血管性癡呆病人血清可溶性凋亡相關(guān)因子及其配體、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子水平變化

劉 娟，崔 佳

血管性癡呆(vascular dementia， VD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是指由于缺血性腦卒中、出血性腦卒中和長期慢性腦供血不足等導(dǎo)致的嚴重認知功能障礙綜合征，臨床表現(xiàn)為認知功能減退、社會功能下降[1]。已有研究證實，腦出血所致的神經(jīng)損傷涉及細胞凋亡過程[2]。也有研究報道，創(chuàng)傷性腦損傷病人血清可溶性凋亡相關(guān)因子(sFas)及其配體(sFasL)顯著升高[3]，可見sFas、sFasL與腦損傷關(guān)系密切，但其與血管性癡呆的關(guān)系國內(nèi)外報道較少。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)是神經(jīng)系統(tǒng)生長因子家族的一個重要成員，對神經(jīng)細胞缺血性損傷具有保護作用，在腦血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[4]。目前，國內(nèi)外對于血清BDNF水平與血管性癡呆的關(guān)系研究仍存在爭議。本研究比較血管性癡呆病人與健康體檢者血清sFas、sFasL、BDNF水平，分析sFas、sFasL、BDNF水平與認知損害、腦缺血程度的關(guān)系，旨在探討sFas、sFasL、BDNF在血管性癡呆發(fā)生發(fā)展中的作用，以期為該病的診治提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 一般資料 本研究采用回顧性分析方法進行研究，選取2017年1月—2019年6月河北省懷來縣醫(yī)院收治的血管性癡呆病人92例為試驗組，男49例，女43例；年齡63～82(67.21±5.83)歲；受教育年限(7.34±3.41)年；體質(zhì)指數(shù)(BMI)為(22.69±4.33)kg/m2。另選取同期體檢健康志愿者84名設(shè)為對照組，其中男43名，女41名；年齡58～81(68.07±5.86)歲；受教育年限(7.50±3.53)年；BMI為(23.04±3.85)kg/m2。兩組研究對象性別、年齡、受教育年限、BMI等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，組間具有可比性。本研究經(jīng)河北省懷來縣醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，所有病人或其家屬均對本研究相關(guān)事項知情，承諾可配合完成相關(guān)診治、檢查和量表測試。

1.1.2 納入標準 ①經(jīng)臨床癥狀、神經(jīng)系統(tǒng)局灶體征及影像學(xué)檢查確診為血管性癡呆，診斷參照美國國立神經(jīng)疾病與卒中研究所和瑞士神經(jīng)科學(xué)研究國際協(xié)會(National Institute of Neurological Disorders and Stroke-Association Internationale pourla Rechercheet l′Enseignementen Neurosciences， NINDS-AIREN)中的相關(guān)標準[5]；②簡易精神狀態(tài)量表(Mini-Mental State Examination，MMSE)[6]評分≤26分；③Hachinski缺血指數(shù)量表(Hachinski Inchemic Score，HIS)[7]評分≥7分。

1.1.3 排除標準 ①其他腦部疾病所致的記憶和認知缺損，如顱內(nèi)感染、腦積水等；②阿爾茨海默病；③合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病、造血系統(tǒng)疾病及嚴重心、肺、腎功能異常；④具有精神性疾病及嚴重的失語、感覺運動損害等因素影響相關(guān)量表測試；⑤有乙醇或藥物依賴性。

1.2 方法

1.2.1 血清sFas、sFasL、BDNF水平檢測 所有研究對象均于20：00后禁食，次日清晨抽取空腹靜脈血5 mL，置于促凝管中，離心(1 000 r/min)后留取上層清液，置于EP管中，存于-70 ℃冰箱中待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定兩組研究對象血清sFas、sFasL、BDNF水平，sFas、sFasL ELISA檢測試劑盒購自美國BIOSOURCE公司，BDNF ELISA檢測試劑盒購自美國R&D System公司。具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 癡呆嚴重程度評定 所有研究對象均于采集血液標本當天，由研究人員采取統(tǒng)一指導(dǎo)語指導(dǎo)兩組研究對象完成MMSE評分和HIS評分測試。①MMSE評分包括定向力(10分)、記憶力(3分)、注意力和計算力(5分)、回憶能力(3分)、語言能力(9分)等5項內(nèi)容，總分范圍0～30分，總分<27分評定為認知功能障礙，分數(shù)越低認知功能損害越嚴重。依據(jù)MMSE評分評定癡呆嚴重程度，以0～9分為重度癡呆，10～20分為中度癡呆，21～26分為輕度癡呆。②HIS評分包括病史、癥狀、體征和輔助檢查結(jié)果等4部分共13個項目，本研究采用Hachinski法計分，滿分為18分，總分≥7分為血管性癡呆，分數(shù)越高表示腦缺血越明顯。

1.3 觀察指標 觀察各組血清sFas、sFasL、BDNF水平；依據(jù)MMSE評分將試驗組分為重度組、中度組和輕度組，比較3亞組間血清sFas、sFasL、BDNF水平；分析試驗組病人血清sFas、sFasL、BDNF水平與MMSE評分、HIS評分的相關(guān)性。

1.4 質(zhì)量控制 ①制定明確的納入標準、排除標準，并嚴格按照標準納入研究對象；②所有研究對象血清sFas、sFasL、BDNF水平均由河北省懷來縣醫(yī)院檢驗中心同一經(jīng)驗豐富的醫(yī)生進行檢測，確保數(shù)據(jù)的準確性；③所有研究對象MMSE評分、HIS評分測試均在接受過統(tǒng)一嚴格培訓(xùn)研究人員指導(dǎo)下完成；④資料與數(shù)據(jù)核對，以確保采集信息和資料的完整性、真實性；⑤采用雙軌錄入法錄入數(shù)據(jù)資料，錄入后進行核對、補漏、校正，以確保數(shù)據(jù)的可靠性和真實性。

2 結(jié) 果

2.1 試驗組和對照組血清sFas、sFasL、BDNF水平比較 試驗組血清sFas、sFasL水平均高于對照組，血清BDNF水平低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。詳見表1。

表1 試驗組和對照組血清sFas、sFasL、BDNF水平比較 (±s) 單位：μg/L

2.2 試驗組不同亞組間血清sFas、sFasL、BDNF水平比較 依據(jù)MMSE評分將試驗組分為重度組(23例)、中度組(38例)和輕度組(31例)，3組血清sFas、sFasL水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，其中血清sFas水平以重度組最低，其次為中度組，最高為輕度組，血清sFasL水平以重度組最高，其次為中度組，最低為輕度組；3組血清BDNF水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 試驗組不同亞組間血清sFas、sFasL、 BDNF水平比較(±s) 單位：μg/L

2.3 Spearman相關(guān)性分析 試驗組血清sFas水平與MMSE評分呈正相關(guān)(P<0.05)，與HIS評分呈負相關(guān)(P<0.001)；血清sFasL水平與MMSE評分呈負相關(guān)，與HIS評分呈正相關(guān)(P<0.001)；血清BDNF與MMSE評分、HIS評分均無相關(guān)性(P>0.05)。詳見表3。

表3 Spearman相關(guān)性分析

3 討 論

近年來，隨著人口老齡化、飲食結(jié)構(gòu)和生活習慣的改變，腦血管疾病的發(fā)病率呈逐年升高趨勢，血管性癡呆發(fā)病率也隨之升高，已成為危害老年人身心健康的常見病[7]。血管性癡呆的診斷主要借助于病史、癥狀、體征及影像學(xué)檢查等綜合措施，尚缺乏直接診斷指標和方法。因此，尋找特異性好、敏感度高的診斷指標以及早期診斷血管性癡呆，給予準確治療，對于延緩及逆轉(zhuǎn)病情具有十分重要的意義。

Fas/FasL系統(tǒng)包括Fas和FasL，是介導(dǎo)細胞凋亡發(fā)生的死亡受體信號途徑中最重要的一對膜蛋白分子，sFas、sFasL分別是Fas、FasL的可溶性形式，sFas可與FasL結(jié)合抑制凋亡的發(fā)生，sFasL則可與Fas結(jié)合誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生，故血清sFas、sFasL水平可反映機體神經(jīng)細胞凋亡狀態(tài)[8]。本研究結(jié)果顯示，血管性癡呆病人血清sFas、sFasL水平均高于健康體檢者，與國內(nèi)外研究結(jié)果[9-10]相符，表明由Fas蛋白介導(dǎo)的神經(jīng)細胞凋亡參與了血管性癡呆的發(fā)生過程。腦組織缺血缺氧后產(chǎn)生多種細胞因子，激活Fas/FasL系統(tǒng)，細胞表面Fas、FasL表達上調(diào)，從而誘導(dǎo)神經(jīng)細胞凋亡的發(fā)生，導(dǎo)致認知功能改變[11]。此外，本研究顯示，隨著病情嚴重程度的增加，血管性癡呆病人血清sFas遞減，血清sFasL水平遞增。進一步分析血清sFas、sFasL水平與MMSE評分、HIS評分的相關(guān)性，結(jié)果顯示血管性癡呆病人血清sFas水平與MMSE評分呈正相關(guān)，與HIS評分呈負相關(guān)；而血清sFasL水平與MMSE評分呈負相關(guān)，與HIS評分呈正相關(guān)，表明血管性癡呆病人血清sFas、sFasL水平與血管性癡呆認知功能障礙、腦缺血程度相關(guān)。分析其原因可能與在疾病發(fā)展過程中，sFas(抑制凋亡發(fā)生)作為保護性因子表達量逐漸減少，對神經(jīng)細胞凋亡的保護作用減弱，而sFasL為凋亡促進因子，有加速癡呆進程的作用有關(guān)。

BDNF可與酪氨酸激酶受體Trk B相結(jié)合，通過抗氧化、抑制細胞凋亡、自噬等各種機制來保護神經(jīng)元存活和促進神經(jīng)元損傷后修復(fù)、再生，進而發(fā)揮其對神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用；還可通過調(diào)節(jié)海馬突觸可塑性，從而在改善學(xué)習和記憶方面發(fā)揮重要的作用[12-13]。本研究結(jié)果顯示，血管性癡呆病人血清BDNF水平低于健康體檢者，提示BDNF表達下調(diào)，使得BDNF對缺血腦組織的神經(jīng)保護作用減弱，加速了腦血管病理變化，形成認知功能障礙可能是血管性癡呆發(fā)病的病理機制之一。然而，進一步分析結(jié)果顯示血清BDNF水平與MMSE評分、HIS評分均無相關(guān)性，這與亞拉蓋等[14]研究報道的血管性癡呆病人血清BDNF水平與癡呆嚴重程度密切相關(guān)的結(jié)果不一致，分析其原因可能與本研究納入病例數(shù)較少、受試人群來源及檢測方法等不同有關(guān)。

綜上所述，血管性癡呆病人血清sFas、sFasL水平升高，血清BDNF水平下降，其中血清sFas、sFasL水平與認知功能障礙、腦缺血程度相關(guān)，具體機制有待開展大樣本、前瞻性對照研究進一步探討。