妊娠后期限飼對母羊肝臟功能及抗氧化的影響

王 鋆，石育銘，郭海杰

(1.葉縣動物疫病預防控制中心，河南平頂山 467200；2.平頂山市畜牧技術推廣站，河南平頂山 467000；

3.葉縣動物衛生監督所，河南平頂山 467200)

妊娠血毒癥主要發生在妊娠后期母羊身上，它是一種代謝性疾病，其特點是低血糖和高酮血癥，在負能量平衡時期，由于缺乏維持能量平衡能力，進而導致糖異生作用受損，最常見的臨床癥狀是虛弱、抑郁、精神遲鈍、行動障礙、厭食、失明，最后在發病3～10 d后出現橫臥和死亡（郭冬生等，2011）。妊娠期嚴重的血毒癥是導致肝功能障礙的主要原因，威脅胎兒和母體的存活力（Panther和Blum，2008）。對于綿羊來說，40%的感染母羊即使經過強化處理也會死亡，20%的母羊在分娩前或分娩后立即死亡。肝臟調節血漿成分，清除代謝的最終產物，并提供恒定的葡萄糖以滿足外周組織的能量需求，同時肝臟作為重要的代謝器官，是機體能量平衡的重要協調中心（Frise和Williamson，2013）。此外，肝臟在組織損傷時，發揮酮體形成和代謝的重要功能，促進纖維蛋白原和其他急性期反應物的合成。更重要的是，妊娠期間發生肝臟疾病可能與妊娠狀態相關，在妊娠后期，肝酮體利用降低，促進了血毒癥的發生（Harmeryer和Schlumbohm，2006）。目前肝臟對血毒癥的發病機制知之甚少。因此，本研究旨在探討妊娠后期限制采食量對母羊肝功能、抗氧化能力和急性期蛋白合成的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與處理 試驗選擇平均體重為（52.82±2.72）kg的妊娠后期母羊（2～3胎次）36只，隨機分為3組，每組6個重復，每個重復2頭羊。各組分別飼喂對照組日糧（代謝能：0.68 MJ/kg代謝體重/d）、處理1組日糧（代謝能：0.17 MJ/kg代謝體重/d）、處理2組日糧（代謝能：0.34 MJ/kg代謝體重/d），試驗從妊娠90 d持續至140 d。妊娠后期母羊牧草、飼料成分及養分攝入量見表1。

表1 妊娠后期綿羊采食量及牧草成分

試驗期間所有母羊均被單獨圈養，并飼喂切碎的干草。經過一周馴化后，在整個限飼期間，動物的飼料量保持不變。每天早上8點和下午4點各飼喂1次，而對照組每天早上8點、11點和下午4點各飼喂1次。試驗期間，動物可自由取水和舔舐礦物塊。每天收集剩余飼料，并進行化學分析。妊娠140 d時，每組分別選擇6只母羊，頸靜脈采血10 mL，分離血清，之后對母羊進行屠宰，稱量肝重。

1.2 樣品分析 用常規養分分析方法測定肝臟水分、蛋白質、脂肪和灰分含量，并用其含量與肝臟重量的百分比表示其占比。肝臟和血清生化指標及肝臟抗氧化指標采用南京建成生物研究所的商品試劑盒測定。肝臟結合珠蛋白和C-反應蛋白含量用ELISA試劑盒測定。

1.3 數據分析 所有數據均采用SAS軟件單因素方差分析程序進行分析。采用Ducan’s法進行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 妊娠后期限飼對母羊體重、肝臟體重及成分的影響 由表2可知，與對照組相比，限飼組母羊體重、肝臟重量、肝臟水分和蛋白質含量顯著降低（P＜0.05），而處理1組母羊肝臟脂肪含量較對照組和處理2組顯著提高288.03%和282.48%（P＜0.05）。與對照組相比，處理1組肝臟水分、灰分和蛋白質占比顯著降低19.28%、44.32%和45.83%（P＜0.05），但處理1組肝臟脂肪占比較對照組顯著提高210.19%（P＜0.05）。

表2 妊娠后期限飼對母羊體重、肝臟重和肝臟化學成分的影響

2.2 妊娠后期限飼對母羊肝臟和血清生化指標的影響 由表3可知，處理1組和處理2組血清非酯化脂肪酸含量較對照組分別提高199.94%和185.51%（P＜0.05）。與對照組相比，處理1組血清β-羥丁酸和肝臟甘油三酯含量顯著提高392.45%和329.55%（P＜0.05）。而處理1組和處理2組肝臟脂蛋白脂肪酶和脂肪酶活性較對照組顯著降低43.67%、30.77%和47.74%、31.31%（P＜0.05），處理1組乙酰膽堿酯酶活性較對照組顯著降低31.14%（P＜0.05）。

2.3 妊娠后期限飼對母羊肝臟抗氧化及急性期蛋白含量的影響 由表4可知，處理1組肝臟超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化力活性較對照組顯著提高103.32%、83.36%和75.85%（P＜0.05），同時處理1組丙二醛含量較對照組和處理2組顯著提高54.52%和67.31%（P＜0.05）。處理2組與對照組對肝臟總抗氧化力、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。處理組肝臟結合珠蛋白濃度高于對照組，但無顯著差異（P＞0.05），同時對照組與處理2組對肝臟C-反應蛋白濃度的影響無顯著差異（P＞0.05）。處理1組肝臟C-反應蛋白濃度較對照組顯著降低48.56%（P＜0.05）。

表3 妊娠后期限飼對母羊肝臟和血清生化指標的影響

表4 妊娠后期限飼對母羊肝臟抗氧化及急性期蛋白的影響

3 討論

Ismail等（2008）報道，血毒癥母羊的特點是血漿β-羥丁酸濃度通常高于1.6 mmol/ L。本研究處理1組β-羥丁酸濃度（2.61 mmol/L）升高提示妊娠后期母羊發生了重度血毒癥，其可能是由于限飼導致營養不良所致，因為嚴重的營養不足導致組織重量降低，尤其是代謝功能強大的器官——肝臟，其在母體代謝中起至關重要的作用。在本研究中，妊娠后期母羊采食量的減少導致肝臟重量和蛋白質含量降低，體內脂肪動員產生大量非酯化脂肪酸進入肝臟，由于兩組限飼組脂蛋白脂肪酶和肝臟脂肪酶活性降低，導致非酯化脂肪酸重新酯化成甘油三酯等脂肪形式。更重要的是，妊娠后期母羊采食量減少不僅會導致脂肪積累，還會增加母羊肝纖維化，肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同病理過程，是破壞正常肝結構和肝功能障礙的重要原因（Jiao等，2009）。

乙酰膽堿酯酶作為肝臟整體功能儲備的標志，隨著肝細胞功能障礙的出現，膽堿酯酶的合成明顯下降，使得其成為比傳統肝功能測試更特異的肝功能障礙指標（Montagnese等，2007）。妊娠期大多數肝功能障礙與妊娠狀態相關，本研究隨著母羊采食量的減少，處理1組肝臟乙酰膽堿酯酶活性降低，是肝功能適應妊娠的較差信號。氧化應激是機體細胞抗氧化防御和促氧化狀態失衡的結果。丙二醛是活性氧誘導的氧化應激指標。本研究數據顯示，處理1組丙二醛含量增加，但超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和總抗氧化力活性增加，其中肝臟中丙二醛濃度升高提示氧化應激發生，而處理1組β-羥丁酸等脂肪積累濃度升高、脂質代謝變差可能是觸發氧化應激的重要誘因，從而導致肝細胞損傷。

急性期反應是機體在各種應激源作用下，對機體自身穩態的局部或全身性干擾的一種顯著全身反應。在急性期，急性期蛋白多在肝細胞內合成，在介導炎癥過程中清除細胞碎片、修復組織發揮重要作用，急性期反應的特點為肝脂生成增加、脂肪組織分解（Gruys等，2005）。但在本研究中，雖然肝臟結合珠蛋白濃度隨母羊采食量減少有升高趨勢，但處理1組肝臟C-反應蛋白濃度降低。結合珠蛋白具有抗炎和免疫調節的特性，是一種抗氧化蛋白，具有防止組織氧化損傷的功能（Gabay和Kusher，1999）。但饑餓狀態時，肝蛋白合成普遍受到抑制。Pepys和Hirschfield（2003）研究發現，C-反應蛋白濃度與體重指數之間存在很強的正相關關系，體重減輕會降低C-反應蛋白濃度，這與本研究結果一致。

4 結論

綜上所述，妊娠后期限制母羊采食量會導致肝臟重量和蛋白質含量下降，同時引起肝臟脂肪積累，導致肝臟抗氧化功能失衡。