人參-黃芪對(duì)衰老大鼠的抗衰老作用及其抗氧化作用機(jī)制研究

程波敏，吳海濱，宋曉容，林基偉，李博涵，朱艷萍，劉卓超

(深圳市中醫(yī)院治未病中心,廣東 深圳 518000)

衰老是一種自然的生命現(xiàn)象，以機(jī)體各部分組織和器官的功能活動(dòng)逐漸衰退為特征。中醫(yī)延年學(xué)說對(duì)人體衰老或早衰的認(rèn)識(shí)源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，以氣血津液學(xué)說最為經(jīng)典，氣為生命之源，衰老中醫(yī)所謂“氣虛”，即原氣不足，臟腑機(jī)能逐漸減退的虛弱癥候臨床常用補(bǔ)益劑延年益壽[1]?，F(xiàn)代研究認(rèn)為衰老是一個(gè)內(nèi)外多種因素(基因、環(huán)境和精神心里等)共同作用的綜合結(jié)果[2]。氧化自由基學(xué)說是目前比較公認(rèn)的衰老原因之一，過量自由基導(dǎo)致細(xì)胞功能嚴(yán)重受損以至衰老、死亡[3]，提示抗氧化干預(yù)很可能是抗衰老的一個(gè)重要靶點(diǎn)。

《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載：“人參主補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目開心益智，久服輕身延年?！比藚⒂锌顾ダ?、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、益智、調(diào)節(jié)血管血液系統(tǒng)等作用[1]。研究顯示從人參莖葉中提取的人參皂苷(Rb1、Rb2、Rc、Rg1、Rg2等)能不同程度的清除氧自由基，其中Rb1和Rg1被證實(shí)作用最強(qiáng)[4]。黃芪最早見于《五十二病方》，復(fù)載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有“補(bǔ)氣”之功；黃芪味甘，具有補(bǔ)氣固表、利尿、托毒排膿，生肌之功。其活性成分黃芪甲苷[5]具有抗衰老、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗纖維化等作用[6]。綜上所述，本研究在衰老大鼠模型上探討人參-黃芪的抗衰老作用及其發(fā)揮抗氧化作用的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3月齡SPF級(jí)SD雄性大鼠50只由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中也提供，體重分別為300-350g/只。50只大鼠分為5組：對(duì)照組、模型組、人參組、黃芪組、人參黃芪組，大鼠在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后用于試驗(yàn)研究，室溫20-25℃，濕度40-60%，定期紫外燈消毒。

在模型組、人參組、黃芪組、人參黃芪組大鼠后肢外側(cè)皮下部位連續(xù)注射D-半乳糖，注射劑量為0.125g/kg*d，注射時(shí)間為每天上午9∶00-1∶00，連續(xù)注射40d。

50只大鼠均在自由攝食、飲水，標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)40d。

1.2 干預(yù)方式

每日腹腔注射給予黃芪組大鼠200mg/kg黃芪多糖，人參組大鼠40mg/kg人參總皂苷,人參黃芪組大鼠200mg/kg黃芪多糖及40mg/kg人參總皂苷,同時(shí)給予正常組和模型組大鼠等量生理鹽水，連續(xù)注射8周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1大鼠外觀

研究期間觀察大鼠毛色、行動(dòng)、精神狀況等。

1.3.2血清SOD活力、MDA含量檢測(cè)

大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后從腹主動(dòng)脈取血，血液立即離也(3500r/min)10min，吸取上清液，操作按試劑盒說明書進(jìn)行SOD及MDA活力檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中所用手術(shù)器械經(jīng)高壓蒸汽消毒，操作遵循無菌原則。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，組間比較采用LSD法和Bonferroni法；方差不齊時(shí)采用近似F檢驗(yàn)。對(duì)不服從正態(tài)分布的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用中位數(shù)表示，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 大鼠外觀

如圖1與正常大鼠相比，通過人工D-gal誘導(dǎo)致衰老的大鼠表現(xiàn)為毛色暗黃，行動(dòng)遲緩。

圖1 正常大鼠(左)與衰老大鼠(右)的外觀比較

2.2 大鼠血清SOD指標(biāo)檢測(cè)

如圖2大鼠經(jīng)衰老誘導(dǎo)后，血清中SOD活性顯著低于對(duì)照組大鼠；但以人參或黃芪處理后，相對(duì)于衰老模型組，SOD活性顯著提高。這一結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的衰老能顯著降低大鼠血清中的SOD活性，而人參與黃芪能提高SOD活性。

圖2 正常大鼠與衰老大鼠經(jīng)人參與黃芪處理后的血清SOD活性比較

2.3 大鼠血清MDA指標(biāo)檢測(cè)

如圖3大鼠經(jīng)衰老誘導(dǎo)后，血清中MDA含量顯著高于對(duì)照組大鼠；但以人參或黃芪處理后，相對(duì)于衰老模型組，MDA含量顯著降低。這一結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)的衰老能顯著提高大鼠血清中的MDA含量，而人參與黃芪能降低血清MDA含量。

圖3 正常大鼠與衰老大鼠經(jīng)人參與黃芪處理后的血清SOD活性比較

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，人參和黃芪處理后，SOD和MDA活性提高，人參-黃芪聯(lián)合應(yīng)用后，相對(duì)于衰老模型組，SOD和MDA活性顯著提高，表明人參黃芪聯(lián)用具有更好的抗衰老作用。與既往研究結(jié)果相一致。國(guó)外學(xué)者[7]觀察到人參二醇尤其是人參皂苷Rb2通過誘導(dǎo)SOD和CAT基因表達(dá)能從基因水平逆轉(zhuǎn)氧化酶調(diào)控，發(fā)揮抗氧化的關(guān)鍵作用；黃芪與人參作用相似，同樣能夠通過提高抗氧化酶活性發(fā)揮抗衰老的作用[8]。劉莎等[9]的研究表明，黃芪能清除體內(nèi)自由基，提高細(xì)胞的抗氧化能力，調(diào)節(jié)免疫功能，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，從而延緩衰老。

綜上所述，單獨(dú)應(yīng)用人參或黃芪可提高衰老大鼠抗氧化能力，但聯(lián)合應(yīng)用效果更佳，具有更好的抗衰老作用。