標本溶血對干式免疫熒光法檢測CRP的影響

李 進 祁從輝 郭美玲

（建湖縣第三人民醫院檢驗科，江蘇 鹽城224700）

C反應蛋白（creation protein，CRP）是機體一種重要的急性期蛋白，在健康人血液中含量極微，當機體細菌感染和組織損傷時，CRP的濃度顯著增高，因而是體內各種炎癥和組織損傷的敏感性指標，對鑒別病毒與細菌感染有重要價值[1-3]。臨床選用干式免疫熒光定量法檢測超敏C反應蛋白的原因是其具有快速、簡便、結果可靠、敏感性高的特點，可廣泛適用于門急診的需求[4]。在日常檢驗工作中，常會遇到一些檢驗結果與臨床表現不符的現象，影響病人的救治，甚至會引起特別嚴重的后果[5-6]，究其原因發現標本的溶血就是其中原因之一，約占分析前誤差的60%[7]。溶血對CRP的檢測造成怎樣的影響，本文將對此進行實驗探討。而CRP存在于血漿中[8]，故本試驗將觀察干式免疫熒光法檢測不同程度溶血標本對血漿CRP的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年9月至11月份門診和住院的60名診斷為急性炎癥患者標本，其中男性35例，女性25例。選取的標本應將脂血、黃疸、溶血等樣品排除，所有檢測均按實驗標準操作規程完成，并盡量減少外界因素的干擾，且每人采集4管血液于EDTA-K2的抗凝真空管中[9]。

1.2 溶血程度分級 以血漿中血紅蛋白的含量來分級，輕度溶血（Hb1.0～10.0g/L）、中度溶血（Hb 10.1～20g/L），重度溶血（Hb 20.1～30g/L）。

1.3 儀器與試劑 使用的檢測儀器包括基蛋生物Geteln1100免疫熒光定量分析儀、湘儀低速離心機TDZ5-WS、邁瑞全自動血液分析儀BC-5180。所用試劑及反應物件均為各自廠家配套產品。

1.4 檢測方法 測定上述選取的60位患者血標本中CRP所得的數據設為對照組；用帶針頭的注射器抽打1～3次的標本至輕度溶血后所測得的數據設為輕度溶血組；用帶針頭的注射器抽打5～7次的標本至中度溶血后所測得的數據設為中度溶血組；用帶針頭的注射器抽打10次以上的標本至重度溶血后所測得的數據設為重度溶血組。第1管用于正常檢測CRP的含量并記錄所有數據。第2管用帶針頭的注射器抽打1～3次后，用湘儀TDZ5-WS離心（3000r/5min），再用BC-5180全自動血細胞分析儀檢測血漿中血紅蛋白的含量，使其在輕度溶血的范圍內，然后用Geteln1100免疫熒光定量分析儀檢測CRP含量并記錄所有數據；第3管用帶針頭的注射器抽打5～7次后，用湘儀TDZ5-WS離心（3000r/5min），再用BC-5180全自動血細胞分析儀檢測血漿中血紅蛋白的含量，使其在中度溶血的范圍內，然后用Geteln1100免疫熒光定量分析儀檢測CRP含量并記錄所有數據；第4管用帶針頭的注射器抽打10次以上，用湘儀TDZ5-WS離心（3000r/5min），再用BC-5180全自動血細胞分析儀檢測血漿中血紅蛋白的含量，使其在重度溶血的范圍內，然后用Geteln1100免疫熒光定量分析儀檢測CRP含量并記錄所有數據，最后進行比較相關數據。所有實驗均按照我院檢驗科SOP文件和廠家的說明書操作。

1.5 觀察指標 本次研究中的觀察指標為輕、中、重度溶血標本對應的CRP檢驗結果與其未溶血前的CRP結果的差異。

1.6 統計學方法 采用臨床醫師統計學助手10.1軟件對數據進行處理，實驗數據以均數±標準差（±s）來表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

輕度溶血組和對照組的檢查結果比較，無顯著性差異，（P＞0.05）；中度溶血標本和對照組比較，差異顯著，（P＜0.05），有統計學意義。重度溶血標本和對照組比較，差異顯著，P＜0.01，有統計學意義。見表1

表1 溶血對CRP檢測的影響

3 討論

本實驗將輕、中、重度溶血分別和溶血前標本中的CRP含量進行比較，以研究不同程度的溶血標本對檢查結果的影響。輕度溶血與溶血前血漿中含有的CRP比較，無顯著差異；中、重度溶血與溶血前血漿中含有的CRP比較，有顯著差異，有統計學意義；本研究結果顯示輕度溶血的標本對CRP的測定無明顯影響，但中、重度溶血對其結果會產生影響。

在試劑廠家說明書和網絡學術資料中無法獲悉嚴重溶血的標本影響干式免疫熒光測定CRP的原因，而溶血因素干擾免疫熒光法測定各類項目常見的原因主要有以下三種（1）嚴重溶血的血標本，其紅細胞膜被破裂，使其釋放出血紅蛋白來[10]，造成反應混合物顏色背景變暗，阻礙了儀器比色的光路傳導和透射，使儀器光路接收器對檢測光線接收的識別力和敏感性下降，從而使儀器接收到的信號減弱，導致結果偏低；（2）標本溶血時破壞了紅細胞，細胞中的內液被釋放到血液中，使血漿量增多，稀釋了被檢物質，當用儀器檢測后，結果低于未溶血時的結果；（3）嚴重溶血的血標本，可能釋放出可以與抗體發生交叉反應的抗原或其他干擾物質，使測試帶上的復合物積聚增多（或減少），從而影響檢驗結果的準確性。本試驗中重度溶血引起CRP結果減低可能涉及前兩種原因較多，尤其是第二種原因，因此，溶血的標本會稀釋和干擾被檢物質，無論全血還是血漿或血清檢測CRP時均應避開標本溶血。如果遇到中、重度溶血標本必須重新采集血液標本檢測，以確保檢測結果的準確性[11-12]。

干式免疫熒光法檢測中、重度溶血標本中CRP有顯著影響，致使檢驗結果偏低，可能會耽誤臨床醫生的診斷，甚至造成嚴重后果。溶血標本對不同的檢查項目影響不同，而且對檢查結果的影響和溶血的輕重程度還有關，因此血標本檢測時檢查是否溶血很有必要。在日常工作中，需加強對血液標本采集、保存、轉運、檢驗等各個環節都要規范性操作，并加強培訓和管理，減少檢驗誤差和偏倚，更好地服務于臨床，為患者后續治療提供可靠的參考依據[13-15]。