幼鼠與成鼠子宮和輸卵管組織形態學比較

魏學盛，邵鵬陽，姚亞莉，姜芳霞，李明娜*，楊 耀

（1.甘肅農業大學 動物科學技術學院，甘肅 蘭州 730070；2.甘南州動物疫病預防控制中心，甘肅 合作 747000）

雌性動物生殖器官包含卵巢、輸卵管、子宮、陰道及外陰部。卵巢能夠排出卵子，決定卵子的質量及數量。因此很多學者集中于卵巢的結構及生理功能進行研究。然而，子宮與輸卵管的作用也至關重要。子宮與輸卵管相連，為中空的管道，是卵子和精子運行、受精、早期胚胎發育、附植及胎兒妊娠的主要場所[1]；同時子宮上皮也能夠分泌激素，調控卵巢周期性活動。因此研究子宮與輸卵管的結構有助于更深入了解雌性動物繁殖機理。

隨著生物學研究由體外實驗轉向體內，小鼠目前成為廣泛使用的實驗動物，這與小鼠體積小、生長周期短、易于飼養、成本低等優勢息息相關。因此通常選擇小鼠作為研究人和哺乳動物生理、繁殖和病理現象的理想模型[2]。

本實驗選取幼齡和成年小鼠的子宮和輸卵管為研究對象，制作石蠟切片，HE方法染色，比較幼鼠和成鼠子宮和輸卵管的形態學差異，以期闡明子宮和輸卵管的發育規律，為深入了解小鼠生殖器官的生理功能提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本研究選取10只4周齡和10只8周齡SPF清潔級雌性小鼠，均購自蘭州獸醫研究所。飼養3 d無異常后用于后續實驗。

1.2 主要試劑及耗材

伊紅、蘇木精、中性樹膠購自索萊寶生物公司；甲醛、乙醇、二甲苯購自國藥集團化學試劑有限公司；石蠟購自上海華靈康復器械廠。

1.3 實驗儀器

脫水機 KEDEE KD-TS3A，攤片機 KEDEE KD-P，烘片機 KEDEE KD-H，普通光學顯微鏡，切片機 LEICA RM2235等。

1.4 實驗方法

1.4.1 組織固定 飼養3 d后，選取體重相近的成年小鼠（32.42±2.75 g）和幼年小鼠（24.45±2.65 g）各6只，做好標記。斷頸法處死小鼠，分離出小鼠子宮和輸卵管，浸入4%甲醛固定液中，使組織蛋白質變性并防止胞死亡后自溶或細菌分解。

1.4.2 流水 將組織從固定液中取出，放在微水流中流水沖洗12 h。

1.4.3 脫水透明 用不同濃度酒精（從低到高）作為脫水劑，逐步脫去組織中的水分，再將組織置于二甲苯中透明，以二甲苯替換組織中的酒精。本步驟借助自動KEDEE KD-TS3A脫水機進行脫水透明，具體濃度與時間如下：酒精（75%）45 min，酒精（85%）45 min，酒精（95%）45 min，酒精（95%）45 min，酒精（100%）45 min，酒精（100%）30 min，二甲苯酒精30 min，二甲苯7 min，二甲苯7 min，二甲苯石蠟45 min，石蠟45 min，石蠟45 min。

1.4.4 浸蠟與包埋 將自動脫水機內的組織取出，按合適的方位置于模具中，緩慢倒入已經融化好的石蠟。整個過程要求迅速、平穩。

1.4.5 切片與貼片 將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成5 um薄片。將切下的薄片放至25℃的水中攤平，再貼至載玻片上（此過程要求動作輕緩，不產生氣泡為宜）。最后將載玻片置于45℃的烘片機上烘干。

1.4.6 脫蠟染色 將烘干的切片進行脫蠟，采用蘇木精-伊紅（HE）方法進行染色，具體操作過程如下：二甲苯5 min，二甲苯5 min，苯乙醇3 min，100%乙醇2 min，100%乙醇2 min，80%乙醇2 min，蒸餾水2 min，蘇木精染色液30 s，蒸餾水1 min，分化液（1%鹽酸+99%乙醇）2 s，蒸餾水30 s，0.5%伊紅染色液30 s，80%乙醇2 s，95%乙醇2 s，95%乙醇2 s，100%乙醇2 s，100%乙醇2 s，二甲苯2 mi n，二甲苯2 min，最后用玻璃棒蘸取適量中性樹膠于載玻片上，蓋上蓋玻片待凝固后觀察結果。

1.4.7 鏡檢 將制作好的切片置于顯微鏡下觀察、拍照。

2 結果與分析

2.1 小鼠子宮的組織結構觀察

家畜子宮分為子宮角、子宮體和子宮頸三部分組成。從子宮頸前端到子宮基部為子宮體。子宮頸前端與子宮體內相通，后端突入陰道內稱為子宮頸陰道部。從組織結構由外向內依次為漿膜、肌層及黏膜。子宮漿膜與子宮闊韌帶的漿膜相連接。子宮黏膜由上皮和固有膜構成，上皮陷入固有膜構成子宮腺。小鼠與家畜不同，為雙子宮，呈“Y”型。左右子宮角匯合至子宮體，形成兩個獨立的子宮，再向外匯合形成子宮頸。如圖1所示，小鼠的子宮內膜腔上皮由單層柱狀上皮細胞構成，被大量的基質細胞所包圍[3]。固有膜又稱為基質膜，含有大量的淋巴、血管及子宮腺。子宮腺為簡單、分支、盤區的管狀腺，其中子宮腺以子宮角最為發達，子宮體較少。子宮內膜被平滑肌所構成的子宮肌層所包圍，形成子宮邊界。肌層外層薄，為縱行肌纖維，內層厚，為螺旋形的環狀肌纖維。

圖1 小鼠子宮組織切片圖

2.2 幼鼠與成鼠子宮結構比較

幼鼠與成鼠子宮切片進行比較，可以看出子宮結構，形態存在很大差異（見圖2）。成年小鼠子宮內膜褶皺多于幼年小鼠，子宮黏膜面積也較幼鼠大。內膜中子宮腺的數量也是成年小鼠多于幼年小鼠，這可能與成鼠完善的生殖功能有關。

圖2 成年與幼年小鼠子宮角切片圖

2.3 小鼠輸卵管組織形態觀察

輸卵管是卵子進入子宮的必經之道，包在輸卵管系膜內，形狀彎曲。輸卵管的管壁從外向內由漿膜、肌層和黏膜構成（見圖3）。肌層可分為內層的環形或螺旋形肌束和外層的縱行肌束（見圖4），其中有斜行纖維，使整個管壁能協調地收縮。肌層從卵巢端到子宮端逐漸增厚，黏膜形成若干縱璧。黏膜上分布有柱狀纖毛細胞和無纖毛的楔形細胞[4]（見圖4）。纖毛細胞在輸卵管的卵巢端，特別是在輸卵管的傘部，較普遍，子宮端較少。無纖毛楔形細胞為分泌細胞，含有特殊的分泌顆粒，其大小和數量在不同種間和發情的不同時期有著很大的變化。分泌的黏蛋白和黏多糖，可供給早期胚胎營養，且結構和分泌機能也受卵巢激素的調節。

圖3 成年小鼠輸卵管組織切片圖

圖4 成年小鼠輸卵管組織切片局部圖

2.4 幼鼠與成鼠輸卵管結構比較

幼鼠與成鼠輸卵管切片比較，成鼠黏膜較發達。幼鼠輸卵管縱壁較成鼠少，且直；相反成鼠輸卵管中縱壁多而彎，還有不同程度的分支現象。成鼠每個縱壁黏膜上皮的纖毛細胞和分泌細胞較多，細胞小而密，同時纖毛分布較多；幼鼠中這兩類細胞較大，細胞核明顯，分布疏松（見圖5）。

圖5 成年與幼年小鼠輸卵管切片圖

3 討論

動物到達初情期后，能夠排出有受精能力的精子或卵子，然而生殖器官還未成熟[5]，因此不能作種用。本研究中比較幼鼠和成鼠的子宮和輸卵管形態結構，發現子宮黏膜和輸卵管黏膜都存在很大差異，包括腺體的數量、子宮內膜褶皺及輸卵管縱壁等，表明幼鼠至成鼠生長過程中，生殖器官也持續發育，結構趨于成熟，功能趨于完善。因此在生產實踐中常見對幼畜實施超數排卵，以得到一定量的具有受精能力的卵子，后通過體外成熟、體外受精，將質量較好的胚胎移植入成年雌性動物體內妊娠，縮短世代間隔，加快育種進程。

成鼠子宮腔上皮較幼鼠發達，一方面向子宮腔延伸，另一方面向子宮內膜延伸形成更多腺體；整體看來子宮內膜褶皺增多。同時成鼠輸卵管縱襞也較幼鼠發達，纖毛細胞和分析細胞數量增多。以上結構均為卵子的運行提供方便。卵子排出后在輸卵管中運行，依靠輸卵管黏膜的纖毛擺動及輸卵管管壁的收縮將卵子輸送向前；受精后的受精卵到達子宮后，同樣依靠子宮內膜褶皺的蠕動及子宮壁的收縮運動。因此，成年小鼠的子宮和輸卵管結構完善，具備卵子受精及妊娠的生理環境。

4 結論

本研究初步對成年和幼年小鼠子宮和輸卵管進行組織形態學觀察，發現成鼠子宮腔上皮較幼鼠發達，內膜結構完善；輸卵管縱壁結構分支明顯，細胞分布緊密，纖毛數量多。