淺議薄層色譜及中藥成方制劑的方法建立

劉冰，劉松雁， 高慶輝，張蕾，謝亮，呂潔

（1.石家莊市畜產品和獸藥飼料質量檢測中心 050000；2.新樂市農業農村局 050000；3.石家莊市動物疫病預防控制中心 050000）

薄層色譜法是指將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。 待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進行藥物的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法，由于其快速、操作方便、設備簡單、顯色容易等特點而被廣泛應用于中藥成分分析中。

1 影響薄層色譜質量的主要因素

1.1 溫度

展開缸空間分布的展開劑中各溶劑蒸汽的比例發生變化會影響待分離物質的展開，在濕度恒定時，一般在較高溫度展開時的Rf 值高，反之則低，一般展開溫度保持在15℃～25℃，實驗時也必須在實驗記錄中體現溫度。

1.2 吸附劑的活性和相對濕度的影響

吸附劑的活性一般由表面能和表面積決定，其中活潑型及游離型的硅醇基數目決定硅膠活性，硅醇基是親水性基團，吸附水后形成水和硅醇基失去活性，所以在其他條件相同的情況下，薄層板的活性與實驗環境的濕度有直接影響。 但有的樣品分析和使用的展開劑對相對濕度有較寬的適應能力，在30%～70%都可以得到穩定的色譜。 因為地區氣候影響，環境濕度可能會有所不同，所以記錄實驗中的相對濕度是很有必要的，一般控制在小于50%左右。 可以在實驗室中加裝空氣加濕器或者除濕器來控制大環境中的濕度， 也可以轉移到加入五氧化二磷或者硫酸的干燥器中控制濕度，也可以在放入變色硅膠的展開缸中控制，同時我們也能選擇自動展開設備，如自動展開儀來控制相對濕度。

1.3 溶劑蒸汽影響

薄層色譜展開過程中，展開劑的蒸汽相、液相、固定相形成作用機制復雜的色譜過程， 如果處理不到位就會影響斑點分離度，或者展開過程中展開劑的組分被固定相分離產生第二前沿，或者平衡時間不夠產生邊緣效應， 這些都會影響薄層色譜的質量。

1.4 薄層板的質量

實驗過程中目前一般都使用商品薄層板，以保證實驗的可重復性，在建立方法時，也應該考慮不同品牌的薄層板質量和層析效果，以保證方法的通用性良好。 實驗過程中也應該記錄薄層板的廠家、型號、批號，以保證實驗結果的可追溯和可重復。

1.5 點樣技術

點樣過程中點樣體積過大會降低分離效率， 還會產生點樣環形色譜效應，這種效應會對之后的線性展開造成不良影響，所以在配置樣品溶液時應該選用對組分溶解度較小的溶劑， 且溶劑粘度不能太高，沸點要適中，沸點過低時會產生揮發造成樣品溶液濃度改變，沸點過高又會導致樣品溶液在原點殘留，導致改變展開劑的選擇性。實驗中推薦使用溶劑甲醇和乙醇。 點樣后應該除去原點殘存溶劑，比如用吹風機吹干，而且要避免點樣裝置對薄層表面產生機械損傷。

1.6 樣品預處理與供試品溶液的制備

供試品溶液的制備原則是在不犧牲圖譜質量的前提下，操作越簡單越好，減少不必要的回流和過柱。 如果預處理與制備不合理，會產生斑點不圓、不完整、不清晰、背景干擾嚴重或者斑點過少，失去圖譜的特征性。

2 薄層色譜常見問題

2.1 邊緣效應

邊緣效應是指同一種化合物在同一塊薄層板上用相同展開劑在同一展開室內展開后， 薄層板中部的斑點比薄層兩側邊緣處的斑點Rf 值小的現象。為了克服這一問題，可以增加展開室中溶劑蒸汽飽和度， 選擇單一展開劑或共沸展開劑代替混合展開劑， 采用窄薄的薄層板， 或者在薄層板兩側各去除5mm 的吸附劑，通過這些方式可以減小或者消除邊緣效應。

2.2 拖尾

拖尾現象是指點樣雖在同一垂直線而圓心未重合， 在圓形或者橢圓形斑點的后方呈現拖尾，嚴重時呈現倒火焰狀。 實驗中通過控制點樣量，展開劑pH 值，吸附劑pH 值，去除痕量金屬離子可以避免發生拖尾現象。

2.3 斑點念珠狀

斑點念珠狀是指化合物的斑點之間距離小， 斑點相互重疊或者連接的狀態。 產生此現象的原因是單一的化合物產生了分解，或者形成了絡合物，以及被層析樣品中組分過多導致在薄層板上無法分開，或在原點點樣時形成復斑。

2.4 Rf 值不穩定

層析時溫度變化，層析時間不恒定，吸附劑規格不統一，薄層板、展開劑廠家型號不同，展開劑反復使用這些因素都會產生Rf 值不穩定的現象。

2.5 斑點異形

斑點異形產生是因為吸附劑粒度活度偏低， 薄層板厚度不均勻，展開時層析缸被挪動等因素。

3 中藥成方制劑的方法建立

在方法建立時，應充分參考藥材和飲片的中藥鑒別方法，即與藥材飲片的專屬鑒別方法保持一致。 如果有其他成分干擾或者制劑的提取方法不同，不能采用與該藥材相同的鑒別方法時，可采用其他鑒別方法。 如處方相同，劑型不同的制劑，其鑒別方法應保持一致。 并且盡可能采用一個供試品溶液多項多維鑒別使用的薄層色譜法，達到節約資源、保護環境、簡便實用的目的。

方法建立過程中涉及到供試品溶液的制備， 應該首先除去干擾物，并且方法盡量簡單便捷，采用提取、純化選擇，如回流超聲提取的方式，還要對溶劑、時間、酸堿處理、溶劑萃取、柱層析優化等。 其中柱層析跟薄層色譜層析類似，色譜柱的品牌填料、裝填等都會影響薄層色譜的結果。 對對照物的選擇應該盡量采用以對照品和對照提取物或對照藥材同時進行對照的方式，如對照品不易獲得時，可以采用對照提取物或對照藥材為對照，遇到對照藥材較多斑點有干擾時， 應該選擇專屬性對照品或者對照藥材某個具有鑒別特征的斑點。 薄層板應對吸附劑進行比較，最終選擇聚酰胺板、硅膠G 板或者硅膠GF254 板來進行層析。建立方法時要對三個以上的展開系統進行比較， 對顯色條件進行考察，比如選擇日光、紫外燈或者選用噴顯色劑進行顯色。 點樣過程中應選擇適宜的點樣量，點樣量過小會造成斑點不顯色，過大則會產生拖尾等影響色譜質量的情況。 做成方制劑的薄層色譜鑒別是應做陰性空白實驗，以證明其他藥味沒有干擾。 建立方法中應考察不同品牌薄層板的層板溫度等耐用性參數的考察。