間充質干細胞治療新型冠狀病毒肺炎專家共識（2021年，北京）

國家感染性疾病臨床醫學研究中心，中華醫學會感染病學分會，中國研究型醫院學會生物治療學專業委員會

一、概 述

新型冠狀病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）是由新型冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）感染導致的肺炎。根據國家衛生健康委員會和國家中醫藥管理局聯合發布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》[1]，根據病情嚴重程度可分為輕型、普通型、重型和危重型。患者主要臨床表現為發熱、乏力、干咳，少數患者伴有鼻塞、流涕、腹瀉等癥狀。重癥患者多在發病1周后出現呼吸困難和（或）低氧血癥，嚴重者可快速進展為急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒、出凝血功能障礙及多器官功能衰竭等。我國已將COVID-19納入《中華人民共和國傳染病防治法》規定的按照甲類傳染病管理的乙類傳染病。2020年1月30日，WHO將COVID-19列為國際關注的突發公共衛生事件，并于2020年2月28日將其傳播和影響的風險評估提高到最高等級。COVID-19作為亟待解決的重大公共衛生事件，急需尋找安全有效的治療手段[2]。

SARS-CoV-2是有包膜的單股正鏈RNA病毒，呼吸道飛沫和密切接觸是其主要的傳播途徑，接觸病毒污染的物品也可造成感染。病毒的S蛋白通過與靶細胞表面的血管緊張素轉化酶2（angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）結合而進入細胞內進行復制和擴散[3]。感染SARS-CoV-2后，多數患者預后良好，少數患者病情危重，多見于老年人、有慢性基礎疾病者、晚期妊娠和圍產期女性、肥胖人群等。造成患者肺組織損傷的主要原因包括：①病毒感染直接引起的病理改變，包括肺泡細胞腫脹、壞死、脫落等導致的肺泡上皮細胞損傷；②機體抗病毒免疫反應引起的嚴重免疫紊亂，這在重型和危重型患者體內表現尤為明顯。COVID-19的病理表現為：肺泡腔內纖維素性滲出物聚集，巨噬細胞和淋巴細胞浸潤，肺泡間質淋巴細胞浸潤，導致肺泡毛細血管通透性增加，肺透明膜形成，肺泡壁和細支氣管管壁纖維素性壞死[4-5]。肺臟毛細血管內皮細胞及肺泡上皮細胞的彌漫性損傷，會進展為ARDS。除肺部病理損傷外，COVID-19患者尤其是重癥患者外周血中淋巴細胞數量減少、血漿炎癥因子水平顯著升高[6]，最后會導致休克及多器官功能障礙甚至死亡[7-8]。

COVID-19的臨床診治主要依據《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》[1]。主要治療手段包括對癥治療、抗病毒治療、呼吸支持治療、免疫治療以及中醫藥治療等。由于SARS-CoV-2系新發病毒，目前尚無特效的抗病毒藥物。前期研究顯示，洛匹那韋/利托那韋、瑞德西韋等抗病毒作用有限[9-10]。對于重型與危重型患者，應積極防治并發癥，及時進行呼吸支持治療。中醫治療方面可根據患者病情、體質因素以及當地氣候等進行辨證論治。

免疫治療的目的是遏制炎癥細胞的聚集性浸潤、降低炎癥因子水平和恢復免疫系統平衡。當前，免疫治療方法主要包括：①針對炎癥因子效應的抗炎癥因子治療。目前IL-1家族阻斷劑、抗IL-6抗體等正處于臨床試驗階段[11-12]。針對機體系統性免疫紊亂與耗竭，也有利用抗PD-1單克隆抗體等免疫檢查點抑制劑來逆轉COVID-19免疫耗竭的臨床研究。②康復者恢復期血漿治療。抗病毒中和抗體通過與SARS-CoV-2表面蛋白相結合，可有效阻止SARS-CoV-2感染細胞[13]，已成為有效控制病毒復制、短期內迅速改善癥狀的重要手段[14]。③干細胞治療。COVID-19疫情爆發以來，國內外已有多個團隊完成了干細胞治療COVID-19的I期和II期臨床試驗，III期臨床試驗正在進行中。現有結果表明，間充質干細胞（mesenchymal stem cell,MSC）治療COVID-19安全性良好，在縮短病程、減輕肺部損傷、降低炎癥因子水平等方面顯示出較好的臨床療效[15-19]。

二、MSC治療COVID-19的科學依據

MSC是一群來源于中胚層的多能干細胞，具有多向分化、促進組織器官修復和免疫調控等潛能。MSC可從骨髓、臍帶、胎盤、脂肪、骨骼、牙髓和子宮內膜等多個組織中分離，MSC樣細胞也可由胚胎干細胞或多能干細胞分化而來[20-21]。MSC具有低免疫原性，因不表達CD40、CD80、CD86等共刺激分子和主要組織相容性復合體Ⅱ類分子，所以引起免疫排斥反應的可能性較小[22]。同時因其對免疫細胞的調節效應不受主要組織相容性復合體分子的限制，對自體和異體的免疫細胞都可發揮免疫調節效應。MSC還具有炎癥趨化特性，通過感知炎性信號（細胞因子、趨化因子受體和整合素等）而遷移至炎癥部位，依賴細胞間直接接觸和（或）旁分泌效應而發揮作用[23]，如MSC可通過細胞間直接接觸或分泌細胞因子的方式對激活的T淋巴細胞、B淋巴細胞、自然殺傷細胞、樹突狀細胞等的增殖、分化和抗體產生等發揮調控效應[24]。

有研究顯示，外周靜脈輸入MSC后，1 h內約50%～60%的細胞停留在肺組織內，3 h后數量降至約30%，48 h后MSC會在肝臟和脾臟內聚集，10 d后仍可檢測到細胞滯留[25]。MSC聚集在肺組織可分泌細胞營養因子如角質形成細胞生長因子（keratinocyte growth factor,KGF）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor,HGF）等，促進II型肺泡上皮細胞再生，改善肺部微環境，促進ARDS損傷后肺泡上皮屏障的修復[21]。

目前已開展了多項MSC治療肺損傷的臨床研究。其中已報道的MSC治療ARDS的臨床研究超過15項，患者多為需要機械輔助通氣的危重型呼吸衰竭患者[26-29]。輸注細胞劑量從1×106cells/kg至1×107cells/kg不等，輸注途徑以外周靜脈為主[30]。臨床研究中未觀察到明顯不良反應。在肺部滲出明顯階段，MSC有助于改善氧合指數，降低肺部的炎性損傷，提示MSC治療對ARDS有一定的治療作用。除ARDS外，也開展了多項MSC治療特發性或放射性損傷引起的肺纖維化的臨床研究[31-32]，初步結果顯示患者耐受性良好，細胞治療后纖維化無明顯進展，6個月后各項肺功能指標穩定。對于H1N1、H5N1和H7N9等病毒感染引起嚴重肺損傷疾病，MSC可作為控制炎癥、改善肺損傷的重要輔助手段[33-35]。

三、MSC治療COVID-19的臨床研究進展

目前，國內外已完成多項MSC治療COVID-19的臨床研究，超過10項研究結果已發表。李蘭娟等[36]報道，2例重癥患者接受每次1×106cells/kg劑量、連續3次、間隔1～3 d的凍存宮血MSC輸注后，患者外周血淋巴細胞數量升高，炎癥指標（IL-6和C反應蛋白）降低，肺功能改善，雙側肺滲出病灶吸收。趙春華等[37]報道，7例普通型、重型和危重型患者接受單次1×106cells/kg MSC輸注后，所有患者在治療后2 d癥狀明顯緩解。3例患者包括2例普通型和1例重型患者在治療10 d后出院。西班牙Sanchez-Guijo F等[38]報道，13例重型和危重型患者接受每次1×106cells/kg劑量、1～3次脂肪MSC輸注后呼吸狀況改善，炎癥因子水平降低。馮干珠等[39]報道，41例重型和危重型患者接受單次2×106cells/kg臍帶MSC輸注后可獲得更快的臨床改善。胡敏等[40]報道，1例重癥患者接受5×107cells/次、連續3次、間隔3 d臍帶來源MSC輸注后，炎癥指標降低，胸部CT影像學改善。伊朗Hossein Baharvand等[41]報道，11例因COVID-19誘發ARDS的患者接受2×108cells/次、連續3次、間隔2 d臍帶或胎盤MSC輸注后呼吸窘迫癥狀緩解，炎癥因子水平降低。胡寶洋等[42-43]報道了一項納入27例發生肺纖維化COVID-19患者的非隨機、開放I期臨床研究，發現每次3×106cells/kg、1～3次人胚胎干細胞來源的基質和免疫調節細胞（human embryonic stem cell–derived immunity-and matrix-regulatory cells,hESC-IMRCs）輸注可減輕肺纖維化程度。近期美國Camillo Ricordi等[15]報道了一項納入24例危重型COVID-19相關ARDS患者的隨機、對照、雙盲研究，（10±2）×107cells/次、連續2次、間隔3 d的臍帶MSC輸注能顯著改善患者存活率并縮短治療時間。王福生等[16-17]報道了臍帶MSC治療COVID-19的臨床Ⅰ期和Ⅱ期研究：Ⅰ期結果顯示，3×107cells/次、連續3次、每次間隔3 d的臍帶MSC輸注對9例普通型和重型患者的安全性良好；在武漢地區開展的Ⅱ期多中心前瞻性隨機雙盲安慰劑對照臨床研究中，共納入100例重型患者，結果顯示4×107cells/次、連續3次、間隔3 d的臍帶MSC輸注可有效減少重型COVID-19患者肺部損傷，改善患者活動耐力。

上述臨床結果表明，普通型、重型、危重型的COVID-19患者接受不同來源的MSC治療后均沒有觀察到與輸注相關的不良反應，MSC治療有助于降低患者炎癥因子水平、促進肺部損傷修復、提高活動耐力、縮短住院時間。

盡管已報道的多個臨床研究結果初步證實了MSC治療COVID-19的安全性和有效性，但迄今接受MSC治療的COVID-19患者數量有限，且各臨床研究的MSC劑量和療程不一。為了進一步規范和指導MSC治療COVID-19的臨床實踐，提升COVID-19的治療水平，我們組織國內前期參與COVID-19一線診療工作的專家，以及來自感染病學、干細胞生物學、呼吸與重癥醫學、影像學、病毒學、免疫學、統計學和藥理毒理學等領域的權威專家共同商議，形成此共識。

四、MSC治療COVID-19的建議

（一）患者的選擇

1.患者入選標準

年齡16～85歲；臨床分型為重型或危重型，分型標準依據《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》[1]。

2.排除標準

①既往有腫瘤病史或現患腫瘤者，或病理檢查證實有癌前病變者；②急性心肌梗塞活動期或急性腦梗塞活動期患者；③妊娠或哺乳期患者；④心理疾病病情控制不佳的患者；⑤酒精或藥物成癮者；⑥不能或不愿簽署知情同意書或依從性差者；⑦合并活動性結核或流感病毒、腺病毒以及其它急性呼吸道病毒感染患者；⑧臨床醫生認為不適于干細胞治療的其他患者。

（二）細胞輸注準備

1.MSC的采集、制備和質量控制

干細胞供者篩選應建立并執行評估標準，樣本采集必須得到供者或其法定代表人、監護人的同意，簽署知情同意書，并經倫理委員會批準；干細胞制備過程和質量控制應按照《藥品生產質量管理規范》（GMP）要求嚴格執行。建議在開展臨床治療項目前將MSC制劑送交中國食品藥品檢定研究院等行業認可的第三方機構進行質量復核。具體規范和建議參見附件1。

2.MSC的準備

凍存細胞與新鮮培養細胞均可用于臨床治療。凍存細胞需提前做好復蘇準備。輸注前應仔細檢查細胞袋外包裝的完整性、生產（凍存）日期等信息。凍存細胞輸注時首先確定好輸注時間，細胞應在30 min內完成復蘇、藥物配伍流程并開始輸注至患者體內，細胞輸注應在2 h內完成。

3.MSC輸注方法

①推薦劑量為每次1～3×106cells/kg，每次間隔3～7 d，共進行3次輸注。②推薦使用輸血過濾器進行輸注，選取患者手臂較粗的靜脈血管輸注。③每袋細胞輸注前輕輕顛倒數次，使細胞懸浮均勻。④輸注前10 min緩慢靜滴（20～30 滴/ min），10～15 min后如無特殊反應，可將滴速調整為40～50滴/ min，直至輸注完成；若患者伴有心血管疾病，則應按醫囑控制滴速。⑤完成全部細胞輸注后，用10～30 ml生理鹽水沖洗輸注袋。⑥輸注完成后需密切觀察患者生命體征。⑦對高度過敏體質患者建議輸注細胞前使用甲基強的松龍（40 mg）預防過敏反應。

（三）細胞輸注的監測和不良反應處理

1.治療前準備

干細胞輸注前72 h內應完善血常規、肝腎功能、C反應蛋白、炎癥因子相關指標（IL-6、IL-8、TNF-α等）、凝血功能、降鈣素原、血氣分析、心臟功能、心電圖和胸部CT檢查等；詳細詢問并記錄患者既往病史、過敏史等情況。

2.治療過程監測

應在心電監護和經皮血氧飽和度監測下進行細胞輸注，并做好急救措施準備。少數患者可能出現一過性的胸悶、自覺發熱等不適，一般可自行緩解。如胸悶癥狀持續，應及時停止細胞輸注，給予吸氧和生命體征監測，完善心電圖、血氣分析等檢查，必要時對癥處理。

3.治療后監測和處理

根據MSC細胞治療其他疾病的報道和治療COVID-19的臨床試驗數據，目前其在臨床應用中尚未發現嚴重的不良事件[16，44-48]。已經報道的安全性事件主要是細胞輸注后低熱和惡心，多為自限性，一般在24 h內緩解。個別患者可能出現高熱，可給予物理降溫及對癥藥物治療。但仍不排除存在輸液反應、過敏性休克等可能，一旦出現應積極對癥治療。MSC最后一次輸注完成后3～7 d應復查血常規、肝腎功能、C反應蛋白、降鈣素原、IL-6、血氣分析和心臟功能等，對于治療前存在明顯肺部病變患者可復查胸部CT。目前尚未發現與MSC細胞治療直接相關的遠期不良事件，但仍建議在治療后1～2年內定期檢查血常規、肝腎功能、血糖、血脂、腹部彩超、胸部CT、心電圖和肺功能等。

（四）療效評價指標

評價指標包括：①臨床癥狀評價：氣短或呼吸困難可采用mMRC呼吸困難量表（見附件2）進行評估，臨床綜合情況可采用WHO臨床過程綜合評分（見附件3）進行評價[49]。②實驗室檢測指標：血常規、血氣分析、氧合指數（PO2/FiO2）、C反應蛋白、炎癥因子相關指標（IL-6、IL-8、TNF-α等）、淋巴細胞數量和亞群、乳酸脫氫酶、肝腎功能、D-二聚體、凝血功能、心肌酶等。③胸部影像學評價：建議進行高分辨胸部CT檢查，對病變范圍和特征等進行評估，可采用CT總嚴重程度評分（total severity score,TSS）等指標輔助判斷[17]。④肺功能評價（出院后隨訪）：在醫療條件和患者身體狀況允許的情況下，可進行肺功能評價[50]，主要包括限制性通氣功能障礙、肺彌散功能和氣道阻塞相關指標。⑤臨床轉歸評價標準建議參考《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第八版）》[1]。

附件2 mMRC呼吸困難量表

附件3 WHO臨床過程綜合評分

五、實施要求

基于上述共識并結合MSC治療COVID-19的前期研究結果，為了提高COVID-19的救治效果、減少并發癥，建議在COVID-19定點收治醫院并按照國家有關管理辦法開展MSC治療。相關標準可參照《藥品管理法》和國家食品藥品監督管理總局頒布的《藥品注冊管理辦法》，或原國家衛生和計劃生育委員會和原國家食品藥品監督管理總局聯合制定的《干細胞臨床研究管理辦法（試行）》執行。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

共識制定專家名單（以姓氏筆畫為序）：

王福生（國家感染性疾病臨床醫學研究中心主任，解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部主任）、王貴強（北京大學第一醫院感染科兼肝病中心主任，中華醫學會感染病學分會前任主委）、王霄英（北京大學第一醫院影像科主任）、石磊（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部生物損傷救治科副主任）、劉中民（上海市東方醫院院長）、孫云霞（北京昭衍新藥研究中心股份有限公司副總經理）、李元元（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部副主任醫師）、李太生（中華醫學會傳染病學分會主任委員，北京協和醫院感染內科主任）、李永綱（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部副主任）、吳朝暉（中國醫藥生物技術協會駐會副理事長）、吳尊友（中國疾控中心流行病學首席專家）、張文宏（復旦大學附屬華山醫院感染科主任，中華醫學會傳染病分會副主委）、張宇（中源協和副總經理兼首席科學官）、苑鑫（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部呼吸與危重癥醫學科主任）、周琪（中國科學院副院長，北京干細胞與再生醫學研究院理事長，中國科學院動物研究所研究員）、孟淑芳（中國食品藥品檢定研究院生物制品研究所細胞室主任）、孟繁平（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部生物損傷救治科副主任）、項春生（浙江大學傳染病診治國家重點實驗室副主任，國家干細胞臨床研究專家委員會委員）、趙春華（北京協和醫學院細胞生物學系主任、中國醫學科學院組織工程研究中心主任，國家干細胞臨床研究專家委員會委員）、胡豫（華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院院長）、施明（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部研究所所長）、姚晨（北京大學第一醫院醫學統計室主任，北京大學醫學院臨床研究所副所長）、徐哲（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部生物損傷救治科主任）、徐若男（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部副研究員）、高晨燕（國家藥品監督管理局藥品審評中心生物制品臨床部部長）、黃磊（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部感染性疾病科主任）、韓為東（中國研究型醫院學會生物治療學專業委員會主任委員，解放軍總醫院第五醫學中心腫瘤醫學部生物治療科主任）、程濤[ 中國醫學科學院血液病醫院（血液學研究所）所院長]、謝渭芬（海軍軍醫大學長征醫院消化內科主任醫師）、福軍亮（解放軍總醫院第五醫學中心感染病醫學部感染性疾病科副主任）、魏于全（華西醫院臨床腫瘤中心主任，生物治療國家重點實驗室主任，國家干細胞臨床研究專家委員會委員）

附件1：臍帶MSC的采集、制備與質量控制

（一）臍帶MSC采集

臍帶MSC來源于健康胎兒的臍帶組織，產婦（供者）篩選應建立并執行評估標準，篩查供者既往病史、家族史、當前健康報告和一般信息。既往病史和家族史要對遺傳病（單基因和多基因疾病，包括心血管疾病和腫瘤等）相關信息進行詳細采集。對用于異體干細胞臨床研究的供者，必須經過檢驗篩選證明無人源特定病毒，包括艾滋病病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人類嗜T 細胞病毒（HTLV）、EB 病毒（EBV）、巨細胞病毒（CMV）等的感染，以及無梅毒螺旋體感染。必要時需要收集供者的ABO 血型、HLA-I和II類分型資料，以備追溯性查詢。此外必要時還應提供供者出入疫區等其他情況的報告并進行相關樣本檢測。樣本采集必須得到供者或其法定代表人、監護人的同意，簽署知情同意書，并經倫理委員會批準。樣本的接收、轉運應有專人負責，并做好標識和記錄。

（二）臍帶MSC制備

1.制備環境及工藝流程設置

應制定干細胞采集、分離和干細胞庫建立的標準操作及管理規程，并在符合《藥品生產質量管理規范》（GMP）要求的基礎上嚴格執行，制備過程必須在B級潔凈實驗室內按照標準操作流程進行，嚴格無菌操作。非完全密封狀態下的細胞操作（如分離、培養、灌裝等）以及與細胞直接接觸的無法終端滅菌的試劑和器具的操作，應在B級背景下的A級環境中進行。標準操作程序應包括：操作人員培訓；材料、儀器、設備的使用和管理；干細胞的采集、分離、純化、擴增和細胞（系）的建立；細胞保存、運輸及相關保障措施，以及清潔環境的標準及常規維護和檢測等。

為盡量減少不同批次細胞在研究過程中的變異性，可在工藝流程中建立種子庫（master cell bank）和工作細胞庫（working cell bank）等多級管理體系，其中種子庫一般建議建立在P2代，工作細胞庫一般建議建立在P4～P5代，同時可在不同級的細胞庫中設置不同的細胞基本質量標準。在細胞采集、分離及細胞（系）建立階段（如種子庫），重點進行細胞鑒別、成活率及生長活性（包括細胞倍增時間、細胞周期、克隆形成率、端粒酶活性等）、外源致病微生物，以及基本的干細胞特性檢測（包括特定表面標志物群，成脂、成骨和成軟骨的分化潛能等）。而對經過復雜的體外培養和操作后的準備用于臨床前及臨床研究的細胞庫（如工作細胞庫）中的細胞，除進行上述檢測外，還應當進行全面的內外源致病微生物和詳細的干細胞特性檢測（包括干細胞的表達產物、分泌的功能因子以及免疫學調控功能等），以及細胞純度分析。

2.關鍵原輔料控制

體外培養和擴增的干細胞在培養過程中，需要注意定期更換培養液，及時傳代。生產制備過程中使用的培養基、培養過程的添加物等重要原材料和輔料盡量使用經監管當局批準的產品（如藥用輔料等），否則建議使用高質量級別的產品。特別是培養基成分，在滿足干細胞正常生長的情況下，應符合無菌、無致病微生物及內毒素的質量標準，殘留的培養基對受者應無不良影響；且不影響干細胞的生物學活性，即干細胞的“干性”及分化能力。在干細胞制劑制備過程中，應盡量避免使用抗生素。若使用商業來源的培養基，應當選擇有資質的生產商并由其提供培養基的組成成分及相關質量合格證明。必要時，應對每批培養基進行質量檢驗。除特殊情況外，應盡可能避免在干細胞培養過程中使用人源或動物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應進行相關檢測以確保其無特定動物源性病毒污染，不使用海綿體狀腦病等傳染病流行區來源的牛血清。若培養基中含有人的血液成分，如白蛋白、轉鐵蛋白和各種細胞因子等，應盡量采用國家已批準的可臨床應用或GMP級的產品，同時應明確其來源及批號，并要求提供質量檢定合格報告。

3.制備工藝研究與控制

MSC制劑的制備工藝包括干細胞的采集、分離、純化、擴增和傳代，干細胞庫的建立、細胞凍存、復蘇、分裝和標記以及殘余物去除，并建立培養基、輔料和包材的選擇標準。建議根據質量源于設計（quality by design,QbD）的原則對制劑制備的全過程，包括細胞收獲、傳代、分裝等操作，進行全面的工藝研究和驗證，制定合適的工藝參數和質量標準，確保對每一過程的有效控制。從整個工藝制備流程到輸入到受試者體內全過程，需要追蹤觀察并詳細記錄。對不合格并需要丟棄的干細胞制劑，需對丟棄過程進行規范管理和記錄。對于剩余的干細胞制劑的處理必須合法合規并符合倫理要求，應制定相關的操作規程并嚴格執行。干細胞制劑的相關資料需建檔并長期保存。制備的干細胞制劑可按照標準程序進行儲存、解凍復蘇。新鮮使用的細胞制劑只能在4～12 ℃短時間保存，建議在12 h內（具體新鮮制劑保存時間和有效期應通過穩定性實驗確定）進行干細胞移植。液氮凍存的制劑建議進行長期穩定性實驗以明確有效性、運輸和使用條件等，復蘇后盡量在30 min內進行回輸。

（三）臍帶MSC質量控制

由于干細胞制劑制備的最后過程往往無法進行過濾等除菌操作，因而過程和質量控制顯得尤為重要。為確保制劑的質量及其可控性，干細胞制劑的檢驗可分為質量檢驗和放行檢驗。質量檢驗是為保證干細胞經特定體外處理后的安全性、有效性和質量可控性而進行的較全面質量檢驗，檢測方法需要根據2020版《中國藥典》的規定進行驗證后施行，如為自主建立的新檢測方法需進行全面的方法學驗證后施行。放行檢驗是在完成質量檢驗的基礎上，對每一類型的每一批次干細胞制劑，在臨床應用前所應進行的檢驗。建議對多批次干細胞制劑進行質量檢驗，并在制備工藝、場地或規模等發生變化時，重新對制備過程進行工藝驗證。可建立快速放行檢驗方法來確認細胞制劑的質量及安全信息，以保證臨床使用的及時性。

干細胞制劑抵達醫療機構后，建議輸注前可通過細胞計數和活力測定對干細胞進行質量檢驗，有條件的機構可使用流式細胞儀進行干細胞表型的鑒定。

1.制劑放行檢驗指標（表1）

表1 制劑放行檢驗指標及制定依據

2.制劑醫療機構檢測項目

指醫療機構對運抵醫院的細胞制劑進行的檢驗以進一步檢測輸注前細胞的狀態。至少應包括細胞計數和細胞存活率檢測，有條件的可使用流式細胞儀進行干細胞表型的鑒定和細胞凋亡檢測。

3.第三方機構檢測

制備的MSC制劑建議臨床治療前送交中國食品藥品檢定研究院等權威第三方機構進行檢定，以進一步明確其相關產品屬性。

4.制劑的質量研究建議在臨床前研究階段，利用不同的體外和動物模型實驗方法對干細胞制劑進行全面的安全性、有效性及穩定性研究。安全性研究主要包括：（1）生長活性和狀態。生長因子依賴性的檢測，在培養生長因子依賴性的干細胞時，需對細胞生長行為進行連續檢測，以判斷不同代次的細胞對生長因子的依賴性。（2）致瘤性和促瘤性。目前，普遍認為MSC“不致瘤”或具有“弱致瘤性”，但不排除其對已存在腫瘤的“促瘤性”作用。因此建議在動物致瘤性試驗中，選擇足夠數量的細胞和足夠長的觀察期。另一方面，除嚙齒類動物外可選擇食蟹猴等大動物模型以明確長期安全性。（3）加強對培養過程中添加的成分殘余量的檢測，以控制殘余的、影響干細胞制劑質量和安全性的成分，如牛血清蛋白、抗生素、外源細胞因子。有效性指標主要包括其生物學效應。隨著研究的進展，建議針對臨床治療的適應癥和其治療機理，不斷研究并更新生物學效應檢測方法以找到替代性生物標志物。穩定性研究主要包括對干細胞制劑在儲存（如一般生物制品運輸溫度，或液氮凍存和細胞植入前的臨時存放）和運輸過程中開展的一系列穩定性實驗以確定制劑的有效期。檢測項目主要包括細胞活性、密度、純度、無菌性等。根據干細胞制劑穩定性試驗結果，確定其制劑的保存液成分與配方、保存及運輸條件以及有效期，同時確定與有效期相適應的運輸容器和工具，以及合格的細胞凍存設施和條件。

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