海水池塘養(yǎng)殖縊蟶病原研究

袁 甜

(丹東市漁業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 丹東118000)

縊蟶(Sinonovacula constricta)在遼寧省丹東地區(qū)俗稱“小人仙”，主要分布在中國(guó)、日本和朝鮮等國(guó)的沿海地區(qū)?？O蟶作為中國(guó)四大海水養(yǎng)殖貝類之一，養(yǎng)殖歷史悠久。縊蟶營(yíng)埋棲生活，具有生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、味道鮮美且營(yíng)養(yǎng)豐富的特點(diǎn)，深得廣大消費(fèi)者的喜愛。因縊蟶的濾食性特點(diǎn)，在北方海水池塘養(yǎng)殖中常將縊蟶作為底層貝類與魚、蝦、海蜇等經(jīng)濟(jì)生物進(jìn)行混養(yǎng)。隨著縊蟶養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大、密度的增加，生長(zhǎng)緩慢、死亡等現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，這就直接導(dǎo)致了養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)收入的下降甚至虧損。本文對(duì)海水池塘養(yǎng)殖縊蟶進(jìn)行病原研究，旨在通過(guò)本研究查找死亡原因，“對(duì)癥下藥”盡早預(yù)防，提高縊蟶產(chǎn)量和減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

選取丹東東港縊蟶海水養(yǎng)殖池塘5口，池塘分布在4個(gè)沿海鄉(xiāng)鎮(zhèn)，平均面積為5.3公頃、水深1.8米，池底為泥沙底，含泥量為80%左右，利用池底10%面積做的蟶田進(jìn)行縊蟶養(yǎng)殖，縊蟶放苗時(shí)間相同，苗種來(lái)源一致。養(yǎng)殖模式為縊蟶、中國(guó)對(duì)蝦、海蜇混養(yǎng)。在縊蟶易發(fā)病季節(jié)即7－9月，平均每10天采集縊蟶樣品1次，采集數(shù)量為150枚。感染試驗(yàn)用健康縊蟶取自東港某健康養(yǎng)殖場(chǎng)。

2.試驗(yàn)方法

(1)測(cè)量及解剖鏡下觀察。將采集回實(shí)驗(yàn)室的縊蟶稱重、測(cè)量，并在解剖鏡下觀察，記錄體重以及鏡檢狀態(tài)。

(2)細(xì)菌分離。取有病癥的活縊蟶，在無(wú)菌條件下用一次性無(wú)菌接種針取縊蟶鰓、外套膜和消化道，劃線在TSC和TCBS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，25℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，挑取優(yōu)勢(shì)單菌落在TSC平板上純化培養(yǎng)后移入試管斜面中保存。

(3)細(xì)菌鑒定。生化鑒定選用法國(guó)梅里埃生物公司生產(chǎn)的微生物自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行生化特征分析。分子生物學(xué)鑒定為將分離菌擴(kuò)增、16s rDNA基因序列測(cè)序后進(jìn)行Blast比對(duì)，結(jié)果顯示菌株與相應(yīng)基因相似率達(dá)99%。

3.人工感染試驗(yàn)

選擇健康的縊蟶供感染試驗(yàn)用。將培養(yǎng)約18小時(shí)的供試菌制成菌懸液，離心(3 000轉(zhuǎn)/分)8分鐘，棄上清液，用無(wú)菌生理鹽水制成菌懸液。試驗(yàn)組和對(duì)照組水體均為10升，試驗(yàn)組和對(duì)照組縊蟶數(shù)量為50個(gè)，試驗(yàn)組水體中將菌稀釋為約107CFU/毫升，溫度控制在(23±0.5)℃，鹽度20，連續(xù)充氣，觀察縊蟶發(fā)病癥狀及死亡情況。

4.水質(zhì)理化指標(biāo)的測(cè)定

用便攜式水質(zhì)分析儀檢測(cè)水溫、溶氧、鹽度、pH，用多參數(shù)水質(zhì)分析儀檢測(cè)氨氮、亞硝酸鹽、磷酸鹽、化學(xué)耗氧量。

二、結(jié)果與分析

1.縊蟶生長(zhǎng)情況

根據(jù)3個(gè)月的生長(zhǎng)跟蹤，5口池塘縊蟶表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)情況，9月30日取樣測(cè)量情況(表1)可以看出，1號(hào)和5號(hào)池塘縊蟶長(zhǎng)勢(shì)良好，2、3、4號(hào)池塘縊蟶長(zhǎng)勢(shì)均表現(xiàn)不佳。并且在跟蹤調(diào)查中發(fā)現(xiàn)2、3、4號(hào)池塘縊蟶均有不同程度的發(fā)病以及死亡現(xiàn)象。

表1 縊蟶生長(zhǎng)情況

2.分離菌株的檢定

從縊蟶鰓、外套膜、腸道分離得到24株菌株，用全自動(dòng)細(xì)菌分析儀對(duì)病原菌初步鑒定，結(jié)果分別為殺鮭氣單胞菌、溶藻弧菌。將分離菌擴(kuò)增、16s rDNA基因序列測(cè)序后進(jìn)行Blast比對(duì)，結(jié)果顯示菌株與相應(yīng)基因相似率達(dá)99%。

3.人工感染試驗(yàn)

人工感染24小時(shí)后縊蟶開始出現(xiàn)死亡，感染48小時(shí)后，溶藻弧菌菌株感染縊蟶死亡率達(dá)到100%，殺鮭氣單胞菌菌株感染縊蟶死亡率達(dá)到48.8%。感染縊蟶主要表現(xiàn)為閉殼肌松弛、開合無(wú)力、對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍。對(duì)每組感染死亡的縊蟶解剖，取鰓、外套膜、腸道分離得到的細(xì)菌與感染菌株一致。對(duì)照組縊蟶無(wú)死亡。

4.水質(zhì)指標(biāo)和病原菌對(duì)縊蟶生長(zhǎng)情況的影響

池塘水溫22～28℃、溶氧4.7～5.6毫克/升，但是根據(jù)監(jiān)測(cè)顯示2、3、4號(hào)塘口氨氮和亞硝酸鹽含量超標(biāo)(表2)，同時(shí)在2、3號(hào)塘口分別檢測(cè)出殺鮭氣單胞菌和溶藻弧菌。這一檢測(cè)結(jié)果與縊蟶生長(zhǎng)情況吻合，2、3、4號(hào)塘口生長(zhǎng)不佳，2、3號(hào)塘口出現(xiàn)患病死亡縊蟶。

表2 水質(zhì)指標(biāo)和病原菌對(duì)縊蟶生長(zhǎng)情況比對(duì)

三、討論

縊蟶作為海水池塘底層養(yǎng)殖的主要品種，其產(chǎn)量的多少?zèng)Q定了池塘的經(jīng)濟(jì)效益，通過(guò)3個(gè)月的生長(zhǎng)跟蹤發(fā)現(xiàn)，水質(zhì)指標(biāo)中氨氮和亞硝酸鹽反映了池塘水質(zhì)的好壞，同時(shí)也是造成縊蟶增減的原因之一，導(dǎo)致縊蟶發(fā)病以及死亡的主要病原菌為殺鮭氣單胞菌和溶藻弧菌。在養(yǎng)殖過(guò)程中病害防治應(yīng)該始終貫徹“預(yù)防為主、防治結(jié)合”的方式，建議養(yǎng)殖戶堅(jiān)持每年翻新蟶田，利用冬季充分曬田，選擇優(yōu)質(zhì)蟶苗，適時(shí)地進(jìn)行水質(zhì)調(diào)節(jié)、底質(zhì)改良等。