苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯復配對石榴干腐病菌的聯合毒力測定

李松遠 姚昕 涂勇

摘 要 為了明確苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯復配組合對石榴干腐病菌的抑制作用，采用生長速率法測定了兩種藥劑及其不同質量配比組合對該菌的室內毒力，并運用Wadley法評價了復配物的聯合毒力作用。結果表明，苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯單劑對石榴干腐病菌菌絲生長均有顯著抑制效果，其EC50分別為10.21 mg·L-1和16.48 mg·L-1;苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯復配藥劑（質量比分別為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶1、3∶1和4∶1，共7個組合）均表現出了明顯的增效作用，尤以2∶1的組合增效作用最強，增效系數（SR）為9.33。

關鍵詞 苯醚甲環唑;吡唑醚菌酯;復配組合;石榴干腐病菌;室內毒力;增效作用

中圖分類號：S432;S665.4 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.34.019

石榴是在我國有著長久種植歷史的水果，在南北地區均有種植，有著極高的食用和藥用價值[1]。石榴干腐?。–oniella granati）是石榴生長和貯藏期的一種常見病害，其病原菌一般在石榴花期結束至套袋前潛伏侵染，病果的典型特征是幼果在潮濕情況下變褐腐敗，如果遇到高溫干旱天氣會使果實失水皺縮，出現裂果或者紅褐色僵果[2]。即使是在果實成熟后的貯運過程中依舊會發病，引起大量爛果，對石榴產業危害極大。

石榴干腐病的防治藥劑以多菌靈和甲基硫菌靈等苯并咪唑類殺菌劑為主[3-4]，但此類藥劑引發的病菌抗藥性問題已經引起了人們的高度重視。因此，如何在現有藥劑基礎上，篩選出更為有效并能一定程度上延緩病菌抗藥性的藥劑組合具有十分重要的意義。苯醚甲環唑（Difenoconazole）是一種新型的甾醇脫甲基化廣譜殺菌劑，對許多病菌均有較好的抑制作用，在果樹、蔬菜等作物中被廣泛使用[5-6]。吡唑醚菌酯（Pyraclostrobin）是一種新型廣譜甲氧基丙烯酸酣類殺菌劑，其機理是對病菌線粒體的呼吸作用產生抑制效果，從而阻止病菌細胞的生長發育致其死亡，該藥劑兼具治療、保護作用。目前，國內還未見苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯復配對石榴干腐病菌的聯合毒力測定方面的研究報道。

為充分利用以上兩種藥劑的優勢，最大限度地降低病原菌對藥劑的抗藥性，本試驗探索了苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯復配后對石榴干腐病的室內聯合毒力，以期為石榴干腐病的藥劑防治提供理論和實踐依據。

1? 材料與方法

1.1? 試驗材料

供試藥劑：20%苯醚甲環唑水乳劑，青島瀚生生物科技有限公司生產;30%吡唑醚菌酯懸浮劑，河南勇冠喬迪農業科技有限公司生產。

供試菌株：2020年11月從貯藏期發病石榴的果皮上運用組織分離法獲得，通過培養性狀觀察和分子生物學手段并結合柯赫氏法則鑒定的石榴干腐病菌。

1.2? 試驗方法

1.2.1? 不同復配組合對石榴干腐病菌菌絲的室內毒力測定

以藥劑有效成分在含藥平板培養基中的濃度作為菌體實際受藥濃度。試驗前在超凈工作臺上將苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯用無菌水稀釋成6 000 mg·L-1的母液，再按不同的質量比（1∶0、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶1、3∶1、4∶1、0∶1）配制出混合藥液。之后再用無菌水將上述藥劑制得質量濃度為1 500.0 mg·L-1、600.0 mg·L-1、300.0 mg·L-1、150.0 mg·L-1、30.0 mg·L-1和3.0 mg·L-1的藥液備用。在PDA培養基滅菌后冷卻到55 ℃左右時，用移液管分別移取1.0 mL的上述混合藥液加入49 mL PDA培養基中后迅速搖勻，以制取出30 mg·L-1、12 mg·L-1、6.0 mg·L-1、3.0 mg·L-1、0.6 mg·L-1和0.06 mg·L-1的含藥平板培養基。各組濃度的藥劑分別設置3個重復組和一個空白對照組，空白對照組用等量的無菌水替代藥劑。

使用酒精燈灼燒冷卻后的打孔器在純化后的菌落邊緣處打取菌餅（直徑0.4 cm）后接種在含藥平板培養基的正中央，置于濕度60%、溫度26 ℃的恒溫培養箱中培養，于第6 d使用游標卡尺測量各個供試平板培養基上的菌落直徑，每處理以3次重復測量值平均數為最終數據。

1.2.2? 數據處理

通過Microsoft Excel和SPSS軟件進行數據處理，采用Wadley法[7]進行聯合毒力評價。分別以參試藥劑及其不同配比組合的各濃度梯度對數作為自變量x，把其對應的相對抑菌率的查表幾率值作為因變量y，運用最小二乘法分別解出毒力回歸方程（y=a+bx），用相關系數（r）進行方程顯著性檢驗，最終計算出各單劑和混合藥劑的EC50和EC90，主要計算公式如下：

菌落的凈生長量=菌落直徑-菌餅直徑;

相對抑菌率=[（對照組菌落的凈生長量-處理組菌落的凈生長量）/對照組菌落的凈生長量]×100%;

聯合毒力的EC50（th）=（a+b）/[a/EC50（A）+b/EC50（B）]

（1）

增效系數（SR）=EC50（th）/EC50（ob） （2）

公式中，復配藥劑之一的苯醚甲環唑用A代表，其配比用a表示;另一藥劑吡唑醚菌酯則用B代表，其配比則用b表示;各混劑的實際觀察值用ob表示，由各配比計算得到的理論值則用th表示。最終評價標準為：SR>1.5，增效作用;0.5≤SR≤1.5，相加作用;SC<0.5，拮抗作用。

2? 結果與分析

2.1? 單劑及復配組合對石榴干腐病菌菌絲抑菌率比較

苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯單劑及其復配組合對石榴干腐病菌菌絲抑菌率比較結果見表1、表2、表3。

由表 1可以看出，苯醚甲環唑和吡唑嘧菌酯在0.06～30.0 mg·L-1濃度處理下，二者對石榴干腐病菌的抑菌率差異顯著（P<0.05），且其抑菌效果隨著供試藥劑濃度的增加而提升;相同濃度下，苯醚甲環唑的抑菌效果均略高于吡唑醚菌酯。

表中數據是3次重復數據的平均值，同列不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05），下同。

由表2表明在供試藥劑作用濃度范圍內，無論何種混配比例，不同濃度對石榴干腐病菌的抑菌率在P<0.05水平上均差異顯著，且隨著濃度增大，抑菌率呈上升的趨勢。在同一濃度處理下，不同配比組合間抑菌率也存在一定差異，以2∶1的組合平均抑菌率最大。

由表3數據可以得知，同一濃度水平下，在3.0～30.0 mg·L-1范圍內，兩種藥劑的單劑與混劑的最大抑菌率和最小抑菌率之間均存在顯著差異（P<0.05），混劑無論是最大抑菌率還是最小抑菌率均大于單劑;在0.06 mg·L-1和0.60 mg·L-1濃度水平下，單劑的抑菌率均介于混劑的最大抑菌率和最小抑菌率之間，差異達到了顯著水平（P<0.05）。

2.2? 混劑對石榴干腐病菌的聯合毒力作用

苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯不同配比的混合物對石榴干腐病菌菌絲生長均表現出較強的抑制作用（見表4）。7個混合配方的增效作用明顯，其SR值分別為3.68、8.38、6.16、5.31、9.33、4.64、4.32，均遠高于參考標準值1.5。表明這兩種藥劑復配對石榴干腐病菌的控制作用更強，其中苯醚甲環唑與吡唑醚菌酯的質量配比為2∶1 時的增效作用最顯著，其增效系數高達9.33，該配比下的EC50觀察值和EC90值均為最低，僅為1.25 mg·L-1和4.03 mg·L-1。此外，兩種供試單劑之間比較，苯醚甲環唑對該菌的抑制效果較強，其EC50觀察值、EC90值均處于較低水平，分別為10.21 mg·L-1、70.15 mg·L-1。

3? 小結與討論

苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯是兩種重要的優秀殺菌劑，兩種藥劑的合理復配既能發揮較強的增效作用[8-9]，更可延緩病菌對其產生抗藥性，增加其在生產中的使用范圍和時間。

本試驗結果表明，苯醚甲環唑和吡唑醚菌酯單劑對石榴干腐病菌菌絲生長均有顯著抑制效果，其EC50分別為10.21 mg·L-1和16.48 mg·L-1;同一濃度下，苯醚甲環唑的抑菌率相對較強。按質量比1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、2∶1、3∶1和4∶1的7個混配組合均表現出了明顯的增效作用，其中以2∶1的組合增效作用最強，增效系數（SR）為9.33，與王麗等[2]的研究基本一致。此外，魯海菊等篩選出甲霜靈·錳鋅、百菌清和撲海因3種藥劑，均對石榴干腐病菌有較好的抑制效果[10]。除組合比例外，復配藥劑的實際應用效果還受到制劑的理化穩定性、成本、用藥習慣及應用對象品種、生長貯運環境等因素影響，因此還需進一步在生產中予以驗證。

參考文獻：

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（責任編輯：易? 婧）

收稿日期：2021-09-12

基金項目：國家現代農業產業技術體系四川南亞作物創新團隊項目（9641）;西昌學院博士科研啟動基金項目（2017BS003）。

作者簡介：李松遠（1999—），男，四川瀘州人，西昌學院農業科學學院農學專業2017級在讀學生，主要從事石榴保鮮與貯藏技術研究。E-mail： 505064165@qq.com。

*為通信作者，E-mail： yaoyao3692@163.com.