子宮頸細胞蠟塊p16/Ki-67雙染在子宮頸癌早期篩查中的應用

潘思瓊，陸奉科，張雪梅，譚凌峰

子宮頸癌是繼乳腺癌之后的第二大婦科常見腫瘤，也是女性癌癥死亡的第三大主要原因[1]。據報道，全球子宮頸癌的發病人數每年超過53萬，每年死亡人數接近27.5萬[2]。子宮頸癌篩查和預防顯得尤為重要。傳統的免疫組化單染技術具有一定的局限性，免疫組化雙染技術的出現增加了子宮頸癌的篩查手段，彌補了單染技術的不足。本文應用宮頸液基細胞學檢查(thinprep cytologic test, TCT)、細胞蠟塊及組織蠟塊p16/Ki-67雙染進行檢測，以組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染結果為標準，比較TCT及細胞蠟塊p16/Ki-67雙染在子宮頸癌早期篩查中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2017年1月～2019年1月在廣西醫科大學第四附屬醫院婦科收治的136例患者，年齡17～78歲，檢測結果均經兩名經驗豐富的高年資病理醫師分別閱片后共同診斷。

1.2 方法

1.2.1TCT 采用液基細胞學方法制片，巴氏染色。

1.2.2p16/Ki-67雙染檢測 采用Roche Benchmark XT(羅氏全自動免疫組化儀)進行脫蠟，抗原修復，封閉，Ki-67一抗，二抗孵育，DAB顯色，DAB增強，變性，p16一抗，二抗，紅染，襯染，復染即完成。

1.3 診斷標準

1.3.1TCT結果判讀 本實驗中以發現不除外上皮內高度病變的非典型鱗狀細胞(atypical squamous cells, cannot exclude HSIL, ASC-H)、高級別鱗狀上皮內病變(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)及浸潤癌為細胞學陽性病例。

1.3.2細胞蠟塊p16/Ki-67雙染結果判讀 一個或多個細胞胞核呈棕色，且細胞質呈紅色判讀為陽性；未觀察到任何一個細胞出現紅色胞質且棕色胞核，即細胞只有Ki-67表達或者p16表達，或者既無p16表達也無Ki-67表達均判為陰性。

1.3.3陰道鏡檢查活檢判讀 以病理診斷子宮頸HSIL及浸潤癌為陽性；診斷低級別上皮內病變(low-grade squamous intra-epithelial lesion, LSIL)及子宮頸炎為陰性。

1.4 統計學方法采用SPSS 25.0軟件進行統計學分析，計數資料采用n(%)表示，采用χ2檢驗。采用MedCalc軟件比較TCT、p16/Ki-67雙染檢測的AUC。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TCT、細胞蠟塊p16/Ki-67雙染對HSIL檢出率的對比分析選取行TCT并經陰道鏡活檢的標本136例，組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性57例。以組織學診斷為標準，TCT檢測陽性48例，陽性率為35.3%，靈敏度為70.2%(40/57)，特異度為89.9%(71/79)，陽性預測值為83.3%(40/48)，陰性預測值為80.7%(71/88)；細胞蠟塊p16/Ki-67雙染陽性59例，陽性率為43.4%，靈敏度為100.0%(57/57)，特異度為97.5%(77/79)，陽性預測值為96.6%(57/59)，陰性預測值為100.0%(77/77)，兩者對HSIL檢測陽性率比較差異有統計學意義(χ2=4.84，P=0.043，表1)。

表1 TCT、細胞蠟塊p16/Ki-67雙染對HSIL檢出率的對比分析

2.2 兩種篩查方法效果評價采用MedCalc軟件進行ROC曲線的繪制及Z檢驗分析，以組織活檢并組織蠟塊p16/Ki-67雙染結果為標準，比較TCT及細胞蠟塊p16/Ki-67雙染檢測效果，TCT(AUC=0.800)與細胞蠟塊p16/Ki-67雙染(AUC=0.987)的AUC比較，差異有統計學意義(Z=5.312，P<0.000 1，圖1)。

圖1 兩種篩查方法的ROC曲線

3 討論

子宮頸癌早期篩查目的是為了發現HSIL和可能發展為HSIL的病變[3]。本組TCT的檢出率為35.3%，靈敏度為70.2%，特異度為89.9%，具有較高的特異性，但敏感性較差，與Pan等[4]研究結果一致；細胞蠟塊p16/Ki-67雙染的檢出率為43.4%，靈敏度為100.0%，特異度為97.5%，提示細胞蠟塊p16/Ki-67雙染能夠早期反映子宮頸癌惡性進展及癌前病變，靈敏度及特異度高[5]，同時也彌補了TCT中主觀因素導致的漏診及誤診。細胞蠟塊p16/Ki-67雙染與病理活檢有較高的符合率及準確性，是判斷子宮頸病變惡性程度的良好指標，能夠幫助臨床醫師對患者進行精細分層管理，進而實現早期干預[6]。

值得注意的是，在檢測結果中，有57例活檢病理檢查結果陽性，經組織蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性者53例，經細胞蠟塊p16/Ki-67雙染檢測陽性者59例。結果提示對于某些病例，細胞學標本相對組織活檢具有一定的優勢，該優勢得益于細胞學標本取材方式的全面性及細胞蠟塊制作方法的優化。通常宮頸液基細胞學標本取材時受檢者取截石位，陰道鏡下充分暴露子宮頸，將毛刷輕輕插入子宮頸通道，適度力量抵住采樣器，按順時針方向旋轉5圈，完成后，將刷頭放入保存瓶內漂洗。再運用成熟的細胞蠟塊技術可最大程度地富集細胞量，使細胞形態完整、結構清晰，且可長期保存，并可有效防止脫片，提高實驗的準確性[7]。而活檢通常選擇性地鉗取肉眼可疑的病變組織，取材局限，尤其對于病變較少的病例，進一步切片進行免疫組化檢測時，在蠟塊修整和切片過程中極易將病變切除，導致免疫組化切片內已沒有HE切片上表現的病變組織，免疫組化結果顯示為陰性。

綜上所述，細胞蠟塊p16/Ki-67雙染具有較高的靈敏性和特異性，對于標本量少的組織具有顯著的診斷優勢，給病理醫師及患者帶來極大的便利[8]，同時細胞蠟塊p16/Ki-67雙染還能減少不必要的陰道鏡轉診和子宮頸活檢，是一種可靠的子宮頸癌前病變標志物[9]，在子宮頸癌前病變篩查中具有極其重要的應用價值。