黃白溫敏型原位凝膠的處方篩選與評價

朱衛豐，劉水婷，王萬春，管詠梅

黃白溫敏型原位凝膠的處方篩選與評價

朱衛豐1，劉水婷1，王萬春2，管詠梅1*

1. 江西中醫藥大學 現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004 2. 江西中醫藥大學附屬醫院 外一科，江西 南昌 330004

篩選并優化黃白溫敏型原位凝膠的處方，并考察其經皮滲透性能。以泊洛沙姆407（P407）、泊洛沙姆188（P188）、聚乙二醇6000（PEG6000）作為凝膠基質材料，以膠凝溫度為考察指標，采用Box-Behnken效應面法優化溫敏凝膠處方；對制備的溫敏凝膠進行理化表征，并采用Franz透皮擴散池法考察黃白溫敏凝膠的經皮滲透性能。黃白溫敏型原位凝膠的最佳處方為P407 20.10%，P188 2.54%，PEG6000 2.00%，膠凝溫度為（34.2±0.2）℃，24 h內歐前胡素、鹽酸小檗堿的累積滲透量分別為（14.07±1.34）、（395.72±35.04）μg/cm2，均符合Higuchi動力學方程。制備的凝膠具有溫敏、緩釋作用，為臨床提供治療蛇蟲咬傷的制劑奠定基礎。

黃白溫敏型原位凝膠；處方優化；Box-Behnken效應面法；經皮滲透性能；歐前胡素；鹽酸小檗堿；Higuchi動力學方程；溫敏；緩釋

毒蛇咬傷是嚴重影響勞動人民生命健康的常見災害性疾病，在我國每年有超過1萬人死于毒蛇咬傷。中醫中藥治療毒蛇咬傷不僅有著悠久的歷史，并且獨具特色[1]。蛇蟲咬傷后毒蛇毒蟲的毒液進入人體，患處表現出紅腫熱痛、皮膚表層溫度升高、炎癥反應等局部癥狀，故臨床常外用給藥，直達病灶，發揮抗炎、消腫的作用。通過中華醫典數據庫和中醫資源網等的古文檢索發現，白芷外用常用于治療蛇蟲咬傷，黃柏外用常用于解毒消腫，且以“黃柏”“白芷”“外敷/外用”為關鍵詞檢索發現，二者常配伍使用，發揮解毒、消腫、止痛等作用。然而，臨床治療蛇蟲咬傷所致腫痛外用制劑多為散劑，其顆粒粗大，刺激性強，患者依從性不高。近年來，半固體凝膠劑以其制備簡單、使用溫和備受青睞，而具有溫度響應型凝膠頗具潛力，其為智能給藥系統，能夠實時感知環境、用藥部位等的溫度變化并隨之發生相轉變，當溫度低于臨界相變溫度（lower critical solution temperature，LCST）時呈液態，高于LCST時呈半固體凝膠態，從而延長藥物滯留時間，持續釋藥，提高生物利用度[2-4]。因此，本課題組研制了一種環境響應型凝膠劑——黃白溫敏凝膠，旨在研發出一種便于患者使用且能快速消除蛇蟲咬傷致患處疼痛、腫脹的新型中藥外用制劑，擴大其在臨床的使用范圍，為中藥復方外用制劑的發展提供借鑒。

1 材料

1.1 動物

健康SPF級雄性昆明種小鼠，體質量18～22 g，購于江西中醫藥大學動物中心，動物許可證號：SCXK（贛）2018-0003，動物實驗經江西中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準，批準文號：JZSYDWLL-20200901。

1.2 試藥

白芷飲片，江西江中中藥飲片公司，批號160718，產地安徽；黃柏飲片，江西繼中堂健康科技有限公司，批號180801，產地四川，上述藥材均經江西中醫藥大學鑒定教研室葛菲教授鑒定，白芷為傘型科當歸屬植物白芷(Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. f.的干燥根，黃柏為蕓香科黃柏屬植物黃皮樹Schneid.的干燥樹皮，均符合《中國藥典》2020年版質量要求。

對照品歐前胡素（批號110826-201616，質量分數99.6%）、鹽酸小檗堿（批號110713-201814，質量分數86.7%），中國食品藥品檢定研究院；泊洛沙姆407（P407，批號GNC2192B）、泊洛沙姆188（P188，批號GNC33221B），德國BASF公司；聚乙二醇6000（PEG6000，批號810T032），北京索萊寶科技有限公司；聚乙二醇4000（PEG4000，批號M1005A）、聚乙二醇400（PEG400，批號D1101A）、甘油（批號M1101A），大連美侖生物技術有限公司；甲醇，色譜純，西隴科學股份有限公司；磷酸，西隴化工股份有限公司；無水乙醇（批號2008239），西隴科學股份有限公司；純水，實驗室純水儀自制。

1.3 儀器

EPED實驗室級超純水器，南京易普易達科技發展有限公司；Anto paar Physica MCR101型流變儀，奧地利安東帕公司；ZNCL-BS智能磁力攪拌器，西安安泰儀器科技有限公司；Agilent1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；Turbiscan Lab穩定性分析儀，法國Formulaction公司；BSA 124S型電子分析天平，德國Sartorius公司；PHS-3C型pH計，上海雷磁儀器有限公司；SU8010掃描電子顯微鏡（SEM），日本日立公司。

2 方法與結果

2.1 提取物的制備

在前期的提取工藝考察基礎上，提取藥材得到提取液，水浴蒸干后置于45 ℃真空干燥得提取物粉末。黃柏提取物：8倍量60%乙醇為溶劑，提取3次，每次1 h，投藥量為5%（按原粉計，浸膏得率為13.42%）；白芷提取物：10倍量75%乙醇為溶劑，提取3次，每次1 h，投藥量為5%（按原粉計，浸膏得率為10.12%）。

2.2 助溶劑的篩選

采用法國Turbiscan Lab型近紅外穩定性分析儀比較溫敏凝膠的穩定性[5-6]。固定P407和P188的比例不變，以不同的助溶劑（PEG6000、PEG4000、甘油、PEG400）制備溫敏凝膠，篩選最佳助溶劑；將樣品置于樣品瓶中，25 ℃下測定，每天掃描1次，連續測定7 d。體系整體動力學不穩定性結果如圖1所示，由圖1可知動力學不穩定性指數（TSI）值為PEG4000＞甘油＞PEG400＞PEG6000，即以PEG6000為助溶劑時溫敏凝膠的穩定性最佳，因此選擇PEG6000作為凝膠助溶劑。

圖1 穩定性掃描圖

2.3 制備工藝

采用“冷溶法”制備溫敏凝膠[7]，將PEG6000溶于處方量的水中，并加入處方量的黃柏和白芷提取物，超聲使其完全溶解，冰水浴下依次緩慢加入處方量的P407、P188，攪拌均勻，然后置于4～10 ℃冰箱冷藏24 h，使其充分溶脹，得到澄清、分散均勻的藥物凝膠溶液。

2.4 膠凝溫度（gelation temperature，Tg）的測定

采用“攪拌子法”測定溫敏凝膠的g[8-9]，取溫敏凝膠液5 mL，加入攪拌子，并插入探針式溫度計（準確度為0.1 ℃），使溫度計的探針完全浸沒在溫敏凝膠液中，置于磁力攪拌器上，轉速設置為200 r/min，持續緩慢升溫，使凝膠液的溫度上升速率為1～2 ℃/min，觀察并記錄凝膠完全凝結（不流動）時的溫度，即為g，每個樣品平行測定3次，取平均值。

2.5 處方優化

2.5.1 單因素考察 以g作為考察指標，對不同用量的P407（20%、21%、22%、23%、24%）、P188（1%、2%、3%、4%、5%）及PEG6000（1%、2%、3%、4%、5%）進行單因素考察，結果P407用量越高，g越低；P188用量越高，g越高；PEG6000用量越高，g越高，且PEG6000用量超過3%時凝膠黏度降低，用量為5%時溫度加熱至55 ℃仍無法完全膠凝。

2.5.2 Box-Behnken效應面法優化溫敏凝膠基質處方 使用Design Expert 8.0.6軟件，根據單因素考察的試驗結果，選擇P407用量（1）、P188用量（2）、PEG6000用量（3）為主要影響因素，并確定其用量范圍：120%～24%、21%～5%、31%～3%，以g為評價指標進行處方優選，根據星點設計的原理，各因素設置3水平，用代碼值?1、0、+1來表示，以g為評價指標進行處方優選，Box-Behnken效應面法實驗的因素水平、實驗設計及結果見表1。

2.5.3 方差分析與顯著性檢驗 采用ANOVA分析實驗數據，由表2的各回歸系數的顯著性檢驗可得，模型方程中1、2、3均為對g有極顯著影響。

2.5.4 模型擬合 根據實驗結果，應用Design Expert 8.0.6軟件進行二次多項式逐步回歸擬合，得到方程：g＝30.66－4.341＋1.752＋1.943－0.4012－0.8313＋0.3523－0.1412－0.01722－1.5432。通過方程可以看出，在測定范圍內，隨著1的升高，膠凝溫度明顯降低，而隨著2、3的升高，膠凝溫度明顯升高。該模型＜0.000 1，表明有極顯著性差異；相關系數2＝0.985 8，表明該模型預測值與測定值的相關性良好。失擬項＝0.102 1＞0.05，不具有顯著性，表明方程擬合度和可信度良好。利用Design Expert 8.0.6軟件繪制實驗結果的二維等高線圖和三維效應圖見圖2。

表1 Box-Behnken效應面法實驗的因素水平、實驗設計與結果

表2 各項因素回歸系數和方差分析

圖2 X1、X2、X3對Tg影響的效應面圖與等高線圖

2.5.5 優化工藝驗證 通過分析結果，并將膠凝溫度控制在34～36 ℃，從而得到最佳處方為1＝20.10%，2＝2.54%，3＝2.00%；即P407 20.10%，P188 2.54%，PEG6000 2.00%。按優化工藝制備3批溫敏凝膠，測定其g，實測值為（34.2±0.2）℃（＝3），預測值為34.15 ℃，偏差為0.73%。

2.6 凝膠載藥量的考察

2.6.1 載藥量對溫敏凝膠性狀的影響考察 采用上述最優處方，考察不同載藥量，按照“2.3”項方法制備載藥量為2%、3%、4%、5%、6%、7%、9%、10%、12%、15%、20%（按原粉計，且黃柏-白芷1∶1）的凝膠，比較以下性狀，結果見表3。

2.6.2 載藥量對凝膠黏彈性區間及頻率掃描曲線的影響考察 使用Anton Paar Physica MCR101型流變儀，試樣用PP50不銹鋼平行板（直徑50 mm），間隙1 mm，測定儲能模量（′）和損耗模量（″），測試均在（35.0±0.5）℃下進行。通過振幅掃描（應變為0.01%～100%，頻率為10 rad/s）測定樣品的線性黏彈區間，結果如圖3所示，頻率掃描（應變為1%，頻率掃描范圍0.1～100 Hz）如圖4所示。

由上述結果可知，載藥量對溫敏凝膠的黏彈性及頻率掃描曲線無顯著性影響，但是隨著載藥量增加溫敏凝膠的pH值也隨之降低，并呈現出一定的pH值依賴性，當載藥量過大時，溫敏凝膠的膠凝溫度開始下降，可能原因為載藥量增加，pH值降低，溶液存在大量氫離子，從而影響了分子間氫鍵結合力，相鄰分子間的纏結作用減弱，致使膠凝溫度降低。綜合以上結果確定最終凝膠載藥量為5%。

表3 不同載藥量的考察

2.7 黃白溫敏凝膠的質量評價

2.7.1 外觀及性狀觀察 室溫下，載藥溶膠為黃棕色均勻分散的溶液，流動性好。相變溫度以上（溫度＞34.2 ℃）載藥凝膠為黃棕色的半固體，形態良好，透明均勻，有一定彈性，不能流動，見圖5。

圖3 不同載藥量的線性黏彈區間圖

圖4 不同載藥量的頻率掃描曲線圖

2.7.2 膠凝溫度與膠凝時間的測定 采用“2.4”項下方法測定凝膠的膠凝溫度為（34.2±0.2）℃，另取4 ℃冷藏24 h的溫敏凝膠溶液，恢復至室溫后，取5 mL于西林瓶中，放在35 ℃水浴鍋中，以倒置西林瓶15 s凝膠溶液未發生流動時的時間作為該凝膠溶液的膠凝時間，平行測定3次，結果膠凝時間為（53.6±0.8）s。

圖5 溫敏凝膠形態

2.7.3 pH值的測定 使用pH計直接測定溫敏凝膠的pH值，結果pH值為5.78±0.02，符合經皮給藥制劑pH 5～7的要求。

2.7.4 離心、耐寒、耐熱穩定性 取本品適量置于離心管中，分別于3000 r/min離心30 min、50 ℃和?20 ℃儲存24 h，均未出現分層現象。

2.7.5 溫敏凝膠的SEM觀察 先將溫敏凝膠制成凍干粉，取適量凝膠粉末，噴金，加速電壓3.0 kV，采用場發射SEM[10-11]觀察凝膠表面的微觀結構形態及其孔徑大小。結果溫敏凝膠三維網狀結構圖見圖6。

圖6 溫敏凝膠SEM圖

2.7.6 溫敏凝膠的滲透壓的測定 采用Osmomat 030冰點滲透壓計測定凝膠的滲透壓[12]，測得其平均滲透壓為1302 mOsmol/kg，大于等滲溶液（280～320 mOsmol/kg），即其具有高滲作用，基于唐南平衡理論，表明該制劑應用于蛇蟲咬傷所致的腫脹傷口，具有良好的消腫作用。

2.7.7 溫敏凝膠的流變學性質考察[13-14]使用Anton Paar Physica MCR101型流變儀，試樣用PP50不銹鋼平行板（直徑50 mm），間隙1 mm，除相變溫度測定外其他均在（35.0±0.5）℃下進行測試。

（1）凝膠線性黏彈區（LVER）：通過LVER測試結果可得到凝膠的內部三維網狀結構被破壞所能承受的最大形變，振幅掃描（應變為0.01%～100%，頻率為10 rad/s）測定樣品的LVER的結果見圖7。從圖中可知應變（）＜1%，′＞″，彈性占主體，既樣品表現出凝膠結構，當＞1%，′開始下降，當′＝″時，凝膠結構完全被破壞，′＜″，黏性占主體，表現出流體性質。因此，所有的動態振蕩實驗都需控制在1%以內。

圖7 凝膠線性黏彈區間

（2）相變溫度測定：在振蕩模式下測量凝膠的溶膠-凝膠轉變溫度。頻率固定在1 Hz，進行1%應變。樣品以2 ℃/min的速率加熱，溫度范圍在5～50 ℃。結果見圖8和9。由圖8可知，在34 ℃左右′和″相交，交點即其相變溫度。在此溫度前樣品主要存在損耗模量，表現出明顯的流體性質，相變溫度后逐漸′＞″，說明凝膠結構正在形成，且′和″趨于平緩，證明凝膠黏彈性趨于穩定。圖9為通過復合黏度可表征樣品整體的黏彈性質，隨著溫度的升高，樣品的復合黏度發生突變，突變點即為凝膠的相變溫度，與圖8一致。

（3）頻率掃描：頻率掃描旨在描述樣品在非破壞性變形范圍內的時間相關特性，在振蕩模式下對凝膠進行頻率掃描（應變為1%，頻率掃描范圍0.1～100 Hz）。高頻率指在較短時間尺度內的快速運動，而低頻率指在較長時間尺度內的緩慢運動或靜止狀態。可用于表征凝膠內部結構的長期穩定性。結果如圖10所示。在整個頻率掃描范圍內中，′曲線始終高于″曲線，表現出明顯的以彈性為主的特性，且′較穩定，未出現顯著的頻率依賴性，表明凝膠始終具有穩定的三維網狀結構。

圖8 動態溫度掃描圖

圖9 復合黏度隨溫度變化掃描圖

圖10 頻率掃描圖

2.8 溫敏凝膠離體經皮滲透性研究[15-16]

2.8.1 白芷中歐前胡素經皮滲透方法學的建立

（1）色譜條件：菲羅門C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（75∶25）；體積流量1.0 mL/min；檢測波長300 nm；進樣20 μL；柱溫30 ℃。理論塔板數≥5000，分離度＞1.5。

（2）對照品溶液的配制：精密稱定歐前胡素對照品適量于量瓶中，加甲醇定容并制成歐前胡素質量濃度為14.75 μg/mL的對照品儲備液，低溫密封儲存，備用。

（3）專屬性試驗：精密吸取歐前胡素對照品溶液、藥物凝膠透皮接收液、空白凝膠透皮接收液各20 μL，按“2.8.1（1）”項色譜條件測定，記錄色譜圖（圖11），結果表明方法專屬性良好。

（4）線性關系考察：取歐前胡素對照品儲備液，用甲醇依級稀釋至7.38、3.69、1.84、0.92、0.46、0.23 μg/mL的系列歐前胡素對照品溶液，0.22 μm微孔濾膜濾過，將對照品溶液注入液相色譜儀，按“2.8.1（1）”項方法測定峰面積。以對照品質量濃度為橫坐標（），峰面積積分值為縱坐標（），繪制標準曲線，結果顯示歐前胡素的線性方程為＝34.857－0.916 6，＝1.000 0，結果表明歐前胡素在0.23～14.75 μg/mL線性關系良好。

圖11 歐前胡素對照品(A)、藥物凝膠透皮接收液(B)和空白凝膠透皮接收液(C)的HPLC圖

（5）精密度試驗：精密吸取0.92 μg/mL歐前胡素對照品溶液20 μL，按“2.8.1（1）”項方法重復進樣6次，測定峰面積，結果歐前胡素峰面積的RSD為0.59%，表明儀器精密度良好。

（6）重復性試驗：平行制備透皮供試品溶液6份，按“2.8.1（1）”項方法測定，計算的歐前胡素質量濃度的RSD為4.37%，結果表明該實驗重復性良好。

（7）穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣，測定峰面積，計算其峰面積的RSD為0.34%。結果表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

（8）加樣回收率試驗：精密吸取1.88、3.76、7.36 μg/mL歐前胡素對照品儲備液，用空白凝膠透皮接收液配制低、中、高質量濃度的質控樣品，各平行3份，按“2.8.1（1）”項下色譜條件測定，并計算加樣回收率，結果平均加樣回收率為101.64%，RSD為2.08%。

2.8.2 黃柏中鹽酸小檗堿經皮滲透方法學的建立

（1）色譜條件：菲羅門C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100毫升加十二烷基磺酸鈉0.08 g）；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃，檢測波長265 nm，進樣量5 μL。

（2）對照品溶液的配制：精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量于量瓶中，加甲醇定容并制成鹽酸小檗堿質量濃度為125.00 μg/mL的對照品儲備液，低溫密封儲存，備用。

（3）專屬性試驗：精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液、藥物凝膠透皮接收液、空白凝膠透皮接收液各5 μL，按“2.8.2（1）”項色譜條件測定，記錄色譜圖（圖12），結果表明方法專屬性良好。

圖12 鹽酸小檗堿對照品(A)、藥物凝膠透皮接收液(B)和空白凝膠透皮接收液(C)的HPLC圖

（4）線性關系考察：取鹽酸小檗堿對照品儲備液，用甲醇依級稀釋至62.50、31.25、15.63、7.81、3.91、1.96 μg/mL的系列鹽酸小檗堿對照品溶液，0.22 μm微孔濾膜濾過，將對照品溶液注入液相色譜儀，按“2.8.2（1）”項方法測定峰面積。以對照品質量濃度為橫坐標（），峰面積積分值為縱坐標（），繪制標準曲線，結果顯示歐前胡素的線性方程為＝11.231－10.604，＝0.999 8，結果表明鹽酸小檗堿在1.96～125.00 μg/mL線性關系良好。

（5）精密度試驗：精密吸取15.63 μg/mL鹽酸小檗堿對照品溶液5 μL，按“2.8.2（1）”項方法重復進樣6次，測定峰面積，結果鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.15%，表明儀器精密度良好。

（6）重復性試驗：平行制備透皮供試品溶液6份，按“2.8.2（1）”項方法測定，計算鹽酸小檗堿質量濃度的RSD為2.19%，結果表明該實驗重復性良好。

（7）穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、12、24 h進樣，測定峰面積，計算鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.13%。結果表明供試品溶液24 h內穩定性良好。

（8）加樣回收率試驗：精密吸取15.63、31.25、62.50 μg/mL鹽酸小檗堿對照品儲備液，用空白凝膠透皮接收液配制低、中、高質量濃度的質控樣品，各平行3份，按“2.8.2（1）”項色譜條件測定，并計算加樣回收率，結果平均加樣回收率為104.16%，RSD為0.38%。

2.8.3 小鼠離體皮膚的制備 選取18～22 g健康SPF級昆明雄性小鼠，剃除腹部毛發，麻醉后剃毛，快速分離腹部皮膚，用脫脂棉擦除皮下脂肪及黏液組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分后用鋁箔紙包裹，于?20 ℃凍存備用。

2.8.4 離體透皮滲透擴散裝置及條件 采用改良Franz擴散池，擴散面積1.825 cm2，接收池容積為12 mL，恒溫水浴溫度控制在（37.0±0.5）℃，轉速設定為300 r/min，每次取樣量為1 mL。將制備好的小鼠腹部皮膚按照擴散池面積裁剪，置于擴散池與接收池之間，真皮層面向接收池。接收池中放入磁力攪拌子，并加入含30%乙醇溶液的生理鹽水12 mL，使用前超聲脫氣。將1 mL凝膠均勻涂抹于皮膚表面，平行6份。分別于4、6、8、10、12、24 h精密移取接收液1 mL，同時立即補加等量的空白接收液，以保證接收液環境不變。接收液以0.22 μm的微孔濾膜濾過，備用。

2.8.5 數據分析[17]藥物的累積透過量（Q）的計算公式如下。

表示有效擴散面積（1.825 cm2），為接收液總體積（12 mL），V為取樣體積（1 mL），C為第次取樣時接收液中藥物的質量濃度，C表示第次取樣時接收液中藥物的質量濃度

以藥物的Q為縱坐標，時間為橫坐標，并采用零級、一級、Higuchi、Ritger-Peppas、Hixon-Crowell模型對-進行模型擬合，同時對曲線中的直線部分進行線性回歸，求出的直線斜率即為穩態透皮速率［s，μg/(cm2·h)］，實驗結束后，取下皮膚，生理鹽水洗凈，將給藥部分皮膚剪碎后，加入甲醇1 mL，超聲30 min，于8000 r/min離心10 min，取上清液，0.22 μm微孔濾膜濾過，測定含量，并計算藥物滯留量（s，s＝/，為有效擴散面積，為溶解樣品體積，為測得的藥物質量濃度），結果見圖13和表4。黃白溫敏凝膠中歐前胡素與鹽酸小檗堿的釋藥均Huguchi釋放動力學方程，且Ritger-Peppas方程擬合系數均大于0.89。

圖13 溫敏凝膠中歐前胡素和鹽酸小檗堿累積透過量(, n = 5)

3 討論

溫敏凝膠是一種新型的智能緩釋制劑，其凝膠過程不需要額外的添加劑和化學反應參與，且溫度是生物體本身所具備的一種體征，故其自發現以來一直是醫藥領域的研究熱點，已被應用于黏膜給藥、注射給藥、直腸給藥及經皮給藥等。

在凝膠劑的制備過程中，通常以水作為介質，故只能溶解水溶性藥物，當需要在凝膠體系中加入不溶于水或難溶于水的藥物時，親水性助溶劑的使用是必要的。本研究使用Turbiscan Lab穩定性分析儀比較了不同助溶劑對溫敏凝膠體系的穩定性影響，其優點在于：①溫敏凝膠在常溫下呈液態溶膠狀態，符合Turbiscan Lab穩定性分析儀的測定要求；②儀器測量時采用非進入式方法，不稀釋，無外力，不攪動，可直接表述分散體系的真實狀態；③可準確、快速、完全地表征處方不穩定性和變化過程，為溫敏凝膠的處方篩選和評價提供了理想手段。

本實驗采用Box-Behnken響應面法[18]對處方進行了優化，二項式擬合效應面反映了P407、P188、PEG6000與溫度的變化規律，且模型擬合度和可信度良好。此外，本研究還對溫敏凝膠進行了表征，掃描電鏡結果可看出溫敏凝膠形成了一定的三維網狀結構，且網狀結構排列整齊，孔隙疏松，相互貫通；通過冰點滲透壓儀測定其滲透壓，發現以高分子材料制備的溫敏凝膠劑具有高滲作用，基于唐南平衡理論，可知其作用于腫脹皮膚可以快速的反滲出腫脹部位的組織液，以達到良好的消腫止痛作用，這不僅解決了散劑由于礦物藥加入，在溶解時放熱和高濃度鹽溶液環境帶來的皮膚刺激性，同時水凝膠的使用也可以增加患者舒適性與適應性；同時還采用流變儀對溫敏凝膠流變學性質進行了評價，流變學特性是凝膠劑的重要特征[19]，相對于黏稠度、硬度、涂展性這類宏觀且主觀性質評價，流變學的精確度、可信度、重復性更高[20]，且獲得的參數對于分析凝膠結構、凝膠強度、黏彈性、膠凝行為、物理穩定性等具有更高價值和意義，并使凝膠劑的質量評價更趨科學化[21]。

表4 歐前胡素和鹽酸小檗堿的經皮滲透動力學參數(,n = 5)

本實驗采用Franz擴散池法研究了黃白溫敏凝膠的體外經皮吸收行為，結果顯示其中歐前胡素和鹽酸小檗堿的累積滲透量Q-模型擬合均符合Huguchi釋放動力學方程，表明藥物釋放存在一定的緩釋效果，且Ritger-Peppas方程擬合系數大于0.89，說明釋藥機制骨架溶蝕作用。

由于本實驗主要研究了完整皮膚的經皮滲透性，而臨床實際情況為被蛇蟲咬傷的破損皮膚，故后期應該增加其他更深入的研究從而更真實的描述藥物的經皮吸收行為。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 王志強, 陳思婷, 吳事仁, 等. 王萬春運用中醫藥綜合治療毒蛇咬傷經驗 [J]. 光明中醫, 2017, 32(12): 1706-1708.

[2] Wang W, Wat E, Hui P C,. Dual-functional transdermal drug delivery system with controllable drug loading based on thermosensitive poloxamer hydrogel for atopic dermatitis treatment [J]., 2016, 6: 24112.

[3] Qi X J, Liu X Y, Tang L M,. Anti-depressant effect of curcumin-loaded guanidine-chitosan thermo-sensitive hydrogel by nasal delivery [J]., 2020, 25(3): 316-325.

[4] Gong C, Qi T, Wei X,. Thermosensitive polymeric hydrogels as drug delivery systems [J]., 2013, 20(1): 79-94.

[5] Bordes C, Snabre P, Frances C,. Optical investigation of shear- and time-dependent microstructural changes to stabilized and depletion- flocculated concentrated latex sphere suspensions [J]., 2003, 130(1/2/3): 331-337.

[6] 孫美潔, 鄭劍平, 王浩, 等. 利用Turbiscan Lab穩定性分析儀研究水焦漿的穩定性 [J]. 石油學報: 石油加工, 2016, 32(6): 1164-1170.

[7] 盧浩揚, 林媛媛, 車俊秀, 等. 星點設計-效應面法優化芷芎散溫敏凝膠的處方及其鼻黏膜滲透特性研究 [J]. 中草藥, 2014, 45(13): 1845-1849.

[8] 梁浩明, 龍曉英, 盧彬. 黃芩苷外用溫敏凝膠的處方設計及優化 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2014, 20(24): 34-38.

[9] 劉媛媛. 溫敏型眼用葛根素原位凝膠的制備與質量評價 [J]. 華西藥學雜志, 2019, 34(3): 132-136.

[10] 潘亞輝, 高樹中. 基于溫度響應性納米復合物對臍療新制劑及藥物釋放的研究 [J]. 中華中醫藥雜志, 2019, 34(5): 2145-2149.

[11] 羅堯堯, 廖倩, 王婷, 等. 美洲大蠊溫敏凝膠的制備及其促糖尿病大鼠創面修復作用考察 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2020, 26(14): 164-172.

[12] 李春雨, 張丹參, 王樹, 等. 珍珠滴眼凝膠的滲透壓測定 [J]. 河北北方學院學報: 醫學版, 2009, 26(1): 16-18.

[13] 唐隨意. 布地奈德溫敏凝膠灌腸液的研究 [D]. 武漢: 湖北中醫藥大學, 2019.

[14] 李曼. 托吡卡胺眼用溫度敏感原位凝膠的研制 [D]. 重慶: 第三軍醫大學, 2014.

[15] 管詠梅, 宋昕祁, 劉佳, 等. 解郁安神凝膠貼膏劑的處方優選與質量評價 [J]. 中草藥, 2019, 50(23): 5731-5738.

[16] 劉麗麗, 史畑女, 方蕾, 等. 馬錢子總堿-白芍總苷脂質立方液晶納米粒制備及體外評價 [J]. 中草藥, 2019, 50(17): 4076-4083.

[17] 夏愛曉, 蔣正立, 李勝英, 等. 馬來酸噻嗎洛爾溫敏凝膠的制備及體外透皮考察 [J]. 中國藥師, 2020, 23(7): 1453-1456,1463.

[18] 甘帥, 章津銘, 江茂源, 等. 基于響應面法優選美洲大蠊口腔原位溫敏凝膠的制備研究 [J]. 中草藥, 2020, 51(8): 2134-2140.

[19] Pisal P B, Patil S S, Pokharkar V B. Rheological investigation and its correlation with permeability coefficient of drug loaded carbopol gel: Influence of absorption enhancers [J]., 2013, 39(4): 593-599.

[20] 鄭學晶, 劉芳蓓, 裴瑩, 等. 水凝膠流變學研究概況 [J]. 高分子通報, 2017(5): 1-10.

[21] Siska B, Snejdrova E, Machac I,. Contribution to the rheological testing of pharmaceutical semisolids [J]., 2019, 24(1): 80-88.

Selection and evaluation of prescription of temperature-sensitive-gel ofand(Yellow-white)

ZHU Wei-feng1, LIU Shui-ting1, WANG Wan-chun2, GUAN Yong-mei1

1. Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine (TCM) of Ministry of Education, Jiangxi University of TCM, Nanchang 330004, China 2. Department of External Medicine, Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

To select and optimize theand(Yellow-white) thermosensitive in-situ gel, and to investigate its transdermal permeability.Using poloxamer 407, poloxamer 188, and PEG6000 as gel matrix materials, and taking gelation temperature as investigation index, Box-Behnken response surface method was used to optimize the gel matrix prescription. At the same time, the thermosensitive gel was characterized, and the transdermal permeability of drugs in the yellow-white thermosensitive in-situ gel was investigated by Franz transdermal diffusion cell.The best prescription of thermosensitive in-situ gel is P407 20.10%, P188 2.54%, PEG6000 2.00%, and the gelation temperature is (34.2 ± 0.2) ℃. Within 24 h, the cumulative permeation of imperatorin and berberine were (14.07 ± 1.34) and (395.72 ± 35.04) μg/cm2, respectively, and the release process of imperatorin and berberine followed Higuchi kinetic equation.The gel prepared in this study has temperature sensitivity and slow release, which can lay the foundation for clinical preparation for treating snake and insects bites.

yellow-white temperature sensitive in situ gel; optimization of prescription; Box-Behnken response surface methodology; percutaneous permeability; imperatorin; berberine hydrochloride; Higuchi kinetic equation; temperature sensitive; release slowly

R283.6

A

0253 - 2670(2021)07 - 1914 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.07.008

2020-11-20

國家自然科學基金地區基金項目（82060722）；江西省自然科學基金面上項目（20202BAB206081）

朱衛豐，教授，博士研究生導師，博士，研究方向為中藥新劑型與新制劑研究。E-mail: zwf0322@126.com

管詠梅，博士，副教授，碩士生導師，研究方向為藥物新劑型、新技術。Tel: (0791)87118614 E-mail: guanym2008@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]