核桃花化學(xué)成分的研究

李 倩

核桃花化學(xué)成分的研究

李 倩

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，河南省食品加工與流通安全控制工程技術(shù)研究中心，河南 鄭州 450002

研究核桃花的化學(xué)成分。利用正和反相硅膠、Sephadex LH-20及制備液相等柱色譜方法進(jìn)行分離純化，根據(jù)譜學(xué)數(shù)據(jù)及理化性質(zhì)鑒定化合物結(jié)構(gòu)，并采用MTT法檢測化合物的體外細(xì)胞毒活性。從核桃花95％乙醇水提取物中分離得到12個黃酮類化合物和7個生物堿類化合物，分別鑒定為金合歡素（1）、柚皮素（2）、5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮（3）、木犀草素（4）、草質(zhì)素（5）、白楊素（6）、異野櫻素（7）、3,5-二羥基-4′,7-二甲氧基黃酮醇（8）、槲皮苷（9）、異槲皮苷（10）、山柰酚（11）、槲皮素（12）、2-(4-羥基苯乙基)異吲哚啉-1,3-二酮（13）、吲哚-3-甲酸乙酯（14）、1,2,3,4-四氫去甲哈爾滿-1-酮（15）、3-醛基吲哚（16）、馬齒莧酰胺E（17）、青蘭素C（18）、-苯甲酰--苯丙氨酸（19）。除化合物4和9～12外，其余化合物均為首次從胡桃屬中分離得到，其中化合物13為1個新的天然產(chǎn)物。化合物2、3和5具有抑制人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞、人胃癌BGC-823細(xì)胞、人肺支氣管癌NCI-H1650 細(xì)胞、人卵巢癌A2780細(xì)胞的增殖作用。

核桃花；黃酮；生物堿；抗腫瘤；2-(4-羥基苯乙基)異吲哚啉-1,3-二酮；柚皮素；5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮；草質(zhì)素

核桃L.是胡桃科（Juglandaceae）胡桃屬落葉喬木植物，在我國大部分地區(qū)作為觀賞植物和經(jīng)濟(jì)植物廣泛種植。其果實(shí)核桃仁深受大家喜愛，其未成熟的花絮也是我國一些民間地區(qū)流行的蔬菜。該植物具有多種藥用價值，其干燥成熟種子被《中國藥典》2020年版收錄用于治療疾病[1-2]。在我國一些民間地區(qū)，核桃花也被用來預(yù)防癌癥。為進(jìn)一步開發(fā)核桃資源的應(yīng)用途徑，在前期研究[3-5]的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)對核桃花乙醇提取液的醋酸乙酯萃取物化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到19個化合物，12個黃酮類化合物分別鑒定為金合歡素（acacetin，1）、柚皮素（naringenin，2）、5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮（5,7-dihydroxy-6,8,4′- dimethoxyflavone，3）、木犀草素（luteolin，4）、草質(zhì)素（herbacetin，5）、白楊素（chrysin，6）、異野櫻素（isosakuranetin，7）、3,5-二羥基-4′,7-二甲氧基黃酮醇（3,5-dihydroxy-4′,7-dimethoxyflavone，8）、槲皮苷（quercitrin，9）、異槲皮苷（isoquercitrin，10）、山柰酚（kaempferol，11）、槲皮素（quercetin，12）；7個生物堿類化合物分別鑒定為2-(4-羥基苯乙基)異吲哚啉-1,3-二酮[2-(4-hydroxyphenethyl)- isoindoline-1,3-dione，13]、吲哚-3-甲酸乙酯（1-indole-3-carboxylic acid-ethyl ester，14）、1,2,3,4-四氫去甲哈爾滿-1-酮（1,2,3,4-tetrahydronorharman- 1-one，15）、3-醛基吲哚（1-indole-3-carbaldehyde，16）、馬齒莧酰胺E（oleracein E，17）、青蘭素（dracocephin C，18）、-苯甲酰--苯丙氨酸（-benzoyl--phenylalaninol，19）等。除化合物4和9～12外，其余均為首次從胡桃屬植物中分離得到，其中化合物13為1個新的天然產(chǎn)物。測定了該19個化合物對5種人癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，結(jié)果表明，化合物2、3和5具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

1 儀器與材料

Agilent 1100 series LC/MSD Trap SL型質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；Mercury-400、Inova-500、VNS-600型核磁共振儀（美國Varian公司）；Bruker Avance-III-600型核磁共振儀（Bruker公司）；Perkin-Elmer 241型旋光儀（德國Perkin-Elmer公司）；薄層色譜用硅膠GF254和硅膠G以及柱色譜用硅膠（200～300目）均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；ODS-A-HG為日本YMC公司產(chǎn)品；MCI GEL為日本三菱公司產(chǎn)品；Sephadex LH-20為Pharmacia公司產(chǎn)品；Agilent 1200型高效液相色譜儀；日本島津Prominenece UFLC；日本島津LC-6AD型制備型高效液相色譜儀（紫外檢測器SPD-20A，PRC-ODS色譜柱250 mm×20 mm，5 μm）；色譜用水為杭州娃哈哈公司生產(chǎn)，其余用水為市售去離子水，分析純試劑為北京化工廠生產(chǎn)，色譜純試劑為美國fisher公司產(chǎn)品；實(shí)驗(yàn)用人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞、人肝癌HepG2細(xì)胞、人胃癌BGC-823細(xì)胞、人肺支氣管癌NCI-H1650細(xì)胞、人卵巢癌A2780細(xì)胞均由北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所藥理室提供。

實(shí)驗(yàn)用核桃花于2014年5月采自北京天壇公園，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所馬林副研究員鑒定為核桃L.的花序。植物標(biāo)本（ID-S-2601）保存于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所植物標(biāo)本室。

2 提取與分離

取干燥的核桃花75 kg，粉碎，用95%乙醇回流提取2次，分別為2、1 h，每次用溶劑量均以浸沒過藥材為度。合并乙醇提取液并濃縮；濃縮液用等體積的石油醚萃取3次；將醇溶液減壓回收溶劑至無醇，加適量水混懸溶解；此混懸液用等體積的醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯萃取液并減壓濃縮，濃縮液（約3 L）用pH＝2的稀鹽酸萃取3次（每次1.95 L），醋酸乙酯層用蒸餾水洗3次后，減壓濃縮得中性醋酸乙酯部分450 g。將此醋酸乙酯萃取物用硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以三氯甲烷-甲醇（25∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢測分為5個洗脫部分（Fr. 1～5）。

Fr. 1（58 g，三氯甲烷-甲醇25∶1）經(jīng)反相MCI柱色譜，依次以30%、50%、70%乙醇水梯度洗脫，得到3個洗脫部分（Fr. 1.1～1.3）。Fr. 1.1（15 g，30%乙醇）經(jīng)中壓制備色譜（MPLC），依次以30%、50%、70%、100%甲醇梯度洗脫，得到4個洗脫部分（Fr. 1.1.1～1.1.4）。Fr. 1.1.1（2.48 g，30%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 1.1.1-8～1.1.1-9（80 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（60∶40）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得到化合物15（4 mg，R＝21 min）；Fr. 1.1.1-10～1.1.1-12（72 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（60∶40）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物2（24 mg，R＝28 min）；Fr. 1.1.3（2.1 g，70%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 1.1.3-5～1.1.3-6（70 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（65∶35）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長進(jìn)行二次制備得化合物3（16 mg，R＝16 min）；Fr. 1.1.3-8（38 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（70∶30）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長進(jìn)行二次制備得化合物4（4 mg，R＝37 min）；Fr. 1.3（11 g，70%乙醇）經(jīng)MPLC，依次以40%、50%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脫，得到5個洗脫部分（Fr. 1.3.1～1.3.5）。Fr. 1.3.4（2.5 g，80%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 1.3.4-12～1.3.4-15（160 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（70∶30）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物5（54 mg，R＝50 min）；Fr. 1.3.4-18～1.3.4-19（180 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（65∶35）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物6（7 mg，R＝29 min）、7（6 mg，R＝47 min）和8（7 mg，R＝93 min）。

Fr. 2（72 g，三氯甲烷-甲醇20∶1）經(jīng)硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫（100∶1、50∶1、25∶1、15∶1、5∶1），經(jīng)薄層色譜檢測分為5個洗脫部分（Fr. 2.1～2.5）。Fr. 2.1（14 g，三氯甲烷-甲醇100∶1）經(jīng)MPLC，依次以30%、40%、50%、65%、80%、100%甲醇梯度洗脫，得到6個洗脫部分（Fr. 2.1.1～2.1.6）。Fr. 2.1.1（2.4 g，30%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.1.1-8～2.1.1-9（120 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（45∶50）為流動相，體積流量為6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物9（8 mg，R＝22 min）和10（15 mg，R＝27 min）；Fr. 2.1.2（3.5 g，40%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，得到4個洗脫部分（Fr. 2.1.2.1～2.1.2.4），其中Fr. 2.1.2.3（80 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（55∶45）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物16（10 mg，R＝18 min）；Fr. 2.1.3（2.5 g，50%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.1.3-1～2.1.3-4（180 mg）經(jīng)反相制備色譜，以乙腈-水（40∶60）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物19（12 mg，R＝28 min）；Fr. 2.1.4（2 g，65%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.1.4-7～2.1.4-8（120 mg）經(jīng)反相制備色譜，以乙腈-水（45∶55）為流動相，體積流量為6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物13（4 mg，R＝35 min）和14（5 mg，R＝44 min）；Fr. 2.1.6（2 g，甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.1.6～2.1.11（50 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（65∶35）為流動相，體積流量為6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物11（18 mg，R＝78 min）；Fr. 2.1.6-15～2.1.6-16（30 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（65∶35）為流動相，體積流量為6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物1（14 mg，R＝52 min）；Fr. 2.2（10 g，三氯甲烷-甲醇50∶1）經(jīng)MPLC，依次以60%、70%、90%甲醇梯度洗脫，得到3個洗脫部分（Fr. 2.2.1～2.2.3）。Fr. 2.2.1（2 g，60%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.2.1-3（65 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（40∶60）為流動相，體積流量為6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物17（15 mg，R＝15 min）；Fr. 2.2.2（2.2 g，70%甲醇）經(jīng)凝膠柱色譜，以甲醇洗脫，其中Fr. 2.2.1-12（100 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（55∶45）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長制備得化合物18（20 mg，R＝38 min）；Fr. 2.3（12 g，三氯甲烷-甲醇25∶1）經(jīng)MPLC，依次以60%、80%、100%甲醇梯度洗脫，得到3個洗脫部分（Fr. 2.3.1～2.3.3）。Fr. 2.3.1-5（200 mg）經(jīng)反相制備色譜，以甲醇-水（40∶60）為流動相，體積流量6 mL/min，以230 nm作為UV檢測波長二次制備得化合物12（12 mg，R＝8 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，ESI-MS/: 285 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.03 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.49 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 3.85 (3H, s, -OMe)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.1 (C-4), 163.3 (C-2), 162.2 (C-4′), 164.1 (C-7), 161.9 (C-5), 128.8 (C-2′, 6′), 115.0 (C-3′, 5′), 103.4 (C-3), 99.2 (C-6), 94.4 (C-8), 56.0 (-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，故鑒定化合物1為金合歡素。

化合物2：黃色粉末，ESI-MS/:273 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.13 (1H, s, 5-OH), 10.76 (1H, s, 7-OH), 9.56 (1H, s, 4′-OH), 7.29 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.77 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 5.86 (2H, brs, H-6, 8), 5.42 (1H, dd,= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 3.25 (1H, dd,= 17.2, 13.2 Hz, H-3ax), 2.26 (1H, dd,= 17.2, 2.4 Hz, H-3ex)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 196.9 (C-4), 167.1 (C-7), 163.9 (C-5), 163.4 (C-9), 158.2 (C-4′), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 102.2 (C-10), 96.2 (C-6), 95.4 (C-8), 78.9 (C-2), 42.4 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]，故鑒定化合物2為柚皮素。

化合物3：黃色粉末；ESI-MS/:345 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.71 (1H, s, 5-OH), 8.00 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.54 (1H, s, H-3), 3.84 (3H, s, 8-OMe), 3.77 (3H, s, 4′-OMe), 3.73 (3H, s, 6-OMe)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.4 (C-4), 127.8 (C-2′, 6′), 114.6 (C-3′, 5′), 102.4 (C-3), 60.5 (8-OMe), 59.4 (6-OMe), 55.0 (4′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8-9]，故鑒定化合物3為5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮。

化合物4：黃色粉末；ESI-MS/: 287 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.75 (1H, s, 5-OH), 10.46, 9.78, 9.67 (各1H, brs, 7, 3′, 4′-OH), 7.70 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.67 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.97 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.87 (1H, s, H-3), 6.47 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.24 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 181.4 (C-4), 122.0 (C-6′), 116.0 (C-5′), 113.6 (C-2′), 103.8 (C-3), 99.2 (C-6), 94.5 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，故鑒定化合物4為木犀草素。

化合物5：淡黃色固體；ESI-MS/:344 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.71 (1H, s, 5-OH), 10.74 (1H, s, 3-OH), 8.00 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.11 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.55 (1H, s, H-6), 3.84, 3.77, 3.74 (各3H, s, 3×OMe)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 178.7 (C-4), 161.8 (C-4′), 157.9 (C-7), 155.8 (C-5), 152.9 (C-2), 152.1 (C-9), 138.1 (C-3), 131.6 (C-8), 130.5 (C-1′), 122.7 (C-2′, 6′), 114.7 (C-3′, 5′), 105.2 (C-10), 94.5 (C-6), 60.5 (7-OMe), 60.2 (8-OMe), 55.9 (4′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，故鑒定化合物5為草質(zhì)素。

化合物6：淺黃色針狀結(jié)晶（丙酮）；ESI-MS/: 255 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.82 (1H, s, 5-OH), 8.07 (2H, d,= 7.2 Hz, H-2′, 6′), 7.58 (3H, m, H-3′～5′), 6.96 (1H, s, H-3), 6.51(1H, d,= 1.2 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,= 1.2 Hz, H-6)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 182.3 (C-4), 165.3 (C-7), 163.6 (C-2), 161.9 (C-9), 158.0 (C-5), 132.5 (C-4′), 131.2 (C-1′), 129.6 (C-3′, 5′), 126.9 (C-2′, 6′), 105.6 (C-3), 104.3 (C-10), 99.6 (C-6), 94.6 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[12-13]，故鑒定化合物6為白楊素。

化合物7：淡黃色固體；ESI-MS/:287 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.12 (1H, s, 5-OH), 9.64 (1H, s, 7-OH), 7.32 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′, 5′), 6.10 (1H, s, H-6), 6.08 (1H, s, H-8), 5.48 (1H, d,= 12.8 Hz, H-2), 3.78 (3H, s, -OMe), 3.32 (1H, overlapped, H-3a), 2.72 (1H, dd,= 17.2, 2.4 Hz, H-3b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.0 (C-4), 167.4 (C-7), 163.2 (C-5), 162.8 (C-9), 157.8 (C-4′), 128.4 (C-2′, 6′), 126.5 (C-1′), 115.2 (C-3′, 5′), 102.6 (C-10), 94.7 (C-6), 93.8 (C-8), 78.6 (C-2), 55.9 (4′-OMe), 42.0 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，故鑒定化合物7為異野櫻素。

化合物8：黃色固體；ESI-MS/: 315 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.04 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.15 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.46 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,= 1.6 Hz, H-6), 3.88, 3.81 (各3H, s, -OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[14]，故鑒定化合物8為3,5-二羥基-4′,7-二甲氧基黃酮醇。

化合物9：黃色粉末；ESI-MS/: 449 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): 12.69 (1H, s, 5-OH), 7.33 (1H, brs, H-2′), 7.28 (1H, brd,= 8.5 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.42 (1H, brs, H-8), 6.24 (1H, brs, H-6), 5.28 (1H, brs, Rha-H-1), 4.00 (1H, brs, Rha-H-2), 3.51 (1H, brs, Rha-H-3), 3.24 (1H, m, Rha-H-5), 3.19 (1H, m, Rha-H-4), 0.84 (3H, d,= 6.0 Hz, Rha-Me)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 178.3 (C-4), 157.0 (C-2), 148.8 (C-4′), 145.6 (C-3′), 134.7 (C-3), 121.6 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.9 (C-2′), 101.7 (Rha-C-1), 98.6 (C-6), 93.5 (C-8), 17.9 (Rha-C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物9為槲皮苷。

化合物10：黃色粉末；ESI-MS/: 465 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): 12.66 (1H, s, 5-OH), 10.88 (1H, s, 7-OH), 9.74 (1H, s, 3′-OH), 9.17 (1H, s, 4′-OH), 7.70 (1H, brd,= 8.0 Hz, H-6′), 7.55 (1H, brs, H-2′), 6.84 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.43 (1H, brs, H-8), 6.23 (1H, brs, H-6), 5.41 (1H, d,= 8.0 Hz, Glc-H-1), 3.68～3.33 (6H, m, Glc-H-2～6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 177.3 (C-4), 156.8 (C-2), 148.5 (C-4′), 145.0 (C-3′), 133.9 (C-3), 121.8 (C-6′), 116.3 (C-5′), 115.7 (C-2′), 100.7 (G-1), 98.5 (C-6), 93.4 (C-8), 61.2 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與化合物10相比，二者黃酮母環(huán)的數(shù)據(jù)一致，最大的區(qū)別在于糖的差異。該數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]，故鑒定化合物10為異槲皮苷。

化合物11：黃色粉末，ESI-MS/: 329 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.93 (1H, s, -OH), 8.07 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.02 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.55 (1H, brs, H-8), 6.49 (1H, brs, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 176.2 (C-4), 156.1 (C-4′), 147.1 (C-2), 136.0 (C-3), 129.4 (C-2′, 6′), 115.8 (C-3′, 5′), 98.5 (C-6), 93.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，故鑒定化合物11為山柰酚。

化合物12：黃色粉末，ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.45, 10.73, 9.54, 9.31, 9.26 (各1H, s, 5×OH), 7.64 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2′), 7.50 (1H, dd,= 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 6.84 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.36 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.15 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 176.3 (C-4), 164.3 (C-7), 161.2 (C-9), 156.6 (C-5), 148.1 (C-4′), 147.2 (C-2), 145.5 (C-3′), 136.2 (C-3), 122.4 (C-1′), 120.4 (C-6′), 116.1 (C-5′), 115.5 (C-2′), 103.5 (C-10), 98.6 (C-6), 93.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[17]，故鑒定化合物12為槲皮素。

化合物13：黃色油狀物；HR-ESI-MS/:268.095 6 [M＋H]+（計(jì)算值268.089 5，C16H14NO3）；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.20 (1H, s, -OH), 7.84 (4H, m, H-4～7), 6.97 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.63 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 3.74 (2H, t,= 7.2 Hz, H-8′), 2.78 (2H, t,= 7.2 Hz, H-7′)；13C- NMR (150 MHz, DMSO-6): 168.1 (C-1, 3), 156.2 (C-4′), 134.8 (C-5, 6), 131.9 (C-4a, 7a), 129.9 (C-2′, 6′), 128.6 (C-1′), 123.4 (C-4, 7), 115.6 (C-3′, 5′), 40.5 (C-8′), 33.3 (C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]，故鑒定化合物13為2-(4-羥基苯乙基)異吲哚啉-1,3-二酮。該化合物系首次從天然產(chǎn)物中分離獲得，為1個新的天然產(chǎn)物。

化合物14：白色粉末，ESI-MS/: 190 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.04 (1H, s, H-2), 7.98 (1H, d,= 7.6 Hz, H-7), 7.46 (1H, d,= 7.6 Hz, H-4), 7.17 (2H, m, H-5, 6), 4.26 (2H, q,= 6.8 Hz, H-1′), 1.32 (3H, t,= 6.8 Hz, H-2′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 164.9 (C=O), 136.8 (C-2), 132.9 (C-7a), 126.1 (C-4a), 122.8 (C-4), 121.7 (C-6), 120.9 (C-5), 112.8 (C-7), 107.1 (C-3), 59.4 (C-1′), 15.0 (C-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[19]，故鑒定化合物14為吲哚-3-甲酸乙酯。

化合物15：淡黃色粉末，ESI-MS/:187 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 11.57 (1H, s, 9-NH), 7.58 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 7.55 (1H, s, 2-NH), 7.38 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 7.21 (1H, t,= 7.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, t,= 8.0 Hz, H-6), 3.50 (2H, t,= 6.8 Hz, H-3), 2.92 (2H, t,= 6.8 Hz, H-4)；13C- NMR (100 MHz, DMSO-6): 162.3 (C-1), 137.5 (C-8a), 127.7 (C-9a), 125.4 (C-4b), 124.5 (C-7), 120.6 (C-6), 119.8 (C-4a), 118.6 (C-5), 112.9 (C-8), 41.6 (C-3), 20.8 (C-4)。以上數(shù)據(jù)結(jié)合HMBC實(shí)驗(yàn)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[20]，故鑒定化合物15為1,2,3,4-四氫去甲哈爾滿-1-酮。

化合物16：黃色粉末；ESI-MS/: 146 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 9.92 (1H, d,= 0.8 Hz, -CHO), 8.26 (1H, d,= 1.2 Hz, H-2), 8.07 (1H, d,= 7.6 Hz, H-4), 7.49 (1H, d,= 7.6 Hz, H-7), 7.24 (1H, t,= 6.4 Hz, H-6), 7.20 (1H, t,= 6.4 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 185.4 (-CHO), 138.9 (C-2), 137.5 (C-7a), 124.6 (C-3a), 123.9 (C-6), 122.6 (C-5), 121.3 (C-4), 118.6 (C-3), 112.9 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[21]，故鑒定化合物16為3-醛基吲哚。

化合物17：白色粉末，ESI-MS/: 220 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.79 (1H, s, 8-OH), 8.75 (1H, s, 9-OH), 6.49 (1H, s, H-10), 6.48 (1H, s, H-7), 4.57 (1H, t,= 8.0 Hz, H-10b), 3.94 (1H, m, H-5a), 2.89 (1H, m, H-5b), 2.58 (2H, m, H-6), 2.57 (1H, m, H-1a), 2.38 (1H, m, H-2a), 2.19 (1H, m, H-2b), 1.57 (1H, m, H-1b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 172.0 (C-3), 144.2 (C-8), 144.0 (C-9), 128.4 (C-10a), 123.7 (C-6a), 115.4 (C-7), 111.6 (C-10), 55.5 (C-10b), 36.6 (C-5), 31.2 (C-2), 27.4 (C-6), 27.3 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，故鑒定化合物17為馬齒莧酰胺E。

化合物18：黃色粉末，HR-ESI-MS/:356.114 1 [M＋H]+（計(jì)算值355.105 6，C19H17NO6）；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6):12.75 (1H, s, 5-OH), 7.49 (1H, s, -NH), 7.31 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.80 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3′, 5′), 5.94 (1H, s, H-8), 5.43 (1H, dd,= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 5.07 (1H, dd,= 9.2, 5.2 Hz, H-5′′), 3.25 (1H, m, H-3a), 2.71 (1H, dd,= 17.2, 2.0 Hz, H-3b), 2.17 (2H, m, H-4′′), 2.05 (2H, m, H-3′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.4 (C-4), 177.3 (C-2′′), 165.8 (C-7), 162.0 (C-5), 161.9 (C-9), 158.2 (C-4′), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 109.3 (C-6), 101.7 (C-10), 95.2 (C-8), 78.8 (C-2), 46.8 (C-5′′), 42.2 (C-3), 30.9 (C-3′′), 25.8 (C-4′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，故鑒定化合物18為青蘭素。

化合物19：白色粉末，ESI-MS/: 256 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.16 (1H, d,= 8.0 Hz, H-4′), 7.78 (2H, d,= 7.6 Hz, H-2′, 6′), 7.49 (1H, t,= 7.2 Hz, H-4′′), 7.43 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′, 5′), 7.26～7.15 (4H, m, H-2′′, 3′′, 5′′, 6′′), 4.15 (1H, m, H-2), 3.50 (1H, dd,= 10.8, 5.6 Hz, H-1a), 3.42 (1H, dd,= 10.4, 6.4 Hz, H-1b), 2.95 (1H, dd,= 13.6, 5.2 Hz, H-3a), 2.78 (1H, dd,= 13.6, 9.2 Hz, H-3b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 166.4 (C=O), 139.9 (C-1′), 135.2 (C-1′′), 131.4 (C-4′), 129.5 (C-4′′), 128.6 (C-3′, 5′), 128.5 (C-3′′, 5′′), 127.7 (C-2′′, 6′′), 126.3 (C-2′, 6′), 63.4 (C-1), 53.7 (C-2), 36.9 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[24]，故鑒定化合物19為-苯甲酰--苯丙氨酸。

4 體外細(xì)胞毒活性的篩選

采用MTT法及文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)方法[25]，以紫杉醇和1-羥基-2-甲氧基-12-甲基-[1,3]二氧并[4',5':4,5]苯并[1,2-]菲啶-12-鹽酸鹽（NK109）[26]為陽性對照藥，測定了化合物1～19對5種人癌細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。結(jié)果表明，化合物2、3和5具有抑制HCT-116、HepG2、BGC-823、NCI-H1650和A2780腫瘤細(xì)胞株增殖的作用，化合物2的半數(shù)抑制濃度（IC50）值分別為2.22、2.45、2.45、2.20、1.00 μmol/L；化合物3的IC50值分別為0.84、1.23、0.90、0.88、0.65 μmol/L；化合物5的IC50值分別為3.87、3.96、7.61、4.14、2.87 μmol/L。陽性對照藥紫杉醇的IC50值分別為0.000 2、0.007 6、0.000 6、＞1和0.020 4 μmol/L，NK109的IC50值分別為3.94、1.19、1.84、1.75和0.90 μmol/L。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from flowers of

LI Qian

Henan Province Engineering Research Center for Food Safety Control of Processing and Circulation, College of Food Science and Technology, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China

To investigate the chemical constituents from the flowers of.The compounds were isolated and purified by various column chromatographies, and their structures were identified by physiochemical properties and spectroscopic data. MTT assay was used to detect the cytotoxic activity of the compounds.Ninteen compounds were isolated from the EtOH extract of the flowers of, which were identified as acacetin (1), naringenin (2), 5,7-dihydroxy-6,8,4′-dimethoxyflavone (3), luteolin (4), herbacetin (5), chrysin (6), isosakuranetin (7), 3,5-dihydroxy-4′,7- dimethoxyflavone (8), quercitrin (9), isoquercitrin (10), kaempferol (11), quercetin (12), 2-(4-hydroxyphenethyl) isoindoline-1,3-dione (13), 1-indole-3-carboxylic acid-ethyl ester (14), 1,2,3,4-tetrahydronorharman-1-one (15), 1-indole-3- carbaldehyde (16), oleracein E (17), dracocephin C (18),-benzoyl--phenylalanine (19).All compounds were isolated from this genus for the first time except for compounds 4, 9—12. Compounds 2, 3 and 5 exhibited significantgrowth inhibitory activity against the HCT-116, HepG2, BGC-823, NCI-H1650, and A2780 cancer cell lines.

flowers of; flavones; alkaloids; anticancer; 2-(4-hydroxyphenethyl) isoindoline-1,3-dione; naringenin;5,7-dihydroxy-6,8,4′-dimethoxyflavone; herbacetin

R284.1

A

0253 - 2670(2021)24 - 7413 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.24.002

2021-03-25

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目（KJCX2021A19）

李 倩，女，博士，講師，從事天然產(chǎn)物活性成分研究。E-mail: lgql1991@163.com

[責(zé)任編輯 王文倩]