PD-L1在非小細胞肺癌中的表達及相關(guān)性

劉志良 黃先明 張小芳 羅慶豐 韓春賓 吳錦濤 周祥武

我國肺癌發(fā)病率和病死率常年居于惡性腫瘤首位，非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌中最常見的類型，占原發(fā)性肺癌的85%[1]，絕大多數(shù)患者確診時已處于中晚期，失去最佳手術(shù)機會[2-3]。對于晚期的NSCLC患者，傳統(tǒng)的治療手段并沒有顯著改善晚期NSCLC患者的總生存期，平均生存期12.9個月，5年生存率則低于15%[4-5]。

近年來，免疫治療在癌癥研究中取得了突飛猛進的發(fā)展，其中以程序性死亡受體-1(programmed cell death-1，PD-1)及其配體程序性死亡配體-1(programmed cell death-ligand 1，PD-L1)為靶點的免疫治療藥物在一些惡性腫瘤的治療中顯示出了良好的療效和可行性。PD-1/PD-L1通過免疫逃逸、抑制免疫應答、逃避殺傷清除機制，增強了腫瘤微環(huán)境對機體正常免疫的抵抗作用[6]。本研究分析NSCLC組織中PD-L1的陽性表達及其與患者的臨床病理參數(shù)的關(guān)系，旨在討論PD-L1在不同參數(shù)特點的非小細胞肺癌中的表達情況。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇2018年1月至2019年5月南昌大學附屬腫瘤醫(yī)院胸外科收治的非小細胞肺癌患者80例，均經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。80例患者中，男性58例，女性22例；年齡>60歲有40例，平均為(67.3±4.5)歲；年齡≤60歲有40例，平均為(51.2±8.1)歲。腫瘤直徑平均≥3 cm有28例，<3 cm有52例。NSCLC病理類型：鱗癌38例，腺癌26例，混合型16例；左側(cè)和右側(cè)肺癌各40例；高中分化有26例，低分化有54例。有70例患者術(shù)后發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，43例患者存在吸煙史。

1.2 方法

1.2.1 試劑、設(shè)備 PD-L1一抗(克隆號：E1L3N)購自cell signaling technology公司，二抗購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，采用 EnVision 兩步法；使用設(shè)備有：石蠟切片機(型號：Leica RM2235)，顯微鏡(型號：OLYMPUS BX51)等。

1.2.2 免疫組化染色方法 NSCLC石蠟組織3 μm切片、脫蠟、水化、阻斷； 高溫高壓抗原修復；PBS緩沖液沖洗3×3 min；滴加PD-L1一抗(克隆號：E1L3N)，4 ℃ 孵育過夜；PBS緩沖液沖洗3×3 min，滴加二抗(生物素化山羊抗小鼠IgG)，室溫孵育20 min；PBS緩沖液沖洗3×3 min，DAB顯色，鏡下觀察，陽性為棕褐色或棕黃色顆粒狀、定位于細胞膜或(和)細胞質(zhì)；蘇木精復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定

細胞質(zhì)或(和)細胞膜出現(xiàn)棕褐色或棕黃色。PD-L1染色陽性率以20%為界限，超過此界限為高表達。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS17.0軟件對計數(shù)資料進行卡方檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1在NSCLC組織中的免疫組化染色結(jié)果

PD-L1的生物學相關(guān)定位在癌細胞的質(zhì)膜上分別出現(xiàn)高表達和低表達。80例NSCLC患者病理切片中，PD-L1高表達44例，低表達36例。

2.2 PD-L1表達與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系

PD-L1表達在性別、年齡、分化情況、腫瘤部位及腫瘤直徑上的差異性不存在統(tǒng)計學意義，但在病理類型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無吸煙史方面的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 PD-L1表達與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系/例

3 討論

肺癌現(xiàn)如今已成為一種常見的惡性腫瘤，根據(jù)2016年Chen等[7]大數(shù)據(jù)表明，肺癌的發(fā)病率在男性惡性腫瘤中占首位，在女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌。NSCLC是肺癌中最常見的一種，主要包括腺癌、鱗癌、大細胞癌。NSCLC 和SCLC相比，具有擴散慢，轉(zhuǎn)移晚的特點[8]。PD-1/PD-L1結(jié)合階段發(fā)揮負性調(diào)控作用，促進腫瘤細胞逃逸，從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展[9]。由于PD-L1靶點的抑制劑在臨床應用中除了有效性以外也具有一定的不良反應[10]，所以目前PD-L1靶點在NSCLC治療中仍然存在分歧。近年來，國內(nèi)外研究顯示，PD-L1在多種腫瘤的免疫耐受和免疫逃逸發(fā)生機制中起著重要的作用，在肝癌、胃癌、乳腺癌[11-13]等中均呈現(xiàn)高表達狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中PD-L1高表達數(shù)量更多，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移患者中PD-L1低表達數(shù)量更多；有吸煙史患者中PD-L1高表達數(shù)量明顯高于無吸煙史患者，由此可以推測出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和吸煙史可能是導致PD-L1表達情況存在差異的兩個重要的相關(guān)因素。通過統(tǒng)計數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn)腺癌患者中出現(xiàn)PD-L1高表達的數(shù)量更多，鱗癌則是PD-L1低表達占的數(shù)量更多，我們發(fā)現(xiàn)不同的病理類型同樣會影響PD-L1表達的情況，這將為NSCLC治療提供一些新的思路和數(shù)據(jù)。

綜上所述，非小細胞肺癌(NSCLCL)患者組織中會出現(xiàn)PD-L1高表達，高表達的PD-L1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、吸煙史及腺癌類型數(shù)量顯著相關(guān)，這些結(jié)果意味著PD-L1高表達會引起較差的生存預后，同時推測對于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有吸煙史、病理類型為腺癌的患者使用PD-L1抑制劑，可能會對NSCLC治療效果產(chǎn)生重要的影響和突破，當然這需要多中心，大樣本研究進一步隨訪和深度驗證。