經典名方桃核承氣湯物質基準關鍵質量屬性研究

關雅戈，羅 贛#，高曉燕*，蔣宇航，劉雨涵，韓 晨，苗家燕，韓妮娜，張志強*

經典名方桃核承氣湯物質基準關鍵質量屬性研究

關雅戈1，羅 贛1#，高曉燕1*，蔣宇航1，劉雨涵1，韓 晨1，苗家燕1，韓妮娜2，張志強2*

1. 北京中醫藥大學，北京 100029 2. 北京康仁堂藥業有限公司，北京 101301

建立桃核承氣湯（Taohe Chengqi Decoction，TCD）物質基準的HPLC特征圖譜及指標成分含量測定方法，闡明TCD物質基準的關鍵質量屬性，構建其質量控制體系。特征圖譜1，色譜柱為Diamonsil鉆石二代C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動相，體積流量為1.0 mL/min，梯度洗脫，進樣量為10 μL，柱溫30 ℃，檢測波長為254 nm；特征圖譜2，色譜柱為Diamonsil鉆石一代C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.2%磷酸水溶液為流動相，體積流量為1.0 mL/min，梯度洗脫，進樣量為10 μL，柱溫35 ℃，檢測波長為210 nm。根據方中成分的極性差異，建立2張特征圖譜，結果顯示，15批TCD物質基準相似度分別為0.928～0.992和0.809～0.995，共確定32個特征峰，并指認苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸銨、蘆薈大黃素、大黃酸5個共有成分。15批TCD物質基準的平均出膏率為19.10%，苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸的質量分數分別為2.650～7.318、3.563～17.486、0.013～0.128、0.034～0.215、0.930～3.582 mg/g。為TCD物質基準的質量控制和復方制劑開發提供科學依據。

經典名方；桃核承氣湯；物質基準；關鍵質量屬性；特征圖譜；HPLC；質量控制；苦杏仁苷；甘草苷；甘草酸銨；蘆薈大黃素；大黃酸；桂皮醛；出膏率

經典名方物質基準是指以古代醫籍中記載的經典名方制備方法為依據制備而得的中藥藥用物質的標準，除成型工藝外，其余制備方法應當與古代醫籍記載基本一致[1]，是連接傳統制法與現代生產工藝的對照物質，是評價復方制劑與傳統湯劑一致性的準繩[2-3]。經典名方關鍵質量屬性（critical quality attributes，CQAs）是指影響藥品安全性、有效性或一致性的物理、化學、生物活性等質量屬性[4]，在經典名方物質基準研究中，CQAs主要包括特征圖譜、指標性成分含量、出膏率。從傳統湯劑、物質基準到復方制劑，在經典名方的開發研究中CQAs不可或缺。《中藥經典名方復方制劑簡化注冊審批管理規定（征求意見稿）》亦要求，經典名方制劑的研制包括物質基準和復方制劑2個階段，應保證二者CQAs一致[1]。

桃核承氣湯（Taohe Chengqi Decoction，TCD）出自東漢張仲景所著《傷寒論》，主治下焦蓄血證。全方由桃仁、大黃、桂枝、甘草和芒硝組成[5]。其中桃仁與大黃并用，活血破瘀瀉熱；芒硝助大黃下瘀、瀉熱；桂枝助桃仁活血化瘀；甘草和中，緩和諸藥峻烈之性；5藥合用共奏破血下瘀之效。TCD常用于閉經、子宮內膜異位癥、崩漏以及不孕癥，同時在治療慢性腎功能衰竭、糖尿病等疾病應用廣泛[6-11]。

目前未見關于TCD物質基準CQAs研究的報道，針對此問題，本實驗建立TCD物質基準HPLC特征圖譜，依據處方配伍和文獻研究，確定桃仁中苦杏仁苷、甘草中甘草酸銨、桂枝中桂皮醛、大黃中蘆薈大黃素及大黃酸作為TCD物質基準指標成分并建立其含量測定方法，聯合HPLC特征圖譜和出膏率共同構建TCD物質基準的質量控制體系，以期為其復方制劑的開發提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Thermo Fisher Ultimate 3000高效液相色譜儀，DAD檢測器，CM7.2色譜工作站，美國Thermo- Fisher公司；Sorvall ST 8R高速冷凍離心機，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；XP-6型百萬分之一精密天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ5200DA超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；Milli-Q超純水系統，美國Millipore公司；陶瓷鍋，曼達尼旗艦店；LC-E013S電陶爐，廣東順德忠臣電器有限公司；SHB-III循環水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有限公司。

1.2 試藥

TCD中各藥材產地信息見表1。經前期研究確定大黃、桃仁、甘草的炮制方法后，由北京康仁堂藥業有限公司提供各批次藥材和飲片。方中各藥材經北京中醫藥大學楊瑤珺教授鑒定分別為薔薇科桃屬植物山桃(Carr.) Franch.的干燥成熟種子，蓼科大黃屬植物唐古特大黃Maxim. ex Balf.的干燥根和根莖，豆科甘草屬植物甘草Fisch.的干燥根和根莖，樟科樟屬植物肉桂Presl的干燥嫩枝，硫酸鹽類礦物芒硝族芒硝，經加工精制而成的結晶體。

對照品苦杏仁苷（批號DST190829-004）、甘草苷（批號DST190702-009）、甘草酸銨（批號DST190702-008）購自成都德思特生物技術有限公司；對照品桂皮醛（批號110710-201418）、大黃酸（批號110757-201607）、蘆薈大黃素（批號110795- 201710）、大黃素（批號110756-201913）、大黃酚（批號110796-201621）、大黃素甲醚（批號110758- 201616）購自中國食品藥品檢定研究院，上述對照品均為HPLC含量測定用，質量分數均大于98%。色譜純乙腈、甲醇，賽默飛世爾科技（中國）有限公司；實驗室自制超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TCD物質基準對應實物的制備

《傷寒論》記載TCD的處方及制法為“桃仁五十個（去皮尖），大黃四兩，桂枝二兩（去皮），甘草二兩（炙），芒硝二兩，右五味，以水七升，煮取二升半，去滓，內芒硝，更上火，微沸下火，先食溫服五合，日三服，當微利。”經文獻考證[11-13]確定東漢一兩相當于今之13.8 g，一升相當于200 mL，故確定處方劑量為燀桃仁50枚、大黃55.2 g、炙甘草27.6 g、桂枝27.6 g、芒硝27.6 g。取處方量的各飲片，置3 L陶瓷鍋中，加入1400 mL去離子水，武火煮沸后，轉文火煎煮至約500 mL，濾過，加入芒硝27.6 g，文火煮至微沸，放冷后定容至500 mL，即得標準煎液。取上述標準煎液適量，4 ℃、9000 r/min離心20 min后，精密量取上清液50 mL，冷凍干燥，即得。

表1 TCD藥材來源及批號信息

將表1中各批次各單味飲片隨機取樣組合得15批TCD物質基準S1～S15。

2.2 TCD物質基準特征圖譜研究

2.2.1 色譜條件

（1）特征圖譜1：Diamonsil鉆石二代C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～3 min，20%～30%甲醇；3～30 min，30%～45%甲醇；30～55 min，45%～70%甲醇；55～80 min，70%～80%甲醇；80～85 min，80%甲醇；85～90 min，80%～95%甲醇；90～95 min，95%～100%甲醇；95～100 min，100%甲醇；柱溫30 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長254 nm。

（2）特征圖譜2：Diamonsil鉆石一代C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，10%甲醇；10～50 min，10%～25%甲醇；柱溫35 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長210 nm。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對照品適量，加70%甲醇制得質量濃度為1.770 mg/mL的苦杏仁苷對照品溶液；精密稱取甘草苷和甘草酸銨對照品適量，加甲醇制得質量濃度分別為16.72、42.20 μg/mL的甘草苷、甘草酸銨混合對照品溶液；精密稱取桂皮醛對照品適量，加甲醇制得質量濃度為942.58 μg/mL的桂皮醛對照品溶液；取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇制得質量濃度分別為213、660、205、209、244 μg/mL的大黃蒽醌類成分混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

（1）TCD物質基準供試品溶液制備：取適量物質基準凍干粉，加去離子水定容至10 mL，4 ℃、13 000 r/min離心20 min，取上清液，即得。

（2）各單味藥及陰性樣品供試品溶液制備：取處方劑量各單味藥飲片及分別缺桃仁、大黃、甘草、桂枝、芒硝的處方量飲片，按“2.1”項下標準煎液制備方法制備后，按上述供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.4 方法學考察

（1）參照峰的選擇：特征圖譜1中，大黃酸含量較高，色譜峰較穩定，故選擇大黃酸的色譜峰（23）作為特征圖譜1的參照峰，計算特征圖譜1中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積；特征圖譜2中，27號共有峰含量較高，色譜峰較穩定，故選擇27號共有峰作為特征圖譜2的參照峰，計算特征圖譜2中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。

（2）精密度試驗：同一批物質基準供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，連續進樣6次，記錄譜圖，結果顯示各共有峰的相對保留時間RSD均＜0.27%，相對峰面積RSD均＜3%，表明儀器精密度良好。

（3）重復性試驗：同一批次6份物質基準供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，測定特征圖譜，結果顯示各共有峰的相對保留時間RSD均＜0.56%，相對峰面積RSD均＜3%，表明方法重復性良好。

（4）穩定性試驗：同一批物質基準供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件，將樣品置于室溫下，于0、2、4、8、12、24 h進樣，結果顯示各共有峰的相對保留時間RSD均＜0.58%，相對峰面積RSD均＜3%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.2.5 TCD物質基準特征圖譜的建立

（1）特征圖譜1的建立：取15批物質基準、各單味藥及陰性對照樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1（1）”項下色譜條件檢測，將數據導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012年版）軟件，以第1批的HPLC圖譜為參照，采用平均數法，進行多點校正和色譜峰匹配，自動匹配得到15批物質基準的特征圖譜疊加圖及共有模式，如圖1所示，以生成的共有模式為參照，15批物質基準特征圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.92。

根據特征圖譜分析結果，將TCD物質基準與各單味藥及其陰性樣品HPLC譜圖進行比對，確定出峰情況良好、無陰性干擾的色譜峰為各藥味特征峰。特征圖譜1共確定23個特征峰，特征峰1～4、6～21、23為大黃特征峰，特征峰5、22為甘草特征峰。經與對照品比對，指認出4個共有成分，分別是5號峰甘草苷、21號峰蘆薈大黃素、22號峰甘草酸銨和23號峰大黃酸。

（2）特征圖譜2的建立：按“2.2.1（2）”項下色譜條件檢測，同“2.2.5（1）”項操作，結果如圖2所示，以生成的共有模式為參照，15批TCD物質基準特征圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.8。

根據特征圖譜分析結果，將TCD物質基準與各單味藥及其陰性樣品HPLC譜圖進行比對，確定出峰情況良好、無陰性干擾的色譜峰為各藥味特征峰。特征圖譜2共確定9個特征峰，特征峰24～27、30～32為大黃特征峰，特征峰28為甘草特征峰，特征峰29為桃仁特征峰。經與對照品HPLC圖譜比對，指認出2個共有成分，分別是24號峰沒食子酸、29號峰苦杏仁苷。

2.3 指標成分含量測定研究

2.3.1 色譜條件

（1）大黃蒽醌類成分和甘草酸銨含量測定：Diamonsil C18鉆石二代色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～3 min，20%～30%甲醇；3～30 min，30%～45%甲醇；30～55 min，45%～70%甲醇；55～80 min，70%～80%甲醇；80～85 min，80%甲醇；85～90 min，80%～95%甲醇；90～95 min，95%～100%甲醇；95～100 min，100%甲醇；柱溫30 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長254 nm。

（2）苦杏仁苷含量測定：Diamonsil C18鉆石一代色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，10%甲醇；10～50 min，10%～23%甲醇；柱溫38 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長210 nm。

5-甘草苷 21-蘆薈大黃素 22-甘草酸銨 23-大黃酸 a-桂皮醛 b-大黃素 c-大黃酚 d-大黃素甲醚

圖2 15批TCD物質基準的HPLC特征圖譜2 (S1～S15)、對照圖譜2 (R)、混合對照品HPLC色譜圖(X)

（3）桂皮醛含量測定：Diamonsil C18鉆石二代色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈- 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～15 min，3%～32%甲醇；15～60 min，32%甲醇；柱溫30 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長290 nm。

2.3.2 對照品溶液的制備

（1）甘草酸銨對照品溶液制備：精密稱取甘草酸銨對照品適量，加甲醇制得質量濃度分別為1.235 mg/mL的甘草酸銨對照品溶液。

（2）桂皮醛、苦杏仁苷、大黃蒽醌類成分混合對照品溶液制備：同“2.2.2”項下桂皮醛、苦杏仁苷、大黃蒽醌類成分混合對照品溶液配制。

2.3.3 供試品溶液制備 取適量物質基準凍干粉，加30%甲醇定容至5 mL，4 ℃、13 000 r/min離心20 min，取上清液進行苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸含量測定。

2.3.4 方法學考察

（1）系統適應性試驗：按照“2.3.1”項下色譜條件測定混合對照品溶液、TCD物質基準的供試品溶液、各單味藥及其陰性樣品溶液，結果表明樣品中各指標成分的分離度均大于1.5、理論塔板數均大于9900，且陰性無干擾，可進行含量測定，典型圖譜如圖3～6所示。

（2）線性關系考察：精密吸取“2.3.2”項下各指標成分對照品儲備液，分別用倍比稀釋法配制成系列對照品溶液，按“2.3.1”項下各色譜條件分析，記錄色譜圖及峰面積。以峰面積為縱坐標（），質量濃度為橫坐標（），分別繪制標準曲線，如表2所示。結果表明，苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸在各自的線性范圍內線性關系良好。

圖3 TCD物質基準 (a)、缺大黃陰性樣品 (b)、大黃單味藥樣品 (c)、混合對照品(d) 的HPLC圖譜

圖4 TCD物質基準 (a)、甘草陰性樣品 (b)、甘草單味藥樣品 (c)、混合對照品(d) 的HPLC圖譜

圖5 TCD物質基準 (a)、桂枝陰性樣品 (b)、桂枝單味藥樣品 (c)、桂皮醛對照品(d) 的HPLC圖譜

圖6 TCD物質基準 (a)、桃仁陰性樣品 (b)、桃仁單味藥樣品 (c)、苦杏仁苷對照品(d) 的HPLC圖譜

（3）精密度試驗：同一批物質基準供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件，連續進樣6次，結果顯示苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸峰面積的RSD值分別為0.68%、1.32%、2.02%、0.60%、0.29%，表明儀器精密度良好。

（4）穩定性試驗：同一批物質基準供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件，分別于供試品溶液制備后0、2、4、8、12、24 h進樣分析，結果顯示苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸峰面積的RSD值分別為1.96%、1.67%、2.66%、2.50%、2.66%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

表2 TCD物質基準對應實物中各指標成分含量測定方法學考察

（5）重復性試驗：同一批物質基準供試品溶液6份，按“2.3.1”項下色譜條件進樣分析，結果顯示苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸質量分數的RSD值分別為1.87%、1.40%、1.64%、1.29%、2.55%，表明該方法重復性良好。

（6）加樣回收率試驗：取已測定各指標成分含量的TCD第7批物質基準凍干粉適量，精密稱定，分別以指標成分含量的50%、100%、150%加入各指標成分對照品儲備液各3份，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液；按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，計算苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸的回收率。結果如表2所示，各指標成分平均加樣回收率均在95%～105%，RSD在2.65%～4.36%，結果表明加樣回收率良好。

2.3.5 樣品含量測定 采用“2.3.3”項下方法分別制備15批物質基準供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表3。15批物質基準中苦杏仁苷、甘草酸銨、桂皮醛、蘆薈大黃素、大黃酸的質量分數分別為2.650～7.318、3.563～17.486、0.013～0.128、0.034～0.215、0.930～3.582 mg/g。

2.4 出膏率測定

按“2.1”項下方法制備15批物質基準樣品，測定其出膏率，計算公式為出膏率＝/[14]，式中表示物質基準樣品的質量，表示飲片投料量，結果見表3。結果表明15批物質基準的平均出膏率為19.10%，RSD為11.90%，均未出現離散數據（平均值的70%～130%以外）。

3 討論

CQAs是保證產品質量的物理、化學、生物或微生物的性質或特征，這些性質或特征應有適當的限度、范圍或分布[15]。在經典名方物質基準研究中CQAs指影響藥品安全性、有效性或一致性的質量屬性[2]。特征圖譜從整體層面對藥材、飲片質量穩定性進行評價和控制，在一定程度上可以較全面地反映經典名方中各藥味有效成分的數與量[16]，進而反映經典名方物質基準質量信息的完整概貌。經典名方藥效的發揮是多成分、多靶點、多途徑協同作用的結果，僅單一成分含量不足以反映經典名方的整體質量，多指標成分含量測定可完善經典名方質量控制體系[17]。出膏率是考察制備工藝是否穩定、均一的整體性指標參數[18]，直接影響中藥復方質量穩定性和均一性，其波動對含量有極大影響。因此確定經典名方物質基準的CQAs為特征圖譜、指標成分含量測定和出膏率。

表3 15批TCD物質基準中5種指標成分的含量及出膏率

經典名方的CQAs具有安全性、有效性、一致性的特性[2]。本方共5味中藥，根據中藥復方君、臣、佐、使的配伍原則，優先選擇方中君藥（桃仁、大黃）、臣藥（桂枝）、佐藥（甘草）的指標成分作為質量控制的指標[19]。有研究表明，桃仁水提物、苦杏仁苷、桃仁脂肪油對二磷酸腺苷誘導的血小板聚集有不同程度的抑制作用[20]。大黃中的蒽醌類化合物具有抗炎、抗腫瘤、保護心血管、保肝、護肺等生物活性[21]。甘草酸類具有抗病毒、抗癌、免疫調節[22]等作用。比較桂枝、桃仁配伍與單味藥給藥小鼠后對小鼠出、凝血時間和凝血酶時間影響，證實桂枝-桃仁配伍后較單藥桂枝抗凝血作用更強，臨床上用來治療瘀血內結的各種病證，桂枝中主要揮發性成分為桂皮醛，具有一定的抗凝血作用[23]。

本實驗進行關鍵質量屬性研究以各藥味均有質控指標為原則，《中國藥典》2020年版將甘草苷、甘草酸銨均作為甘草的質控指標，在進行特征圖譜研究時發現，經過多次色譜條件優化，甘草苷出峰仍不滿足分離度大于1.5要求且陰性干擾嚴重，因此只對甘草酸銨進行含量測定。同時，桂皮醛是《中國藥典》2020年版桂枝的質控指標，在特征圖譜研究中，桂皮醛存在陰性干擾，無法對其進行特征峰指認，因此，本實驗建立了桂皮醛含量測定方法，排除陰性干擾，對其進行質量控制。綜上所述，指標成分的選擇以《中國藥典》2020年版中各單味藥含量測定指標性成分為依據，結合TCD方解與藥效，基于CQAs有效性特性綜合分析確定TCD指標性成分為苦杏仁苷、蘆薈大黃素、大黃酸、桂皮醛、甘草酸銨。

目前，對TCD化學成分研究鮮有報道，多為提取工藝的優化及對某些指標成分的含量測定[24-26]，缺乏對其質量的整體評價研究。本研究中，由于處方組成及成分信息繁雜，大黃與桃仁共為君藥，劑量相差4倍，各成分峰面積差異很大，為了更全面地反映全方藥味信息，兼顧強、弱極性成分在色譜圖上的保留情況，本研究建立了2張特征圖譜。

本研究分別考察了在甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水溶液、甲醇-0.2%磷酸水溶液3種不同的流動相體系下色譜峰的分離情況，結果顯示甲醇-0.1%磷酸水溶液對于極性小成分有較好的色譜峰峰形，分離度較好，無明顯拖尾，故將甲醇-0.1%磷酸水溶液應用于特征圖譜1，用于中等偏弱極性成分的分析；甲醇-0.2%磷酸水溶液對于極性大成分有較好的色譜峰峰形，分離度較好，無明顯拖尾，故將甲醇-0.2%磷酸水溶液應用于特征圖譜2，用于中等偏強極性成分的分析。

本研究同時考察不同柱溫對TCD各指標成分分離度的影響。結果發現，在30～35 ℃，柱溫升高，大黃酸與甘草酸銨分離度變差，苦杏仁苷與周圍成分的分離度改善，這表明溫度升高不利于大黃酸和甘草酸銨的分離，但能夠改善苦杏仁苷的分離情況。因此，選擇30、35 ℃分別作為物質基準特征圖譜1、2的柱溫。

由于TCD中大黃的處方量為4兩（55.2 g），水煎液非常渾濁，為防止HPLC分析出現管路堵塞的問題，因此TCD水煎液凍干前進行離心處理，除去大部分沉淀。本實驗考察4、25 ℃ 2個離心溫度，發現2種溫度處理所得供試品溶液的特征圖譜差異較小，為盡量避免溫度對成分產生的潛在影響，確定4 ℃為離心溫度。

特征圖譜結果顯示15批物質基準的特征圖譜2相似度均大于0.8。其中僅第4批物質基準樣品相似度為0.809，其余批次的相似度均大于0.90。經比對發現，27號共有峰所對應的化學成分對整體評價貢獻較大，使得第4批物質基準的相似度相比其他批次有明顯的降低。第4批物質基準的大黃來源于青海海西，結果顯示該產地所產大黃和其余批次的大黃相比具有明顯的質量差異，這表明產地對大黃質量具有非常明顯的影響，進而影響物質基準的整體質量。

綜上，本實驗通過建立TCD物質基準HPLC特征圖譜及各指標成分含量測定方法，明確其出膏率范圍，初步闡明TCD物質基準的CQAs，構建了TCD物質基準的質量控制體系，為TCD物質基準的質量控制和復方制劑開發提供科學依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on critical quality attributes of classical prescription substance benchmarks of Taohe Chengqi Decoction

GUAN Ya-ge1, LUO Gan1, GAO Xiao-yan1, JIANG Yu-hang1, LIU Yu-han1, HAN Chen1, MIAO Jia-yan1, HAN Ni-na2, ZHANG Zhi-qiang2

1. Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China 2. Beijing Tcmages Pharmaceutical Co., Ltd., Beijing 101301, China

To establish the HPLC characteristic chromatogram and content determination method of index components in Taohe Chengqi Decoction (TCD) substance benchmarks, which clarified the critical quality attributes and constructed the quality control system.For characteristic chromatogram 1, the separation was performed on the Diamonsil diamond second- generation C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) at 30 ℃. The mobile phase consisted of methanol and water with 0.1% phosphoric acid at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 254 nm; Characteristic chromatographic 2 analysis was performed using the Diamonsil diamond first-generation C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm). Methanol and 0.2% phosphoric acid aqueous solution were utilized as the mobile phases. The flow rate was set at 1.0 mL/min using a gradient program. The temperature of the column was maintained at 35 ℃, and the signal was detected at 210 nm. For these two methods, the injection volume of the standard and sample was kept as 10 μL.According to polarity differences among these components of TCD, two HPLC characteristic chromatograms were established. The similarities for the two HPLC characteristic chromatograms of 15 batches of substance benchmarks of TCD were 0.928—0.992 and 0.809—0.995, respectively. A total of 32 characteristic peaks were identified and five common components were identified as amygdalin, glycyrrhizin, ammonium glycyrrhizinate, aloe-emodin, and rhein. The average dry extract yield of 15 batches of TCD was 19.10%. The contents of amygdalin, ammonium glycyrrhizinate, cinnamaldehyde, aloe-emodin and rhein were 2.650—7.318, 3.563—17.486, 0.013—0.128, 0.034—0.215, 0.930—3.582 mg/g, respectively.This study could provide scientific basis for the quality control of substance benchmarks and the development of compound preparations of TCD.

classical prescription; Taohe Chengqi Decoction; substance benchmarks; critical quality attributes; characteristic chromatogram; HPLC; quality control; amygdalin; liquiritin; ammonium glycyrrhizinate; aloe-emodin; rhein; cinnamaldehyde; dry extract rate

R286.02

A

0253 - 2670(2021)08 - 2267 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.08.009

2020-11-27

國家自然科學基金面上項目（81673562）

關雅戈（1995—），女，碩士研究生，研究方向為中藥質量控制。E-mail: gyg1421@163.com

高曉燕（1967—），博士，教授，主要從事中藥分析及藥效物質研究。Tel: 13439727699 E-mail: gaoxiaoyan@bucm.edu.cn

張志強（1981—），男，正高級工程師，主要從事中藥質量標準及產業化研究。E-mail: zhangzhiqiang@tcmages.com

#共同第一作者：羅 贛（1986—），男，博士，講師，主要從事中藥質量控制研究。E-mail: luna049@126.com

[責任編輯 鄭禮勝]