馬傳染性貧血瓊擴(kuò)試驗(yàn)中瓊脂配比濃度及溫度因素對(duì)瓊脂板制作的影響

趙怡雯

馬傳染性貧血病，簡(jiǎn)稱馬傳貧，二類傳染病，由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒亞科中的馬傳染性貧血病病毒引起的馬、騾、驢傳染病。1974年在委內(nèi)瑞拉召開(kāi)的國(guó)際馬傳貧座談會(huì)上決定， 將瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)作為國(guó)際通用診斷方法。瓊擴(kuò)試驗(yàn)的成功的關(guān)鍵因素是瓊脂板及瓊脂孔的成功制作，因?yàn)樵诃傊宓闹谱骷按蚩走^(guò)程中很容易形成微小的裂隙，這樣容易導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生導(dǎo)致誤判，嚴(yán)重可直接導(dǎo)致試驗(yàn)失敗。國(guó)標(biāo)中瓊脂板是按照1%的瓊脂濃度進(jìn)行制作，對(duì)瓊脂板的制作及打孔過(guò)程中的溫度并未作出規(guī)定。所以本次實(shí)驗(yàn)將瓊脂進(jìn)行不同濃度配比，并在不同溫度下進(jìn)行瓊脂板制作及打孔比較，尋找瓊脂板制作及打孔的最佳條件。

1 材料

pH為7.2的0.02摩爾/升的磷酸鹽緩沖液（PBS）、瓊脂、平皿。

2 主要儀器

水浴鍋、天平。

3 方法

本次實(shí)驗(yàn)將瓊脂和緩沖液按照不同濃度配制并在12℃和20℃兩個(gè)溫度下分別進(jìn)行（見(jiàn)表1和表2），進(jìn)行熱水浴加熱混勻。將15～18毫升的瓊脂液倒入水平桌上的平皿中，厚度約2.5毫米，冷凝后加蓋倒置。按照7孔型對(duì)瓊脂進(jìn)行打孔，將切下的瓊脂取出，并注意不要使瓊脂膜與平皿面離動(dòng)。

4 結(jié)果分析

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)操作發(fā)現(xiàn)，在12℃、1%瓊脂濃度和在20℃、1.15%瓊脂濃度條件下即平皿1和平皿9，制備瓊脂板打孔步驟中挑出切下瓊脂塊的難易度最為接近，也最易成功，不易碎裂。這與潘蕙文等進(jìn)行的瓊脂凝膠強(qiáng)度和瓊脂溶液黏度試驗(yàn)結(jié)果也相符合，同時(shí)這兩份瓊脂板經(jīng)過(guò)瓊擴(kuò)試驗(yàn)驗(yàn)證，取得了滿意的結(jié)果。通過(guò)此次實(shí)驗(yàn)，對(duì)國(guó)標(biāo)中未盡之處作了補(bǔ)充，同時(shí)也有助于提高試驗(yàn)的成功度與準(zhǔn)確度。建議在試驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)溫度環(huán)境的不同靈活調(diào)整瓊脂濃度。