反向引物：GCG ACA TGG CTC TCA AAG AA；CCL4正向引物：CCT CCC GGA AGA TTC ATC GGA AC；反向引物：CAT ACT CAT TGA CCC AGG GC；CCL7正向引物：GCC AAC TTT CAC TGA AGC CA；反向引物：GGC TTC AGC ACA GAC TTC CA。內參β-actin 正向引物：5′-GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3′；β-actin 反向引物：5′-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3′。擴增體系：PCR反應包含2 μL cDNA、0.4 μL正向引物、0.4 μL反向引物、7.2 μL H2O2和10 μL SYBR；擴增條件： 95 ℃預變性15 min，95 ℃ 35循環變性15 s，58 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s。采用2-ΔΔCt法計算表達mRNA的水平，主要方法為先計算出每個樣品內參基因的表達量ΔCt，再計算對照組中ΔCt的均值，用觀察組每個樣品的ΔCt減去對照組的ΔCt均值，得到ΔΔCt，采用2-ΔΔCt公式計算出觀察組的表達量[14]。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 兩組患者牙周指標比較

治療前，兩組患者牙周指標PLI、BI、PD、BOP和AL比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組PLI、BI、PD、BOP和AL均明顯降低，且觀察組低于對照組(P<0.05)。見表2。

2.2 兩組患者牙周功能恢復情況比較

治療后，兩組患者咀嚼功能評分比較，差異無統計學意義(P>0.05)，觀察組牙齦健康狀況、口腔清潔能力、美觀度及滿意度評分均高于對照組(P<0.05)。見表3。

表2 兩組患者牙周指標比較

表3 兩組患者牙周功能恢復情況比較

2.3 兩組患者治療后并發癥發生情況比較

觀察組治療后牙周水腫、不適感、種植體松動和牙齦炎的總發生率為5.00%，對照組總發生率為15.00%，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 兩組患者治療后并發癥發生情況比較[n(%)]

2.4 兩組患者炎癥因子水平比較

治療前，兩組患者炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組TNF-α、IL-1β和IL-6水平均明顯降低，且觀察組低于對照組(P<0.05)。見表5。

2.5 兩組患者MMP-1、MMP-2、MMP-9水平比較

治療前，兩組患者MMP-1、MMP-2、MMP-9水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，兩組MMP-1、MMP-2、MMP-9水平均降低，且觀察組低于對照組(P<0.05)。見表6。

表5 兩組患者炎癥因子水平比較

表6 兩組患者MMP-1、MMP-2、MMP-9水平比較

2.6 兩組患者CXCL2、CCL4和CCL7 mRNA水平比較

治療前，兩組患者CXCL2、CCL4和CCL7 mRNA水平比較，差異無統計學意義(P>0.05；治療后，兩組CXCL2、CCL4和CCL7 mRNA水平均明顯上升，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表7。

表7 兩組患者CXCL2、CCL4和CCL7 mRNA水平比較

3 討論

牙周炎作為臨床常見的口腔炎癥性疾病，主要是由牙周菌斑及分泌物長期影響牙周組織，導致炎癥細胞浸潤、炎癥介質釋放，進而誘發疾病的發生。其主要特征表現為牙周附著喪失、牙周袋形成及牙槽骨松動等。牙周組織再生術是修復因牙周炎癥造成牙周組織損傷的一種常用方法，但無法徹底根治牙周炎癥。根治牙周炎癥不僅需要修復已受損傷的牙周組織，更為重要的是利于牙周組織恢復重生功能。本研究發現，經治療后，兩組牙周指標PLI、BI、PD、BOP和AL均明顯降低，且觀察組顯著低于對照組。此外，兩組咀嚼功能評分比較雖無明顯差異，但觀察組牙齦健康狀況、口腔清潔能力、美觀度以及滿意度評分均明顯高于對照組，而且并未增加不良事件的發生率。有研究[15-16]表明，單純采用牙周組織再生術治療牙周炎，雖有益于牙齒咀嚼功能的恢復、但對改善牙齦健康狀況、口腔清潔能力及美觀度效果有限。正畸治療對解除牙齒錯位、畸形作用明顯，并有利于重建口腔正常咬合關系，可提高牙齒美觀性[17-18]。可見，在牙周組織再生術基礎上加用正畸治療，通過糾正牙齒錯位、畸形，重建口腔正常咬合能力，可有效改善牙周炎患者臨床癥狀，利于術后恢復，且安全性較好。

牙周炎作為慢性炎癥性疾病，常常伴有不同程度的炎癥反應。牙周受致病菌感染，導致牙周膜、牙骨質、牙齦等組織受到炎癥性的損壞，引發宿主細胞的免疫反應，炎性因子水平升高又會導致牙周組織繼發性損傷[19]。TNF-α是一種介導多向性炎癥反應和免疫調節的致炎因子，既可促進骨吸收，也可促進炎癥的發生[20]。IL-1β、IL-6為白細胞介素，為主要的促炎性細胞因子，主要分布在血清和齦溝液中，常作為監測牙周炎嚴重程度的觀測指標[21]。另有研究[22]指出，基質金屬蛋白酶可破壞細胞外基質和基底膜分子。當機體發生炎癥反應時，在細胞內毒素或炎性因子刺激下，MMPs以酶原形式在細胞內分泌，并作為膠原酶的底物，參與牙周組織降解，與牙周附著喪失，牙槽骨吸收及牙周疾病進展密切相關[23]。由此可見，炎性因子與基質金屬蛋白酶互相促進，共同對牙周組織造成嚴重威脅。王麗娟等[24]研究發現，慢性牙周炎患者齦溝液中MMP-2、MMP-8及MMP-9水平均明顯高于健康牙周組織，指出基質金屬蛋白酶的水平與牙周炎程度存在一定的聯系。唐春梅等[25]研究指出，采用牙周組織再生術聯合口腔正畸治療牙周炎患者可有效降低牙周炎癥反應，提高臨床療效。本研究同樣發現，經治療后，兩組TNF-α、IL-1β和IL-6水平均顯著降低，且觀察組低于對照組。此外，觀察組MMP-1、MMP-2、MMP-9水平同樣明顯低于對照組。正畸治療對解除牙齒錯位、改善畸形作用明顯，并有利于重建口腔正常咬合，而正常的咬合力有利于促進牙周愈合和恢復[26]。此外，施加正畸力可促進牙周韌帶細胞的增殖和活性，進一步改善牙周組織功能。可見，牙周組織再生術聯合口腔正畸治療后，可重建口腔正常咬合關系，促進牙周組織功能的恢復，從而減弱牙周炎患者的局部炎癥反應，改善基質金屬蛋白酶表達水平。

牙周炎癥的治療不僅需要修復已受損傷的牙周組織，更為重要的是利于牙周組織恢復重生功能。而參與牙周組織重塑的關鍵基因在其中扮演者重要的角色。CXCL2可誘導炎性細胞遷移和破骨細胞分化促進骨重塑反應，有研究[27-28]表明，CXCL2驅動的細胞遷移可能參與了牙周組織重塑的過程，而其在正畸力的作用下會表現出高水平表達。Park等[10]研究表明，在正畸力的作用下可促進CCL4表達水平的上升，而CCL4可招募骨髓來源的單核細胞促進血管重建， CCL4在牙周組織愈合過程中起著血管重建的作用。CCL7是一種小細胞因子，可誘導單核細胞和巨噬細胞遷移，并調節多種炎癥細胞，在組織愈合過程中發揮著重要的作用[29]。本研究發現，治療后，兩組CXCL2、CCL4和CCL7 mRNA水平均顯著上升，且觀察組明顯高于對照組。可見，牙周組織再生術聯合口腔正畸治療，通過影響牙周組織重塑過程中的關鍵基因，可明顯提高牙周組織再生能力。

綜上所述，牙周修復中施加正畸力可有效改善牙周指標，降低炎癥因子、改善基質金屬蛋白酶水平，促進牙周組織再生能力，利于術后恢復，且安全性較好。