HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變聯(lián)合檢測(cè)CK7，p16 及p53 蛋白表達(dá)的臨床價(jià)值

劉慧，王金花，呼斯冷

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020）

0 引言

隨著醫(yī)學(xué)檢測(cè)水平的提高，早期宮頸癌的檢出率逐漸提高。宮頸上皮內(nèi)病變?yōu)樽訉m頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的癌前病變的總稱(chēng)，臨床上在對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變進(jìn)行治療時(shí)，主要為開(kāi)展消融性治療與切除性治療[1]。有資料報(bào)道，宮頸類(lèi)病變的發(fā)病呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì)，特別是隨著二胎政策的施行，婦科疾病檢查得到推廣，宮頸類(lèi)病變檢出率提高，大部分患者均要求對(duì)子宮進(jìn)行保留，因此微創(chuàng)手術(shù)成為主要治療手段[2]。為改善疾病預(yù)后，早期診治顯得尤為重要[3]。人乳頭瘤病毒感染與宮頸癌前病變以及宮頸癌的發(fā)生存在密切關(guān)聯(lián)，有研究報(bào)道稱(chēng)，在宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素中，人乳頭瘤病毒感染屬于獨(dú)立危險(xiǎn)因素，相較于未感染人乳頭瘤病毒的群體，人乳頭瘤病毒感染女性群體的宮頸癌發(fā)病率明顯更高。由此可知，當(dāng)宮頸炎患者合并人乳頭瘤病毒感染后，患者發(fā)生惡性病變的風(fēng)險(xiǎn)明顯提高，做好疾病治療工作尤為重要。CK7、p16 及p53 蛋白均為常用的腫瘤標(biāo)志因子，本次研究就選取由于HPV或?qū)m頸細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果為陽(yáng)性而接受宮頸活檢的宮頸上皮內(nèi)病變患者81 例以及宮頸炎癥患者30 例，探討HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變聯(lián)合檢測(cè)CK7、p16及p53 蛋白表達(dá)的臨床價(jià)值。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2020 年10 月我院收治的由于HPV 或?qū)m頸細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果為陽(yáng)性而接受宮頸活檢的宮頸上皮內(nèi)病變患者81 例，年齡22～68 歲，平均（40.52±4.32）歲；同時(shí)選取宮頸炎癥患者30 例，年齡20～65 歲，平均（40.80±4.15）歲。兩組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具可比性。

1.2 方法

全部患者均接受CK7、p16 及p53 蛋白檢測(cè)，檢測(cè)方法為免疫組化Elivision 法，將標(biāo)本應(yīng)用10%中性福爾馬林進(jìn)行固定，石蠟包埋，4μm 連續(xù)切片。將切片通過(guò)常規(guī)脫蠟以及水化，然后采用3%過(guò)氧化氫將內(nèi)源性過(guò)氧化物酶去除，應(yīng)用EDTA 抗原進(jìn)行修復(fù)，其余步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。采用PBS 對(duì)一抗進(jìn)行代替，將其作為陰性對(duì)照。P16 蛋白陽(yáng)性定位在細(xì)胞核和/或胞質(zhì)，P53 蛋白陽(yáng)性定位在細(xì)胞核，CK7 蛋白陽(yáng)性定位在細(xì)胞質(zhì)，均出現(xiàn)黃色或棕色顆粒。P16：（-）陽(yáng)性細(xì)胞百分率<10%；（+）陽(yáng)性細(xì)胞百分率10%～30%；（++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率30%～50%；（+++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率>50%；P53：（-）陽(yáng)性細(xì)胞百分率0；（+）陽(yáng)性細(xì)胞百分率<10%；（++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率10%～20%；（+++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率>20%；CK7：（-）陽(yáng)性細(xì)胞百分率0；（+）陽(yáng)性細(xì)胞百分率<10%；（++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率10%～20%；（+++）陽(yáng)性細(xì)胞百分率>20%。

1.3 觀察指標(biāo)

①炎癥組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組與CIN Ⅲ組的CK7、p16 及p53 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率；②CK7、p16 及p53 蛋白聯(lián)合診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變與病理檢查結(jié)果的差異；③CK7、p16 及p53 蛋白聯(lián)合診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準(zhǔn)確度、靈敏度與特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件為SPSS 25.0。[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)；P<0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組CK7、p16及p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

隨著宮頸上皮內(nèi)病變患者病理類(lèi)型提高，CK7、p16 及p53 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率逐漸上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。如表1。

表1 各組CK7、p16及p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

2.2 聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸上皮內(nèi)病變的效果

聯(lián)合檢測(cè)CK7、p16 及p53 蛋白表達(dá)診斷HPV16及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準(zhǔn)確率高于單一指標(biāo)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。如表2。

表2 聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸上皮內(nèi)病變的效果

2.3 聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸上皮內(nèi)病變的靈敏度與特異度比較

聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸上皮內(nèi)病變的準(zhǔn)確度、靈敏度與特異度均高于單一指標(biāo)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。如表3。

表3 聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸上皮內(nèi)病變的靈敏度與特異度比較

3 討論

宮頸癌在臨床婦科屬于常見(jiàn)病與多發(fā)病，危害嚴(yán)重，若無(wú)法得到早期診治，病情發(fā)展到中晚期或出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移后，則預(yù)后較差。宮頸癌的發(fā)生，會(huì)使患者的身心健康均受到嚴(yán)重傷害，同時(shí)給患者的家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。在宮頸癌發(fā)生的過(guò)程中，HPV 感染屬于重要的致病因素。當(dāng)患者宮頸受到HPV 感染后，會(huì)使患者機(jī)體的宮頸出現(xiàn)瘤變反應(yīng)，若此階段未能得到有效的治療，則會(huì)逐漸發(fā)展為宮頸癌病變。宮頸上皮內(nèi)瘤變?yōu)閷m頸癌的癌前病變階段，當(dāng)患者的宮頸上皮內(nèi)瘤變確診后，需及時(shí)開(kāi)展積極治療干預(yù)，使宮頸癌病變風(fēng)險(xiǎn)降低，改善疾病預(yù)后。目前臨床上應(yīng)用于宮頸上皮內(nèi)瘤變治療的方式較多，包括激光治療、宮頸環(huán)形電切術(shù)、子宮切除等，主要根據(jù)患者的病變程度來(lái)選擇相應(yīng)的治療方案。大量流行病學(xué)資料顯示，高危HPV 是引發(fā)宮頸癌出現(xiàn)的主要危險(xiǎn)因素之一，雖然大部分的高危HPV 感染患者，并不會(huì)出現(xiàn)特異性臨床癥狀，或僅出現(xiàn)亞臨床表現(xiàn)，但HPV 會(huì)定植在患者機(jī)體受到損傷的宮頸上皮細(xì)胞中，從而導(dǎo)致宮頸發(fā)生長(zhǎng)期感染，其中10%～15%的患者在病程達(dá)到8～10 年后，會(huì)導(dǎo)致宮頸上皮出現(xiàn)不典型增生，導(dǎo)致宮頸上皮出現(xiàn)癌前病變，進(jìn)而誘發(fā)宮頸癌[4]。因此開(kāi)展針對(duì)宮頸上皮的HPV 檢測(cè)，對(duì)于早期診斷癌前病變與宮頸癌，均具有積極作用。HPVDNA 檢查為臨床上常用的宮頸癌篩查方法，通過(guò)實(shí)施HPVDNA 檢查，可使HPV 的幾十種亞型均得到有效的篩查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)存在的HPV 感染，以及感染的具體類(lèi)型，并可針對(duì)結(jié)果實(shí)施處理。若經(jīng)檢查為低危型的HPV 感染，則會(huì)引發(fā)如尖銳濕疣等病變，需針對(duì)性開(kāi)展積極治療[5]。若經(jīng)檢查為高危型的HPV 感染，在宮頸部位持續(xù)感染，則會(huì)導(dǎo)致宮頸上皮首先出現(xiàn)癌前病變，并可能向?qū)m頸癌發(fā)展。由于宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展為宮頸癌的周期通常較長(zhǎng)，因此在這一期間通過(guò)做好疾病的篩查與治療工作，可降低發(fā)展為宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，使患者的疾病預(yù)后得到改善。

p53 蛋白的編碼基因?yàn)門(mén)p53 基因，定位為染色體17p13，其外顯子數(shù)量為11 個(gè)，內(nèi)含子數(shù)量為10 個(gè)，p53 與人類(lèi)惡性腫瘤的發(fā)生具備密切關(guān)系，其包括兩種亞型，分別為突變型以及野生型，前者可導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)化及癌變，后者則可對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化產(chǎn)生抑制作用，同時(shí)可對(duì)癌基因活動(dòng)進(jìn)行抑制。有資料顯示，惡性腫瘤中出現(xiàn)P53 基因突變的比例超過(guò)50%[6]。CK7為堿性細(xì)胞角蛋白，其主要在正常組織的腺上皮以及移行上皮細(xì)胞中表達(dá)，在乳腺、卵巢以及肺腺癌中均表現(xiàn)為陽(yáng)性表達(dá)，通常情況下非上皮來(lái)源的細(xì)胞不會(huì)有CK7 表達(dá)，鱗狀上皮也無(wú)表達(dá)，可將其用作肺腺癌分化的客觀指標(biāo)，可鑒別腫瘤類(lèi)型，可對(duì)轉(zhuǎn)移部位腫瘤細(xì)胞的來(lái)源進(jìn)行判斷。CK7 為低分子量角蛋白，主要用于對(duì)各種單層上皮進(jìn)行標(biāo)記，目前，關(guān)于CIN 病變的細(xì)胞分化的研究較少，CK7 是與細(xì)胞分化相關(guān)的上皮細(xì)胞特征性標(biāo)志物，其表達(dá)具有組織特異性、細(xì)胞特異性和分化特異性。有國(guó)外學(xué)者研究提示CK7 可以作為CINI 可能進(jìn)展為高級(jí)別病變的生物標(biāo)記物。由于在對(duì)CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)行組織學(xué)診斷時(shí)，結(jié)果容易受到陰道鏡檢查以及檢查人員主觀判斷的影響，因此可能使疾病的嚴(yán)重度被低估，有學(xué)者認(rèn)為若CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的陰道鏡檢查結(jié)果不滿意，則需要為其實(shí)施宮頸切除治療。但大多數(shù)學(xué)者均認(rèn)為，CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變的自然緩解率高，且發(fā)展為浸潤(rùn)癌的風(fēng)險(xiǎn)低，時(shí)間長(zhǎng)，通常為8～10 年，因此對(duì)于不典型鱗狀細(xì)胞或是低度鱗狀上皮內(nèi)病變，且不存在明顯癥狀的患者，無(wú)論其是否取得滿意的引導(dǎo)鏡檢查結(jié)果，仍以定期隨訪觀察為主。有研究發(fā)現(xiàn)CK7 在低級(jí)別及高級(jí)別CIN 中陽(yáng)性表達(dá)，但前者多以弱陽(yáng)性為主，其表達(dá)范圍與強(qiáng)度隨著宮頸病變級(jí)別的升高明顯增加（P<0.05）；CK7 陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞分布于上皮的全層，尤其下1/3 的基底層和基底上層。這表明CINI 有分化成熟的趨勢(shì)，CIN Ⅱ和CIN Ⅲ中出現(xiàn)細(xì)胞分化紊亂。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這提示CK7 可以作為宮頸病變的生物學(xué)標(biāo)志物，可用于早期診斷和預(yù)測(cè)進(jìn)展。p16 是一種抗癌基因，它是作用于細(xì)胞周期，細(xì)胞中p16 蛋白的減少會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)節(jié)紊亂，使細(xì)胞無(wú)限期增殖甚至癌變。本次研究結(jié)果顯示，隨著宮頸上皮內(nèi)病變患者病理類(lèi)型提高，CK7、p16 及p53 蛋白表達(dá)陽(yáng)性率逐漸上升，聯(lián)合檢測(cè)CK7、p16 及p53蛋白表達(dá)診斷HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變的準(zhǔn)確率高于單一指標(biāo)，提示HPV16及18 型宮頸上皮內(nèi)病變患者的CK7，p16 及p53 蛋白表達(dá)會(huì)發(fā)生明顯異常，同時(shí)聯(lián)合檢測(cè)CK7，p16 及p53 蛋白可為HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變?cè)\斷提供參考[7]。CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者2 年內(nèi)自然轉(zhuǎn)陰率超過(guò)60%，若病情逐漸加重，則需要開(kāi)展積極干預(yù)。破壞性治療是指依靠物理方法將宮頸表面組織進(jìn)行破壞，包括激光汽化、冷凍或電凝治療，其治療適用人群為陰道鏡檢查滿意的CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者。但該治療方法無(wú)法對(duì)組織標(biāo)本予以保留，因此無(wú)法實(shí)施病理學(xué)檢查，具備一定風(fēng)險(xiǎn)，特別是對(duì)活檢漏診的宮頸早期浸潤(rùn)癌，因此在對(duì)患者開(kāi)展破壞治療前，需做好評(píng)估工作，確定患者具備清晰病灶視野且不具備宮頸浸潤(rùn)癌特征。若CINI 級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變合并高危HPV 感染，或出現(xiàn)復(fù)發(fā)、持續(xù)的病灶，或病變位置位于宮頸外口，宮頸管診刮結(jié)果為陽(yáng)性，即使其分級(jí)為CINI 級(jí)，也需要為其開(kāi)展切除手術(shù)治療，手術(shù)方式以超高頻電波刀手術(shù)為主，即可使病灶得到有效切除，又可避免將正常組織切除過(guò)多。

綜上所述，HPV16 及18 型宮頸上皮內(nèi)病變聯(lián)合檢測(cè)CK7、p16 及p53 蛋白表達(dá)，可使疾病得到有效診斷，同時(shí)可對(duì)疾病病理程度進(jìn)行評(píng)估。