共表達PCV2 Cap蛋白和IL-2重組變異株偽狂犬病病毒構建及對小鼠的免疫原性

時慶賀，馬寧寧，劉 占，鄧夢夢，郭子儀，史志斌，陳 陸，王川慶 (河南農業大學 動物醫學院，河南 鄭州 450002)

豬圓環病毒2型(porcine circovirus type 2，PCV2)主要引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。PCV2感染能夠引起機體產生嚴重的免疫抑制，易并發和繼發其他傳染病，從而增加豬群的發病率和死亡率。ORF2編碼的Cap蛋白可與宿主細胞的病毒受體結合，是PCV2主要的免疫原蛋白[1-3]。自2011年底以來，偽狂犬病病毒(pseudorabies virus，PRV)變異株在我國大部分地區流行造成豬偽狂犬病(porcine pseudorabies，PR)再次暴發，已有的PR基因缺失活疫苗不能對PRV變異毒株提供100%保護的報道[4]。白介素2(interleukin 2，IL-2)作為免疫佐劑能誘導T淋巴細胞增殖和分化，增強自然殺傷細胞的殺傷作用，提高單核巨噬細胞吞噬和抗原識別能力，在細胞和體液免疫反應中起關鍵作用，克服了傳統佐劑的缺點[5-7]。因此，IL-2有望成為一種安全、經濟、高效的新型免疫佐劑。基于PR基因缺失活疫苗的成功應用以及PRV大部分基因如TK基因[8]是病毒復制非必需的。因此，將PRV流行變異株作為載體，在其基因組上插入外源基因，構建病毒活載體疫苗可達到“一針多防”的效果[9]。本研究擬將PCV2 YY株ORF2和豬IL-2基因插入到前期用PRV QYY變異株構建的rPRV-gE-/TK-/EGFP+缺失的TK基因位點，評價重組病毒免疫原性，以期獲得有效預防PMWS及PR的重組活載體疫苗株。

1 材料與方法

1.1 質粒、細胞及毒株含有CMV啟動子和polyA尾的pZJ-1真核表達載體及以pMD18-T為載體含有PRV TK基因上下游同源臂的重組質粒pTK、rPRV-gE-/TK-/EGFP+毒株和rPRV-gE-/TK-/ORF2+重組病毒為本實驗室構建并保存；E.coliDH5α感受態細胞、非洲綠猴腎細胞(Vero)、人腎上皮細胞(293T)、倉鼠腎細胞(BHK-21)、PRV QYY株(2012年分離流行株)和PCV2 YY毒株(PCV2d)為實驗室保存。……