3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片的評價

林 杰，鄭 晶，柯 璐，徐 珊，陳 彬，張溫玲，曾維楊

(福州海關技術中心//福建省檢驗檢疫技術研究重點實驗室，福建 福州 350003)

菌落總數是用來判定食品被細菌污染的程度及衛生質量，它反映食品在生產過程中是否符合衛生要求，以便對被檢樣品作出適當的衛生學評價。菌落總數的多少在一定程度上標志著食品衛生質量的優劣，因此菌落總數在食品原料、加工過程以及成品的微生物檢驗中作為衛生指標菌需要進行監測[1-3]。由于商品化測試片方法具有簡便、易于識別菌落、可以節約大量培養基配制和操作時間，因此近年來得到廣泛應用，相關產品也有不少[4-7]。3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片與國家標準GB 4789.2—2016比較，培養時間從48 h縮短到24 h，能更快出具結果，以便于更快地判定食品的安全性。為了更加科學規范的使用測試片，根據SN/T 3256—2012《食品微生物檢驗方法確認技術規范》和SN/T 2775—2011《商品化食品檢測試劑盒評價方法》的要求，對3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片進行評價試驗，評估其在食品中菌落總數檢測的準確性和適用性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菌株：弗氏檸檬酸桿菌 ATCC8090、大腸桿菌ATCC8739、金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778、奇異變形桿菌 ATCC43071，均購自上海漢尼生物技術有限公司。

試劑：平板計數瓊脂培養基， 3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片，營養肉湯，生理鹽水。

1.2 儀器與設備

KD-TBC-300M電子天平，福建科迪技術有限公司；Stomacher3500拍擊式均質器，英國SEWARD；恒溫培養箱，德國BINDER。

1.3 方法

1.3.1標準菌株及菌懸液的制備

將標準菌株弗氏檸檬酸桿菌ATCC8090、大腸埃希氏菌ATCC8739、金黃色葡萄球菌ATCC6538、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778、奇異變形桿菌 ATCC43071分別復活后，混合接種于營養肉湯中， 37℃混合培養 18～24 h備用。

1.3.22種方法對比線性和準確度

根據SN/T 3256—2012《食品微生物檢驗方法確認技術規范》和SN/T 2775—2011《商品化食品檢測試劑盒評價方法》的要求，選擇5類15種樣品進行試驗。其中選擇8種自然污染樣品進行試驗，另外選擇7種樣品進行人工污染，將1.3.1混合培養液以適當的比例稀釋后，按高、中、低3個接種水平添加到樣品中混勻制備成測試樣品，2個水平之間差一個數量級。每種樣品同時按照3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片方法和GB 4789.2—2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》進行檢測，自然污染樣品結果見表1，人工污染樣品結果見表2。

續表1

續表1

表2 7種人工污染樣品兩種方法測試結果

續表2

1.3.3測試片耐變性

耐變性是指對同一樣品用一個分析方法，在各種正常檢測條件下進行分析，保證該分析方法的可行性。耐變性評價由以下步驟組成：確定可能影響檢測結果的因素，對每一種因素稍作改變，采用合適的方法進行耐變性檢驗。對于菌落總數檢測而言，培養溫度和培養時間是2個主要影響因素，因此選用2個污染水平純牛奶樣品對培養溫度和培養時間兩個變量進行耐變性試驗，結果見表5。

1.3.4測試片批間變異

為了驗證測試片的穩定性，取3個不同批號測試片對2個污染水平奶粉樣品進行批間變異試驗，結果見表6。

1.3.5實驗室間協同試驗

選用牛奶樣品，添加弗氏檸檬酸桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、奇異變形桿菌等 5種菌混合培養物，制備成高、中、低3個接種水平的凍干樣品，發送8家實驗室進行協同試驗。每一接種水平樣品同時用測試片方法和參考方法進行測試，每一接種水平樣品做5個平行，檢測結果見表7和表8。

2 結果和分析

2.1 線性和準確度

微生物學檢測數據通常不是正態分布的，為了獲得更加對稱的分布，所以將計數結果轉化成對數形式，比較測試片方法與參考方法的一致性。

對每種食品2種方法的測試結果作回歸曲線圖，得出線性方程和相關系數，以考察測試片方法與參考方法的相關性。用t檢驗比較2種方法的差異性，結果見表3。用標準偏差和相對標準偏差考察方法的重復性，結果見表4 。

表3 線性方程、相關系數和t值

表4 重復性分析結果

續表4

從表3可見，5類15種食品相關系數均大于0.97，t值均小于t0.05(15)=2.131，說明3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片方法和參考方法GB 4789.2—2016無顯著性差異。從表4可見5類15種食品測試片法的標準偏差在0.009～0.093，相對標準偏差在0.25%～5.21%；參考方法的標準偏差在0.008～0.100，相對標準偏差在0.30%～5.67%。兩種方法的標準偏差和相對標準偏差無顯著差異，可以說明3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片方法準確度較高。

2.2 測試片耐變性

耐變性試驗及分析結果見表5。

表5 耐變性試驗及分析結果

經驗證，培養溫度選擇35℃和37℃，培養時間選擇22 h和26 h對檢測結果的標準偏差s與在重復性條件下得到的標準偏差s無顯著差異，表明測試片對培養溫度36±1℃和培養時間24±2 h的耐變性范圍不影響檢測結果。

2.3 測試片批間變異

批間變異試驗及分析結果見表6。

表6 批間變異試驗及分析結果

三個不同批號測試片測試結果的標準偏差s與在重復性條件下得到的標準偏差s沒有明顯差別，說明不同批號產品無顯著差異。

2.4 實驗室間協同試驗

協同實驗室內重復性分析結果見表7和表8。

表7 協同實驗室內重復性分析結果

表8 協同實驗室間重復性和再現性結果

經柯克倫檢驗剔除離群值后統計協同實驗室間重復性和再現性[8]，8家實驗室對高、中、低3個接種水平樣品的5個平行測試，結果2個方法的重復性值r和再現性值R比較接近，說明2種測試方法無顯著差異。

3 結論

通過5大類15種食品2種檢測方法的比對試驗，重復性結果和統計t檢驗結果，以及8家實驗室協同試驗結果重復性和再現性分析，均說明3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片和國家標準GB 4789.2—2016在食品檢測上無顯著性差異。耐變性結果表明，測試片在檢測的培養溫度和培養時間范圍內對檢測結果沒有影響；批間變異結果表明不同批號測試片的檢測結果無顯著差異，說明測試片穩定性良好。綜上所述， 3M PetrifilmTM快速菌落總數測試片檢測結果準確，產品性能穩定，能滿足食品菌落總數的檢測要求。