CD24、IL-6和hs-CRP對新生兒急性肺損傷的診斷及預后預測價值*

王 軍，孫 紅

華中科技大學同濟醫學院附屬武漢兒童醫院檢驗科，湖北武漢 430016

新生兒急性肺損傷(ALI)是新生兒期的常見病，為炎癥細胞、促炎因子等通過“瀑布式”級聯反應導致的全身炎癥反應綜合征[1-2]。ALI加重時稱為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，此時機體可表現為多器官功能障礙，威脅患兒生命[3]。然而，由于ALI的具體發病機制尚未明確，臨床對其尚無特效的治療方法，多采用消除潛在病因和對癥支持治療[4-5]。目前，國內對新生兒ALI的診斷主要依據2017年發布的蒙特勒診斷標準[6-7]，但該標準主要依據臨床表現及相關檢查進行診斷，如發病緩急、機體氧合狀態、肺水腫狀態及胸部X線片表現等，這往往需要醫生擁有豐富的臨床經驗才能做出準確判斷。因缺乏可靠的診斷標志物，目前ALI臨床診斷的準確性較低，常導致患兒錯過最佳診療時機，使治愈率降低，病死率增加，給患兒家庭帶來沉重的經濟負擔。根據ALI/ARDS疾病病理發展過程，ALI為ARDS的初始階段，但并不是所有ALI患兒都會發展為ARDS，因此早期診斷ALI并采取有效措施對阻止疾病向ARDS發展，降低患兒病死率具有重要意義。近年來，雖然感染相關指標超敏C反應蛋白(hs-CRP)和白細胞介素-6(IL-6)等對感染性疾病的診斷價值已經得到廣泛認可[8]，但其特異度仍然有限。因此，新的靶向性較好的標志物有待進一步被發掘，而CD24作為損傷相關模式分子(DAMP)的負反饋受體，在機體發生炎性反應時表達上調，通過抑制機體的免疫反應達到保護宿主的作用[9-10]，可作為膿毒癥等感染性疾病早期診斷的重要指標[11]。基于此，本研究探討了CD24、IL-6和hs-CRP對新生兒ALI的早期診斷及預后評估價值，以期為臨床診治工作提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1—12月本院新生兒科收治的ALI患兒152例為研究組，其中男99例，女53例，入院日齡7.36(2.13，18.47)d。根據蒙特勒診斷標準中引起新生兒ALI的誘因不同，將所有患兒分為間接誘發組(誘因為缺氧窒息、膿毒癥等)128例和直接誘發組(誘因為胎糞、羊水、乳汁吸入等)24例。另選取同期進行體檢的健康新生兒30例作為對照組，其中男19例，女11例，入院日齡7.01(2.38，17.82)d。研究組與對照組入院日齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，倫理審批號：2020R074-E01。

1.2納入及排除標準 納入標準：研究組所有患兒均符合ALI診斷標準[6]，年齡≤30 d，起病急；氧合指數[氧分壓(PaO2)/吸入氧濃度百分比(FiO2)]≤200 mm Hg；胸部X線片顯示雙肺均有斑片狀陰影；肺動脈嵌頓壓≤18 mm Hg或無左心房壓力增高的臨床證據；如氧合指數≤300 mm Hg且滿足上述其他標準也可診斷ALI。排除標準：(1)死亡或放棄治療的患兒；(2)合并有心、肝、腎等器官功能損傷；(3)合并先天畸形；(4)合并先天性遺傳代謝病或染色體疾病。

1.3方法 研究組采集患兒急性發作入院時(治療前)及疾病恢復出院時(治療后)的靜脈血2 mL，同時采集對照組新生兒體檢當日靜脈血2 mL。離心取上層血清，采用免疫透射比濁法(西門子BNⅡ特種蛋白分析儀，德國)檢測血清hs-CRP水平。取下層細胞，按1∶1比例加入淋巴細胞分離液，混勻，3 000 r/min離心20 min，用吸管吸取中間灰白色淋巴細胞層，3 000 r/min離心5 min，棄上清，獲得單個核細胞，加入1 mL Trizol試劑裂解細胞提取總RNA，將總RNA提取液于-80 ℃冰箱凍存。采用反轉錄試劑盒反轉錄合成cDNA，CD24、IL-6和內參β-actin引物由武漢擎科生物科技有限公司合成，引物序列見表1。PCR反應條件為：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40個循環；72 ℃ 5 min；4 ℃保存。CD24、IL-6的相對水平采用2-ΔΔCt法計算。

表1 CD24、IL-6和β-actin引物序列

2 結 果

2.1直接誘發組、間接誘發組與對照組臨床資料比較 直接誘發組和間接誘發組宮內窘迫、產前感染發生率高于對照組，1 min Apgar評分、氧合指數及剩余堿低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 直接誘發組、間接誘發組與對照組臨床資料比較

組別n臍帶異常[n(%)]氣管插管[n(%)]Apgar評分(x±s,分)1min5min血氣分析指標氧合指數(x±s,mmHg)pH(x±s)剩余堿[M(P25,P75),mmol/L]直接誘發組244(16.67)3(12.50)6±38±1226±1037.3±0.1-5.3(-8.2,-1.7)間接誘發組12815(11.72)23(17.97)5±28±1205±1267.3±0.1-6.1(-8.9,-1.5)對照組303(10.00)3(10.00)8±18±1374±1327.3±0.1-2.1(-5.4,-1.7)F/χ2/H1.1811.9363.2280.2108.8730.1878.291P0.2190.0980.0090.9070.0010.9250.026

組別nALT(x±s,U/L)AST(x±s,U/L)BUN(x±s,mmol/L)Cr(x±s,μmol/L)CK-MB(x±s,U/L)直接誘發組2412.01±4.5927.04±5.762.00±0.4822.26±4.8313.34±6.66間接誘發組12810.99±4.7629.32±5.161.92±0.3924.61±3.5513.10±4.20對照組3012.80±4.9425.15±4.152.29±0.7323.45±4.2012.98±6.91F/χ2/H0.4170.8720.9020.6460.276P0.8230.4250.3360.7840.877

2.2治療前研究組與對照組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較 與對照組比較，治療前研究組CD24、IL-6及hs-CRP水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

2.3直接誘發組和間接誘發組治療前后CD24、IL-6及hs-CRP水平比較 治療前間接誘發組CD24、IL-6水平高于直接誘發組，hs-CRP水平低于直接誘發組，差異有統計學意義(P<0.05)。治療后直接誘發組、間接誘發組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。治療后直接誘發組、間接誘發組CD24、IL-6及hs-CRP水平均低于同組治療前，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 直接誘發組和間接誘發組治療前后CD24、IL-6及hs-CRP水平比較

2.4CD24、IL-6和hs-CRP對ALI的診斷及預后預測價值 治療前CD24診斷間接誘發性ALI的曲線下面積(AUC)為0.988 5，靈敏度為95.31%，特異度為96.67%，高于IL-6及hs-CRP；治療前CD24診斷直接誘發性ALI的AUC為0.983 3，高于IL-6及hs-CRP。治療后IL-6預測間接誘發性ALI預后的AUC為0.727 2，高于CD24和hs-CRP；治療后IL-6預測直接誘發性ALI預后的AUC為0.651 4，高于CD24和hs-CRP。見表4、5和圖2。

注：A為治療前研究組與對照組CD24水平比較；B為治療前研究組與對照組IL-6水平比較；C為治療前研究組與對照組hs-CRP水平比較；*P<0.05。圖1 治療前研究組與對照組CD24、IL-6及hs-CRP水平比較

表4 治療前CD24、IL-6和hs-CRP對ALI的診斷價值

表5 治療后CD24、IL-6和hs-CRP對ALI的預后預測價值

注：A為治療前CD24、IL-6和hs-CRP診斷間接誘發性ALI的ROC曲線；B為治療后CD24、IL-6和hs-CRP預測間接誘發性ALI預后的ROC曲線；C為治療前CD24、IL-6和hs-CRP診斷直接誘發性ALI的ROC曲線；D為治療后CD24、IL-6和hs-CRP預測直接誘發性ALI預后的ROC曲線。圖2 采用CD24、IL-6和hs-CRP對ALI進行診斷及預后預測的ROC曲線

3 討 論

ALI是由外源性和(或)內源性因素所致肺毛細血管內皮細胞和肺泡上皮細胞損傷，造成彌漫性肺間質及肺泡水腫，從而導致急性低氧性呼吸功能不全或呼吸衰竭[12]。由于新生兒機體功能尚未發育完全，而ALI發病急、病情變化快且病死率高，嚴重威脅著新生兒的生命安全。研究顯示，ALI在兒童中的發病率為(2.2～6.0)/100 000.0，但在重癥監護室住院的患兒中ALI發病率為(7～42)/1 000，ALI患兒的住院病死率為20%～80%，合并膿毒癥時病死率高達90%，若同時并發4種以上器官功能障礙則病死率為100%[13]。因此，尋找新生兒ALI的早期診斷標志物，進行早期治療，避免其發展成為ARDS等嚴重疾病具有重要意義。

ALI的發病原因較為復雜，確切的發病機制尚未完全闡明，但研究表明ALI患兒表現為機體代償性抗炎能力降低或代謝紊亂，出現全身炎癥反應綜合征[14]。因此，ALI并不是一種單純的肺部疾病，而是多種炎癥細胞及其釋放的炎癥因子所介導的一種肺部綜合性炎癥疾病[15]。CD24為一種高度糖基化的磷脂酰肌醇錨定蛋白，主要表達于粒細胞、淋巴細胞和單核細胞等多種細胞表面，可通過負反饋調節抑制炎癥因子的過度活化，維持自身穩態[16]。研究顯示，當機體發生炎性反應時，CD24水平明顯升高，并通過CD24/Siglec10通路抑制核因子-κB的激活，從而阻斷高遷移率族蛋白1(HMGB1)的促炎作用，抑制由HMGB1/TOLL樣受體4(TLR4)介導的炎癥因子的釋放，發揮組織修復功能，利于炎癥的轉歸[17-18]。近年來研究表明，CD24可以作為膿毒癥、腫瘤等疾病的早期預測標志物[11,19]。本研究結果顯示，治療前ALI患兒CD24水平高于健康新生兒，且治療前間接誘發性ALI 患兒CD24水平高于直接誘發性ALI患兒，這可能是由于間接誘發性ALI大多是由膿毒癥導致，炎性反應較為強烈，而CD24作為DAMP的負反饋受體，可以抑制炎癥因子過度活化造成的機體損傷。

IL-6為單核-巨噬細胞所產生的細胞因子，當機體感染或發生組織損傷時其通過激活B細胞前體產生抗體，從而清除感染因子并修復組織損傷，在宿主防御系統中發揮重要作用，但持續過量的IL-6產生會引起炎癥性疾病[20]。本研究發現，治療前ALI患兒IL-6水平高于健康新生兒，治療后間接與直接誘發性ALI患兒的IL-6水平均明顯下降。hs-CRP為機體受到炎癥刺激時由肝細胞合成并分泌的一種非特異性急性時相反應蛋白，其水平在感染發生時迅速升高，隨著疾病好轉而逐漸恢復正常[21]。本研究結果顯示，治療前ALI患兒hs-CRP水平高于健康新生兒，且間接誘發性ALI患兒hs-CRP水平低于直接誘發性ALI患兒,這可能與新生兒hs-CRP水平主要反映機體低程度的炎性反應有關[22]。

本研究通過ROC曲線分析了CD24、IL-6和hs-CRP對ALI的診斷及預后評估價值，結果顯示，CD24對直接與間接誘發性ALI均具有較高的診斷價值，AUC分別為0.983 3、0.988 5，高于IL-6和hs-CRP;CD24、IL-6和hs-CRP對ALI具有一定的預后評估價值，其中IL-6預測間接誘發性ALI預后的AUC為0.727 2，預測直接誘發性ALI預后的AUC為0.651 4，高于CD24和hs-CRP，提示IL-6對ALI患兒預后監測具有重要意義。

綜上所述，ALI患兒存在CD24、IL-6和hs-CRP水平升高，且經治療后上述3項指標水平有所下降。CD24是診斷新生兒ALI的良好指標，IL-6對治療后ALI患兒的預后有一定預測價值。