我國東北部分地區蜱攜帶森林腦炎病毒的分離鑒定

王 迪，姬洪衛，王澤東，李曉慧，張 力，魏 峰，劉 全 (1.吉林農業大學 生命科學學院，吉林 長春 130118；.軍事醫學研究院 軍事獸醫研究所，吉林 長春 1301；3.佛山科學技術學院 生命工程與科學學院，廣東 佛山 58000)

蜱傳腦炎病毒(tick-borne encephalitis virus，TBEV)是一種臨床上以突發高熱、腦膜刺激癥、頭痛嘔吐、感覺過敏、意識障礙及頸和肢體癱瘓為特征的嗜神經病毒[1]。該病毒分布廣泛，主要流行于歐洲和亞洲地區。在我國主要流行于東北、西北和西南等林區。蜱為TBEV的主要傳播媒介，全溝硬蜱及蓖子硬蜱是TBEV的主要媒介蜱種[2]。

TBEV的基因組為單股正鏈RNA，含有單一閱讀編碼框，編碼3個結構蛋白(C、PrM、E)和7個非結構蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。其中E蛋白為TBEV的重要結構蛋白，該蛋白內單個氨基酸的改變可影響病毒的毒力和血凝活性等[3]。因此，對于TBEV的分子流行病學研究主要集中于E蛋白中。

近年來，隨著氣候變暖、人類活動范圍擴大，我國森林腦炎又稱蜱傳腦炎(TBE)發病率有明顯上升趨勢[4]。本研究為了解我國東北地區蜱源TBEV的流行及毒株進化情況，通過RT-PCR方法對蜱攜帶TBEV的陽性率及毒株序列突變情況進行分析，為我國東北地區森林腦炎的科學防控奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 蜱樣品采集與鑒定2015年4—6月在吉林省吉林市和黑龍江省雙鴨山市使用布旗法采集游離成年蜱，按照采集地點和形態學進行分類，平均15只/管。GenBank下載已發表的硬蜱科、革蜱屬和血蜱屬的16SrRNA序列，利用Vector NTI軟件設計蜱種鑒定引物，由吉林庫美生物有限公司合成。

1.2 TBEV檢測及統計學分析使用TIANamp Virus RNA Kit 試劑盒提取病毒組RNA，TaKaRa PrimeScript RT reagent Kit和gDNA Eraser合成cDNA鏈。……