馬傳染性貧血瓊擴試驗中瓊脂配比濃度及溫度因素對瓊脂板制作的影響

趙怡雯

馬傳染性貧血病，簡稱馬傳貧，二類傳染病，由反轉錄病毒科慢病毒亞科中的馬傳染性貧血病病毒引起的馬、騾、驢傳染病。1974年在委內瑞拉召開的國際馬傳貧座談會上決定， 將瓊脂擴散試驗作為國際通用診斷方法。瓊擴試驗的成功的關鍵因素是瓊脂板及瓊脂孔的成功制作，因為在瓊脂板的制作及打孔過程中很容易形成微小的裂隙，這樣容易導致假陽性的產生導致誤判，嚴重可直接導致試驗失敗。國標中瓊脂板是按照1%的瓊脂濃度進行制作，對瓊脂板的制作及打孔過程中的溫度并未作出規定。所以本次實驗將瓊脂進行不同濃度配比，并在不同溫度下進行瓊脂板制作及打孔比較，尋找瓊脂板制作及打孔的最佳條件。

1 材料

pH為7.2的0.02摩爾/升的磷酸鹽緩沖液（PBS）、瓊脂、平皿。

2 主要儀器

水浴鍋、天平。

3 方法

本次實驗將瓊脂和緩沖液按照不同濃度配制并在12℃和20℃兩個溫度下分別進行（見表1和表2），進行熱水浴加熱混勻。將15～18毫升的瓊脂液倒入水平桌上的平皿中，厚度約2.5毫米，冷凝后加蓋倒置。按照7孔型對瓊脂進行打孔，將切下的瓊脂取出，并注意不要使瓊脂膜與平皿面離動。

4 結果分析

經過實驗操作發現，在12℃、1%瓊脂濃度和在20℃、1.15%瓊脂濃度條件下即平皿1和平皿9，制備瓊脂板打孔步驟中挑出切下瓊脂塊的難易度最為接近，也最易成功，不易碎裂。這與潘蕙文等進行的瓊脂凝膠強度和瓊脂溶液黏度試驗結果也相符合，同時這兩份瓊脂板經過瓊擴試驗驗證，取得了滿意的結果。通過此次實驗，對國標中未盡之處作了補充，同時也有助于提高試驗的成功度與準確度。建議在試驗過程中，根據溫度環境的不同靈活調整瓊脂濃度。