核酸與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血液病毒的效果評(píng)價(jià)

高雯麗

（石河子紡織醫(yī)院 新疆 石河子 832000）

乙型肝炎病毒（HBV）為導(dǎo)致乙型肝炎的病原體，人類(lèi)免疫缺陷病毒即艾滋病病毒（HIV），是導(dǎo)致人類(lèi)免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒[1]。丙型肝炎病毒（HCV）具有異源性、可變性[2]。乙型肝炎病毒、艾滋病病毒、丙型肝炎病毒等均可通過(guò)血液進(jìn)行傳播，因此加強(qiáng)血液病毒檢驗(yàn)為減少、預(yù)防輸血中病毒傳染的重要方式[3]。酶聯(lián)免疫檢測(cè)為酶免疫測(cè)定技術(shù)中被臨床廣泛應(yīng)用的技術(shù)方式，利用酶分子與抗體、抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，進(jìn)行測(cè)定，具有較高臨床價(jià)值[4]。核酸檢測(cè)方式通過(guò)檢測(cè)呼吸道標(biāo)本、血液及糞便中判斷有無(wú)外來(lái)侵入的病毒的核酸，進(jìn)而確定有無(wú)被病毒感染。選取154份無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本進(jìn)行檢測(cè)，內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年5月—2019年5月我院無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本154份，分別對(duì)154份血液樣本進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)、核酸檢測(cè)，對(duì)比酶聯(lián)免疫檢測(cè)、核酸檢測(cè)兩種檢測(cè)方式的臨床檢測(cè)結(jié)果。154份血液樣本中男性獻(xiàn)血者、女性獻(xiàn)血者分別85份、69份，年齡下限值為18歲，上限值為63歲，平均年齡（44.21±4.42）歲。采集無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本后將獲取的樣本均放在2～8℃條件下存儲(chǔ)，154份無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本經(jīng)梅毒、轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)表示可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①血液樣本合格，與各項(xiàng)目試驗(yàn)技術(shù)要求相符。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在乙肝、甲肝病毒的血液樣本。

1.3 方法

對(duì)154份無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本分別進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)、核酸檢測(cè)，檢測(cè)人員在檢測(cè)過(guò)程中需仔細(xì)觀察檢驗(yàn)圖像、數(shù)據(jù)，保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、有效性。

核酸檢測(cè)：使用醫(yī)院提供的混樣儀、核酸提取擴(kuò)增系統(tǒng)、試劑等進(jìn)行檢查。將存儲(chǔ)在2～8℃條件下的血液標(biāo)本取出，在室溫下對(duì)真空抗凝管中血液標(biāo)本進(jìn)行20 min離心、分離血清處理，結(jié)合后放于2～8℃條件下存儲(chǔ)。經(jīng)檢查表明血液標(biāo)本可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，將合格的血液標(biāo)本放在樣品條架上，根據(jù)分配試劑一級(jí)程序步驟進(jìn)行操作。將100 μL A、B洗液，100 μL A、B洗脫液，加入B號(hào)96孔深孔板內(nèi)，將50 μL磁珠、600 μL結(jié)合液體倒入A號(hào)96孔深孔板內(nèi)。對(duì)樣品展開(kāi)裂解，注意預(yù)防樣本污染。樣品裂解完成后，將程序使用三級(jí)核酸提取出來(lái)，對(duì)B號(hào)96孔深孔板、A號(hào)96孔深孔板使用核酸提取儀提取核酸，調(diào)配擴(kuò)增核酸反應(yīng)溶液。使用四級(jí)核酸擴(kuò)增程序提取標(biāo)本量中核酸，將核酸提取后結(jié)合液倒入八聯(lián)管內(nèi)，在PCR儀器中擴(kuò)增八聯(lián)管，詳細(xì)記錄檢測(cè)結(jié)果，將陽(yáng)性匯集孔樣本挑出，予以拆分實(shí)驗(yàn)，明確陽(yáng)性樣本。

酶聯(lián)免疫檢測(cè)：使用醫(yī)院提供的檢測(cè)系統(tǒng)、處理系統(tǒng)、試劑等進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑內(nèi)配套說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。取出存儲(chǔ)在真空抗凝管內(nèi)的樣本在室溫下進(jìn)行20 min離心，分離血漿，放于適宜條件下保存。離心結(jié)束后，使用全自動(dòng)加樣儀進(jìn)行自動(dòng)加樣，使用全自動(dòng)酶免分析儀展開(kāi)分析，記錄結(jié)果。

1.4 臨床評(píng)價(jià)

對(duì)比分析核酸檢測(cè)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法等兩種檢測(cè)方式檢測(cè)血液病毒的結(jié)果，分析臨床檢驗(yàn)血液病毒使用核酸檢測(cè)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法等兩種檢測(cè)方式的應(yīng)用價(jià)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)錄入到SPSS 22.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料對(duì)比采用t檢驗(yàn)，以（）表示，而計(jì)數(shù)資料對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，以率（%）進(jìn)行表示，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 核酸檢測(cè)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法等兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果

核酸檢測(cè)方式檢測(cè)艾滋病病毒的陽(yáng)性率8.44%（13/154），酶聯(lián)免疫檢測(cè)方式檢測(cè)艾滋病病毒的陽(yáng)性率為2.60%（4/154），核酸檢測(cè)方式檢測(cè)艾滋病病毒陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；核酸檢測(cè)方式檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性率6.49%（10/154），酶聯(lián)免疫檢測(cè)方式檢測(cè)乙型肝炎病毒的陽(yáng)性率為1.30%（2/154），核酸檢測(cè)方式檢測(cè)乙型肝炎病毒陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；核酸檢測(cè)方式檢測(cè)丙型肝炎病毒的陽(yáng)性率9.74%（15/154），酶聯(lián)免疫檢測(cè)方式檢測(cè)丙型肝炎病毒的陽(yáng)性率為3.25%（5/154），核酸檢測(cè)方式檢測(cè)丙型肝炎病毒陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 核酸檢測(cè)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法等兩種檢測(cè)方式的檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

3.討論

艾滋病又可以稱(chēng)為獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS），是因機(jī)體感染人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）導(dǎo)致的全身性疾病。感染HIV病毒后人體會(huì)出現(xiàn)不同程度的免疫功能缺陷，沒(méi)有接受治療的患者在疾病晚期容易并發(fā)多種嚴(yán)重感染、惡性腫瘤，最終走向生命盡頭。艾滋病、乙型肝炎等疾病通過(guò)血液傳播病毒，對(duì)人們生命健康安全造成較大威脅。使用有效的檢測(cè)方式檢驗(yàn)血液有利于減少醫(yī)院糾紛、降低輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)。酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)為臨床多見(jiàn)抗體、抗原測(cè)定方式。基于相關(guān)聯(lián)的酶對(duì)免疫復(fù)合物發(fā)生酶催化反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。現(xiàn)如今多數(shù)血站使用基于2次酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)方式對(duì)血液展開(kāi)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該方式檢出率不高，且漏診、錯(cuò)診較高，對(duì)血液檢測(cè)效率產(chǎn)生較大影響，導(dǎo)致安全隱患增加[5]。核酸檢測(cè)方式有利于控制輸血有關(guān)因素導(dǎo)致正常人群感染、感染性疾病擴(kuò)散，提高社會(huì)安全性。

本研究使用核酸檢測(cè)方式檢測(cè)艾滋病病毒陽(yáng)性率、乙型肝炎病毒陽(yáng)性率、丙型肝炎病毒陽(yáng)性率均高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)。提示核酸檢測(cè)可有效提高臨床檢驗(yàn)血液病毒的準(zhǔn)確性、減少漏診，具有較高靈敏度、特異度。核酸檢測(cè)方式運(yùn)用病毒核酸擴(kuò)增技術(shù)，將病毒擴(kuò)增至陽(yáng)性匯集孔，使檢測(cè)病毒的靈敏度大幅度升高。并且在病毒窗口階段也可進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)減少漏診、錯(cuò)診率、縮短病毒窗口階段具有極大臨床意義。酶聯(lián)免疫檢測(cè)方式為臨床多見(jiàn)的抗體、抗原測(cè)定方式，基于相關(guān)聯(lián)的酶對(duì)免疫復(fù)合物發(fā)生酶催化反應(yīng)測(cè)定。檢測(cè)艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等靈敏度較低與免疫靜默感染、病毒變異、窗口期等有關(guān)。乙型肝炎病毒感染和季節(jié)有關(guān)，冬天氣溫較低，人體乙型肝炎表面抗原活性較低，表達(dá)水平低，導(dǎo)致酶聯(lián)免疫檢測(cè)方式發(fā)生漏檢。

李玉泉[6]對(duì)血站檢驗(yàn)科500例血液樣本展開(kāi)研究，發(fā)現(xiàn)核酸檢測(cè)得到乙型肝炎病毒（HBV）陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)，核酸檢測(cè)得到人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）陽(yáng)性率高于酶聯(lián)免疫檢測(cè)，表明對(duì)血液樣本使用核酸檢測(cè)方式進(jìn)行檢驗(yàn)有助于提高臨床醫(yī)療質(zhì)量、檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。曹華琳[7]對(duì)26 325份無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本發(fā)現(xiàn)核酸檢測(cè)方式可檢出酶聯(lián)免疫檢測(cè)無(wú)法檢出的病毒變異，隱性感染、窗口期等情況，指出核酸檢測(cè)方式利用擴(kuò)增相應(yīng)病毒顆粒RNA，并使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢查基因擴(kuò)增產(chǎn)物，降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。核酸檢測(cè)的臨床應(yīng)用效果良好，本結(jié)果與之一致。核酸檢測(cè)方式對(duì)檢測(cè)環(huán)境、檢驗(yàn)工作者、血液標(biāo)本等具有較高要求，若血液標(biāo)本質(zhì)量無(wú)法得到保證，將對(duì)核酸檢測(cè)方式準(zhǔn)確性產(chǎn)生直接影響。因此后續(xù)需加強(qiáng)血液樣本質(zhì)量監(jiān)測(cè),提高檢驗(yàn)工作者技術(shù)水平，進(jìn)一步保證臨床血液檢測(cè)質(zhì)量。

綜上所述，使用核酸檢測(cè)方式檢驗(yàn)血液病毒效果確切明顯，有效提高檢測(cè)準(zhǔn)確率、血液制品安全性，篩選血液病毒效果良好，減少漏檢率，適用于臨床檢驗(yàn)血液病毒。