腫瘤壞死因子的調(diào)節(jié)性T細胞與肝癌發(fā)生的相關(guān)性

劉小壯 劉慶豐 趙佳麗

肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，具有很高的死亡率，特別是約2/3的患者在就診時已處于中晚期[1]。肝癌的發(fā)生機制還不明確，相關(guān)研究提出：肝癌的發(fā)病原因可能與自身免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能紊亂相關(guān)[2]。TNF是一種多功能的細胞因子，可由核巨噬細胞、淋巴細胞等產(chǎn)生[3-4]，其中，TNF-α與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，通常作為預(yù)測肝癌患者預(yù)后的標(biāo)志物[5-6]。基礎(chǔ)研究表明進行性生長的肝癌局部存在著大量調(diào)節(jié)性T細胞，若以特異性抗體抑制調(diào)節(jié)性T細胞的功能發(fā)揮，可使得腫瘤迅速消退[7]。外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞可直接反映人體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)[8-9]。本文具體探討了TNF-α和血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞與肝癌發(fā)生的相關(guān)性，以明確肝癌的發(fā)生機制。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月至2020年2月本院診治的肝癌患者124例作為肝癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡30～70歲；術(shù)前均未經(jīng)化療及免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：細菌或其病毒感染者；妊娠與哺乳期婦女；自身免疫性疾病、心腎等重要臟器疾病患者；有糖皮質(zhì)激素使用史患者。另外，選擇同期健康查體者124例作為對照組。2組入選者的性別、年齡、體重指數(shù)、心率、收縮壓、舒張壓等對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)通過，所有入選者或家屬知情同意本研究并簽署知情同意書。

表1 2組一般資料

1.2 血清學(xué)檢測

采集所有入選者的空腹外周靜脈血2～3 ml，常溫靜置60 min，1 000 rpm/min離心10 min，取血清，酶聯(lián)免疫法檢測血清TNF-α含量。應(yīng)用全自動生化分析儀(日本Olympus 公司AU2700型)檢測血清AFP、ALT、AST、TBil含量。

1.3 外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞檢測

采集的血液學(xué)樣本，抗凝后室溫保存。分離外周血單個核細胞，陰性分選CD4+調(diào)節(jié)性T細胞。將100 μl CD4+調(diào)節(jié)性T細胞加入流式細胞管，加入1 μl抗人CD28抗體(美國sigma公司)，室溫避光孵育30 min，PBS洗滌后進行重懸，采用FACSCalibur流式分析儀(美國BD公司XP2942型)計算CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例。

1.4 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)指標(biāo)對比

肝癌組的血清TNF-α含量高于對照組，血清AFP、ALT、AST、TBil含量也高于對照組，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組血清學(xué)指標(biāo)水平比較

2.2 2組CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例比較

肝癌組的CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例為(34.24±2.87)%，顯著低于對照組的(51.48±4.91)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=14.502，P=0.000)。

2.3 相關(guān)性分析

在肝癌組中，Spearman相關(guān)分析顯示CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例與TNF-α、AFP、ALT、AST、TBil都存在相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 肝癌患者CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例與其他指標(biāo)的相關(guān)性(n=124)

以CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例作為因變量，以TNF-α、AFP、ALT、AST、TBil作為自變量，多元線性回歸分析顯示TNF-α、AFP、ALT為影響CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例的主要因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響肝癌患者CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例的多因素分析(n=124)

3 討論

肝癌是臨床上比較常見的惡性腫瘤，多伴有代謝紊亂，然后發(fā)展為能量貯藏耗竭、組織損傷，具有比較高的死亡率[10]。TNF是一種多功能細胞因子，對毛細血管內(nèi)皮細胞具有直接的毒性作用，可增強NK細胞和巨噬細胞的活性，從而誘導(dǎo)白細胞介素的產(chǎn)生[11]。本研究顯示肝癌組的血清TNF-α含量高于對照組，血清AFP、ALT、AST、TBil含量也高于對照組，對比差異都有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明肝癌患者伴隨有TNF-α的高表達。也有研究顯示消化道惡性腫瘤患者術(shù)前血清中TNF-α濃度顯著高于健康人，隨后伴有白介素-6的升高[12]。特別是在肝癌患者中，當(dāng)腫瘤標(biāo)志物AFP未能發(fā)現(xiàn)腫瘤時，TNF-α含量已顯著升高[13]。

惡性腫瘤的發(fā)生是腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視的結(jié)果，一方面惡性腫瘤T細胞的激活被抑制；另一方面機體免疫監(jiān)視功能低下，使免疫系統(tǒng)無法有效清除腫瘤抗原[14]。調(diào)節(jié)性T細胞是T細胞亞群之一，可維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)，并控制自身免疫病[15]。相關(guān)研究顯示：調(diào)節(jié)性T細胞可隨年齡增加在脂肪內(nèi)累積，可炎癥因子的釋放，引發(fā)胰島素抵抗[16]。本研究顯示肝癌組的CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例顯著低于對照組(P<0.05)。從機制上分析，CD4+調(diào)節(jié)性T細胞通過與靶細胞上的相應(yīng)受體結(jié)合，可降低靶細胞對白介素-2的反應(yīng)性，從而抑制效應(yīng)T 細胞的增殖；同時其也可通過與抗原提呈細胞的作用來調(diào)節(jié)機體免疫，可通過細胞毒性作用殺傷多種自體靶細胞，從而促進惡性腫瘤的增殖[17-18]。

肝癌的發(fā)病機制還不明確，且早期癥狀隱匿，因此其早期診斷及發(fā)病因素探索至關(guān)重要[19]。通常肝癌患者會出現(xiàn)T細胞亞群平衡失調(diào)，從而導(dǎo)致免疫細胞自身功能異常[20]。而調(diào)節(jié)性T細胞可促進TNF-α介導(dǎo)的脂肪細胞胰島素信號傳導(dǎo)，促進炎性細胞因子的產(chǎn)生[21]。本研究Spearman相關(guān)分析顯示肝癌患者中的CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例與TNF-α、AFP、ALT、AST、TBil都存在相關(guān)性(P<0.05)；多元線性回歸分析顯示TNF-α、AFP、ALT為影響CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例的主要因素(P<0.05)。從機制上分析，CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例降低可導(dǎo)致機體淋巴細胞亞群比例失調(diào)，進一步影響T細胞正常功能，從而促進TNF-α、AFP、ALT的釋放[22]。另外，肝癌患者外周血中應(yīng)激水平較高，可抑制T淋巴細胞分泌，從而降低CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例[23]。本研究不足之處在于納入的樣本量較少且未分析肝癌患者病理特征以及影響肝癌發(fā)生的機制，將在后續(xù)研究中深入分析。

總之，肝癌患者的外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞比例呈現(xiàn)下降趨勢，可能與患者的TNF-α含量與肝功能狀態(tài)有關(guān)。