免疫組化法檢測肝癌組織Twist表達的臨床意義

韋小芳 歐傳話 李紹龍 毛小玲

肝細胞癌是肝癌最常見的亞型，屬國內常見惡性腫瘤之一，具有高度侵襲性及轉移性，近年來其發病率呈逐年增長趨勢，位居全球因惡性腫瘤致死亡人數的第三位，與長期大量飲酒、乙肝或丙肝病毒感染、攝入含有真菌代謝產物等密切相關[1]。雖然近年來其診斷和治療手段均取得了較大的突破，如高分辨率螺旋CT、肝動脈血管造影及肝動脈化療栓塞、熒光腹腔鏡肝切除術等，但患者生存率仍不太理想[2-6]。目前上市靶向治療藥物作用有限，故積極探尋新的能早期預測肝細胞癌及其預后的分子標志物尤為重要，以期提供一種新的腫瘤治療靶點[7-8]。本研究采用免疫組化法檢測Twist在136例肝細胞癌患者中的表達。

資料與方法

一、一般資料

入選肝細胞癌患者136例，樣本納入時間為2013年1月至2017年1月。納入標準：所有患者均于入院后確診[9]；術前所有患者均未行分子靶向治療等；臨床隨訪資料完整(中位隨訪時間為20個月)。排除標準：①重要臟器功能異常；②肝細胞癌以外其他類型肝癌，如混合細胞性肝癌、彌漫性肝癌；③其他部位惡性腫瘤。136例患者中，腫瘤直徑5 cm以上46例；TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期分別50例、37例、30例、19例；配對癌旁肝組織85例。患者均簽署知情同意書。

二、研究方法

對腫瘤組織蠟塊行病理學分級，Twist蛋白表達采用免疫組化法檢測。細胞質見棕黃色顆粒判斷為Twist蛋白陽性。由2位經驗豐富的病理科醫師以雙盲法進行閱片，按照染色強度打分，0～3分，分別代表無染色、淡黃、棕黃、棕褐。后結合陽性細胞所占百分比進行評分，占比0、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100% 分別賦值0～4分，計算染色強度與陽性細胞百分比乘積，達4分或以上為免疫反應陽性。

三、統計學分析

結 果

一、不同組織中Twist蛋白表達分析

Twist蛋白免疫組化染色表現為棕黃色顆粒，呈彌漫性分布(圖1)。癌組織Twist陽性表達率為66.2%(90/136) vs癌旁肝組織5.9%(5/85)顯著較高(χ2=77.590，P<0.05)。

圖1 Twist陽性染色免疫組化染色(×400)

二、Twist陽性、陰性患者臨床病理參數差異分析

136例癌組織標本中有90例Twist蛋白陽性表達，46例Twist蛋白陰性表達。Twist陽性組病理分級為Ⅲ～Ⅳ級、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤細胞分化程度為低分化、包膜不完整、血管侵襲所占比例顯著高于Twist陰性組(P<0.05)，見表1。

表1 Twist蛋白表達與肝細胞癌患者臨床病理 參數的相關性(%，±s)分析

三、不同Twist蛋白表達者預后分析

Twist陽性、陰性者3年累積生存率分別為57.8%和65.2%，兩組基本相當(Log-rank值=2.133，P=0.162，圖2)。

圖2 兩組3年累積生存率比較

討 論

本研究結果顯示，組織內Twist過度表達可能與肝細胞癌有關，與既往報道相符[10]。薛棟等[11]報道發現，肝癌組織中Twist蛋白陽性表達率比癌旁肝組織更高。另有報道也證實Twist在肝細胞癌中高表達[12]。Twist表達可經阻斷細胞分化、對抗凋亡、通過抑制可變閱讀框基因/鼠雙微體2基因/p53途徑而阻抑p53腫瘤抑制通路等途徑誘發癌癥[13]。筆者認為，Twist基因癌基因特性明顯，可經多種途徑抑制細胞凋亡，考慮可能通過抑制E-鈣黏蛋白表達、誘導上皮細胞間質化來促進腫瘤形成、發展及轉移。與Zhao等[14]在胃癌中的研究結果是一致的，證實Twist表達與肝細胞癌密切相關。

此外，本研究結果顯示，Twist陽性組Ⅲ～Ⅳ級病理分級、Ⅲ～Ⅳ期TNM分期、低分化、包膜不完整、血管侵襲所占比明顯較高，提示Twist表達可用于病情評估。Zhang等[15]報道指出，Twist在肝癌組織中高表達，與分期、分化程度、血管侵襲等密切相關，證實了本結論。腫瘤進展、擴散是一系列病理改變的多步驟過程，此過程受激活或抑制、相互拮抗或協同等影響，推測Twist激活和Twist誘導上皮細胞間質化可能是腫瘤轉移的關鍵環節。此外，有報道顯示，Twist高表達可能提示肝癌侵襲危險性及不良轉歸，因此關注Twist表達對肝癌的預后評估有一定參考意義[16]。本研究中，發現Twist陽性組患者與陰性組患者3年累積生存率基本相當，可能與選取病例數偏少、觀察時間較短等因素有關，有待今后深入研究。

綜上，肝細胞癌患者癌組織Twist表達與病理學分級、TNM分期、分化程度、血管侵襲和預后密切相關，臨床應引起足夠重視。