沈陽(yáng)市首起黑天鵝H5N6高致病性禽流感疫情診斷與應(yīng)急處置

齊景文，吳 靖，依穎新，楊蘊(yùn)力，吳佳寧，曾慶南，宋如斌，李 祺

（沈陽(yáng)市動(dòng)植物及產(chǎn)品檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，遼寧沈陽(yáng)110031）

高致病性禽流感是由A型流感病毒引起的雞的急性、熱性、高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織定為A類傳染病，被我國(guó)定為一類傳染病。自1996年我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)高致病性禽流感以來，H5亞型禽流感病毒傳播和流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大。隨著病毒不斷變異升級(jí)，疫情趨于復(fù)雜化，嚴(yán)重影響我國(guó)禽業(yè)養(yǎng)殖及畜產(chǎn)品安全。H5N6亞型禽流感病毒是H5N1和H6N6禽流感病毒重配整合形成的流感病毒，對(duì)水禽有較高致病力。2013年之前，家禽感染的禽流感病毒類型多以H5N1禽流感病毒為主，2013年出現(xiàn)家禽感染H5N6亞型禽流感，2014年發(fā)現(xiàn)首例人感染H5N6亞型禽流感病例[1-2]。

2021年4月8日，沈陽(yáng)市動(dòng)植物及產(chǎn)品檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心（簡(jiǎn)稱中心）接到和平區(qū)市場(chǎng)監(jiān)管事務(wù)服務(wù)與行政執(zhí)法中心報(bào)告，在和平區(qū)長(zhǎng)白街河堤西路的長(zhǎng)白島森林公園有10只黑天鵝、1只大雁死亡。中心組織專家組前去調(diào)查處置和現(xiàn)場(chǎng)采樣。4月9日，經(jīng)市級(jí)和省級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，診斷病癥疑似H5亞型高致病性禽流感。4月10日，經(jīng)國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室病毒分離鑒定，確定病癥為H5N6亞型高致病性禽流感。緊急流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，此次禽流感病毒很可能由遷徙候鳥引入，公園鳥類未及時(shí)開展免疫，鳥類體內(nèi)抗體水平低是疫情暴發(fā)的內(nèi)源因素。

1 流行病學(xué)調(diào)查

1.1 地理位置勘查

長(zhǎng)白島森林公園位于渾河南堤（東經(jīng)：123°22′45.31″，北緯：41°44′48.73″），占地面積10 000 m2。疫點(diǎn)位置衛(wèi)星圖見圖1。由圖1可知，公園緊鄰渾河，渾河水面寬闊、兩岸植被豐富，森林覆蓋度80%，是遷徙野鳥的落腳點(diǎn)，也是過冬野鳥棲居地。公園屬于景區(qū)，游客較多，周圍8 km范圍內(nèi)沒有家禽養(yǎng)殖場(chǎng)和活禽交易市場(chǎng)，近1年內(nèi)未從外地引入活禽。

1.2 動(dòng)物養(yǎng)殖情況

森林公園內(nèi)養(yǎng)殖觀賞鳥類8種，共280只，其中，黑天鵝117只、白天鵝7只、赤麻鴨29只、珍珠雞9只、孔雀15只、鴕鳥10只等。除禽類外，還有羊駝4只、駝羊2只、鹿12只、駱駝4只、矮馬6只、牦牛2只、羊15只、猴子25只等。今年未進(jìn)行禽流感免疫。

2 發(fā)病經(jīng)過

4月6日，個(gè)別黑天鵝出現(xiàn)打蔫現(xiàn)象，當(dāng)天有3只黑天鵝死亡，7日有2只黑天鵝死亡。截至目前，共死亡黑天鵝10只、大雁1只。

3 臨床剖檢結(jié)果

共剖檢黑天鵝2只，黑天鵝肝臟、胰臟剖檢情況見圖2、圖3。由圖2可知，剖檢可見黑天鵝肝臟病變明顯，肝臟腫大、兩側(cè)大小不一致、表面呈黃白色、內(nèi)部有纖維化病變。由圖3可知，黑天鵝氣管充血、胰臟表面有壞死灶、直腸大面積出血。其他器官未見明顯變化。

4 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果

4.1 樣品采集

采集死亡黑天鵝組織臟器（心、腦、肺、脾）2份及其生活環(huán)境樣品（糞便、土壤、飼料、飲水）15份。病毒采樣管冷藏保存，2 h內(nèi)送至沈陽(yáng)市動(dòng)植物及產(chǎn)品檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心實(shí)驗(yàn)室。

4.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

采用熒光定量PCR方法進(jìn)行禽流感通用型及H5亞型、H7亞型、H9亞型病毒核酸檢測(cè)[3]。采用kingfisher核酸自動(dòng)提取儀和ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)。核酸檢測(cè)試劑盒購(gòu)自鄭州中道生物技術(shù)有限公司，反應(yīng)體系及參數(shù)參照試劑盒說明設(shè)置。

4.3 禽流感核酸檢測(cè)統(tǒng)計(jì)（見表1）

禽流感通用型核酸檢測(cè)陽(yáng)性4份，其中組織2份，糞便2份。經(jīng)分型檢測(cè)，H5亞型流感核酸檢測(cè)陽(yáng)性3份，組織1份、糞便2份；H7、H9亞型流感核酸檢測(cè)均為陰性。高度疑似禽流感H5亞型禽流感。

4.4 病例確診

經(jīng)國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病毒分離鑒定，最終確定為H5N6亞型高致病性禽流感疫情。

5 疫源分析

每年春秋兩季，有大批候鳥進(jìn)行有規(guī)律的遷徙，往返于繁殖區(qū)和越冬區(qū)，候鳥會(huì)在途經(jīng)地選擇水源充足，植被覆蓋度較高的地點(diǎn)采食休息，留下糞便。長(zhǎng)白島森林公園所處的渾河南堤是俄羅斯西伯利亞遷徙野鳥的落腳點(diǎn)，也是過冬野鳥的棲居地。野鳥體內(nèi)常攜帶禽流感病毒，推測(cè)本次疫情由遷徙野鳥帶毒傳入的可能性最大。近幾年暴發(fā)多起家禽及野生鳥類高致病性禽流感疫情。這些地區(qū)多數(shù)位于候鳥遷徙路線上，且H5N6亞型禽流感病毒更易感染野生水禽，由野生水禽攜帶跨區(qū)域傳播[4-5]。

比對(duì)疫情發(fā)生時(shí)間與空間，本次H5N6亞型禽流感疫情出現(xiàn)在春季，與野生鳥類遷徙時(shí)間一致；疫點(diǎn)處于候鳥遷徙路線上，空間上一致[6]。此外，疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)周邊3 km范圍內(nèi)，家禽養(yǎng)殖量極少，沒有活禽交易市場(chǎng)。因此，家禽感染風(fēng)險(xiǎn)低，疫情擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)極低，說明本次疫情的發(fā)生應(yīng)該與野生鳥類遷徙密切相關(guān)。

6 疫情處置

劃定長(zhǎng)白島森林公園為疫點(diǎn)，疫點(diǎn)向外周圍3 km范圍內(nèi)劃為疫區(qū)，以疫區(qū)邊緣向外延伸5 km為受威脅區(qū)。

按照《高致病性禽流感疫情應(yīng)急實(shí)施方案》（2020年版）,在4月12日啟動(dòng)Ⅳ級(jí)疫情響應(yīng)，對(duì)公園內(nèi)飼養(yǎng)的所有禽類進(jìn)行撲殺無害化處理，頒布封鎖令。疫情封鎖期間疫點(diǎn)、疫區(qū)內(nèi)的觀鳥通道禁止任何人員、車輛進(jìn)出；設(shè)置多處消毒點(diǎn)和警示標(biāo)識(shí)，對(duì)進(jìn)出人員、車輛、物品等嚴(yán)格消毒，禁止載有畜禽等易感動(dòng)物的車輛進(jìn)出；在疫區(qū)、受威脅區(qū)禁止交易禽類及相關(guān)產(chǎn)品；繼續(xù)加強(qiáng)疫點(diǎn)管制和消毒工作；加強(qiáng)對(duì)疫區(qū)和受威脅區(qū)內(nèi)野生禽類巡查，發(fā)現(xiàn)異常立即按照國(guó)家規(guī)定進(jìn)行上報(bào)及處置；依法做好疫區(qū)封鎖、隔離、管控等工作，依法維護(hù)景區(qū)管理制度及秩序。

7 結(jié)論

本次疫情是沈陽(yáng)市首起黑天鵝H5N6亞型高致病性禽流感疫情。疫情發(fā)生后，沈陽(yáng)市政府及相關(guān)機(jī)構(gòu)迅速采取封鎖、消毒、撲殺、緊急免疫等應(yīng)急處置措施，使疫情得到有效控制，避免疫情擴(kuò)散。結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)勘察排查和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，推測(cè)這次疫情由攜帶病毒的遷徙野鳥傳入。本次疫情警示，在野鳥遷徙季節(jié)，要切實(shí)加強(qiáng)禽流感監(jiān)測(cè)和強(qiáng)制免疫工作，高度重視動(dòng)物園及其附近場(chǎng)所珍稀禽類的免疫，以降低疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。