胸腹水癌細胞形態學檢驗的應用及臨床價值評估分析

古麗扎提·阿哈泰，沙蕾

新疆醫科大學附屬中醫院檢驗科，新疆哈密 830000

胸腹水癌細胞形態學檢驗是臨床檢驗醫學的重要檢測項目，對于腫瘤疾病的診斷具有重要的意義[1]。臨床上多種疾病可以導致胸腹水的出現，包括炎癥疾病、癌癥疾病等。胸腹水癌細胞形態學檢驗是臨床鑒別疾病良性、惡性的重要參考，對于疾病的診斷具有重要的意義。目前檢驗醫學對胸腹水癌細胞形態學檢驗的研究尚不夠深入，容易在臨床診斷的過程中出現差錯。同時胸腹水癌細胞形態多樣，嚴格規范胸腹水標本的處理和標本鏡檢對于提高癌細胞的檢出率具有重要的意義。如何通過改進胸腹水標本的處理方法提高形態學檢驗的準確性是臨床需要重點探究的問題。該研究納入該院2019 年1—12 月收治的50 例患者探討胸腹水癌細胞形態學檢驗的應用及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入該院收治的50 例患者，其中男31 例，女19例；年齡 43～72 歲，平均（61.3±4.2）歲；其中肺癌 39例，肝癌 5 例，卵巢癌 3 例，胃癌 3 例。

1.2 納入與排除標準

納入標準：患者臨床上確診為惡性腫瘤癌性胸腹水，病歷完整；患者簽署該研究知情同意書。排除標準：妊娠期或哺乳期女性；合并精神分裂癥等嚴重精神障礙性疾病的患者； 合并心肺功能失代償的患者。該研究經該院倫理委員會審批通過。

1.3 方法

對納入的所有患者進行胸腹水癌細胞形態學檢驗。將抽取的胸腹水裝在乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2) 抗凝劑塑料帶蓋標識專用試管，將標本差速離心后棄去上清液進行Wright-Giemsa 混合染色和細胞免疫化學染色，晾干玻片。檢驗過程中對實驗標本處理方法、放置時間和推片標本量進行調整。實驗標本處理方法：第一種方法是離心處理后將試管內的上清液倒掉，第二種方法是離心處理后將試管管底細胞沉渣端朝著里面逐漸棄去上清液，同時使用棉球將殘液吸走。放置時間為：分別將標本在專用是試管中放置1、2、4、16 h 后進行推片觀察離心推片情況。推片標本量為：一種采用加厚推片，一種采用普通推片。

1.4 觀察指標

觀察不同處理方法殘留細胞液和檢出率；對比各個時間段離心推片情況；比較不同推片方法癌細胞檢出率。

1.5 統計方法

采用SPSS 19.0 統計學軟件分析數據，計數資料采用率（%）表示，組間比較采用 χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同處理方法殘留細胞液和檢出率比較

第一種方法殘留細胞液≥100 μL 高于第二種方法，第一種方法方法檢出率42.00%低于第二種58.00%，差異有統計學意義（χ2=8.29，P＜0.05）。見表1。

表1 不同處理方法殘留細胞液和檢出率比較

2.2 各個時間段離心推片情況比較

2 h 內離心推片情況無明顯變化，4 h 以后離心推片核固縮、碎裂明顯。見表2。

表2 各個時間段離心推片情況比較

2.3 不同推片方法癌細胞檢出率比較

加厚推片癌細胞檢出率68.00%高于普通推片42.00%，差異有統計學意義（χ2=12.36，P＜0.05）。見表3。

表3 不同推片方法癌細胞檢出率比較

3 討論

惡性腫瘤疾病是臨床研究的重點難點問題，近年來隨著人口老齡化趨勢的發展和生活環境的不斷惡化，惡性腫瘤疾病的發病率呈現逐年上升的趨勢[2]。惡性腫瘤疾病癌細胞容易發生侵犯和轉移，并伴有相關的并發癥。癌細胞侵犯胸膜、腹膜組織后容易引起胸水、腹水，嚴重時對患者呼吸等功能活動產生影響[3]。胸水對胸膜腔的壓迫可以導致局部肺泡舒張障礙，局部血氧交換受到影響，患者出現不同程度的呼吸困難癥狀。腹水嚴重時患者可以出現腹部膨脹、腹脹、腹痛等不適。然而，臨床上炎性疾病也可以出現胸腹水，臨床需要將炎性胸腹水和癌性胸腹水進行鑒別，胸腹水的形態學檢驗結果對于疾病的診療具有重要的影響。胸腹水癌細胞形態學檢驗是臨床診斷腫瘤疾病最重要的方法之一，通過尋找胸腹水中癌細胞可以為臨床疑難腫瘤疾病的診斷提供重要的診斷證據。胸腹水癌細胞形態學檢驗對于檢驗技術的要求較高，遺漏胸腹水癌細胞的診斷對于患者的病情治療將帶來嚴重的危害。濃縮細胞量的處理方法有利于檢驗過程中獲得更高的癌細胞檢出率。雖然通過將胸腹水進行多次離心后進行形態學檢驗可以提高單位容積中癌細胞的量，但該方法對于胸腹水標本量的要求較高，同時需要繁多的操作步驟，在較長時間的檢驗過程中對于標本的抗凝要求也更加苛刻。既往臨床采用直接棄去離心管上清液的方法進行檢驗，但檢驗癌細胞檢出率較低。該研究探討胸腹水癌細胞形態學檢驗的應用及臨床價值。結果表明，第一種方法殘留細胞液≥100 μL 高于第二種方法，第一種方法方法檢出率42.00%低于第二種 58.00%（χ2=8.29，P＜0.05）。加厚推片癌細胞檢出率 68.00%高于 普 通 推 片 42.00%（χ2=12.36，P ＜0.05）。該研究結果和高禮信[4]的研究結果一致性較高，其研究結果表明研究組方法殘留細胞液≥100 μL高于第二種方法，第一種方法方法檢出率40.00%低于第二種57.14%（P＜0.05）。加厚推片癌細胞檢出率70.00%高于普通推片 47.00%（P＜0.05）。結合研究結果分析，離心處理后上清液的處理對于提高癌細胞的檢出率具有重要意義，同時需提高對于加厚推片的重視。通過對處理方法進行改進，將離心后的試管傾斜80～90℃30 s 并用一顆棉球吸去過多的殘余液體，從而使得細胞得以更進一步的濃縮，使得沉淀的殘余液量比一般方法減少1/2 以上。單位體積內細胞的增加有利于推片的制備。由于標本中細胞越多越容易檢出癌細胞，將推片量由3 μL 提高到 6 μL，在研究中發現體液脫落細胞學檢查制成的推片以厚片更加適宜。研究中發現5～6 μL 的加厚推片可以更加清晰地顯示細胞的結構情況，分析具體原因為加厚推片使得細胞大量在局部聚集，可以減少臨床檢驗科工作人員鏡下觀察耗費的時間，更容易找到目標癌細胞并對細胞的來源進行初步評判，從而提高癌細胞的檢出率。同時在觀察胸腹水癌細胞形態的過程中需要考慮到過多紅細胞癌細胞檢出的影響。癌細胞對胸腹膜中小血管的侵犯損害不可避免帶來紅細胞，使得胸腹水中的紅細胞增多并對觀察造成影響。胸腹水中的紅細胞層會影響殘留細胞液量，臨床檢驗過程中可以向離心管中加入適量的低滲氯化鉀溶液破壞紅細胞結構，從而在離心操作的步驟中將沉淀物制片。細胞的退行性改變也會對胸腹水細胞學檢驗造成一定的影響，胸腹水標本的及時檢驗有利于維持標本的新鮮程度。胸腹水標本在放置的過程中會逐步出現細胞的退化、 空泡、核碎裂和固縮等改變。通過檢驗發現胸腹水標本放置2 h 以內細胞形態不會發生明顯的改變，而在放置4 h后進行觀察可以看到明顯的核固縮、碎裂改變。同時，部分胸腹水標本細胞形態改變在標本獲得時已經出現，臨床在檢驗過程中需要加強對不同病理狀態下的細胞形態識別，需要重點區分細胞形態改變是否由推片機械性因素造成類似退化性變化。同一張標本中，當部分區域細胞退化而部分區域細胞結構清晰時，即為假性細胞退化。單核巨噬細胞、中性粒細胞是標本中最容易出現空泡改變的細胞，然而其對鏡下癌細胞形態的觀察影響不大。淋巴細胞是最不容易發生形態變化的細胞，空泡改變和退化改變較少，但淋巴細胞可以在尾部出現涂抺改變影響觀察。癌細胞和間皮細胞是標本中最容易出現退化的細胞，在放置的過程中兩種細胞發生相似的形態學改變，從而對鏡下觀察造成干擾。胸腹水標本細胞形態學的觀察至關重要，癌細胞胞體和胞核多表現為不規則形態，細胞體積較大或可以成簇分布，核仁通常大而明顯，胞質多為豐富而染色不均。退行性改變的癌細胞也會具有明顯的惡性形態改變，尤其是胞核的畸形和大核仁仍然較為明顯[5-6]。相比之下，間皮細胞退化后形態與退化后的癌細胞存在明顯的差異，有利于臨床觀察的鑒別。細胞免疫化學染色對于細胞腫瘤的鑒別也具有一定的作用。胸腹水標本細胞容易受到其他多種外界因素的干擾，包括疾病病因、體液營養滲透壓、體液營養成分、試管中標本量、試管的材質、溫度等多種因素。通過查閱相關的文獻并結合該研究的相關結果建議在處理胸腹水標本的方法上可以采用EDTA-K2 抗凝劑塑料帶蓋標識專用試管盛裝標本并對標本在2 h 內及時送檢處理。臨床上有遇到夜間進行胸腹水抽取的病例，對于來不及送檢的夜間標本可以防止于4 ℃冰箱次日及時送檢處理，該過程不會對細胞形態造成較大的影響[7]。鏡檢工作人員的經驗也對癌細胞的檢出具有一定的影響，低倍和油鏡是鏡檢的兩個重要環節，通常在鏡檢的過程中需要采用低倍鏡尋找可疑的癌細胞然后再用油鏡下觀察。低倍鏡觀察的過程中需要重點關注尾部區域，同時也不能忽視推片邊端和頭部區域。推片的體部不作為推片鏡檢過程中重點考慮的緩解，該部位細胞的情況不會對鏡檢結果帶來較大的影響。建議臨床中對于細胞數目較少的標本和陰性標本必須采用至少3 張或以上的標本數目進行更加詳細的觀察； 同時對于高度可疑的病例采用更多的標本進行低倍鏡觀察，從而最大限度地提高癌細胞的檢出率[4，,8]。

綜上所述，胸腹水癌細胞形態學檢驗的應用價值顯著，檢驗過程中加強標本處理、標本放置時間、涂片厚度等處理有利于提高癌細胞的檢出情況，避免誤診、漏診。胸腹水癌細胞形態學檢驗值得臨床高度重視。