飼料及飼料添加劑中沙門氏菌的分離鑒定

蘇 華，羅兆飛，洪體玉，麻曉莉，李 娟，吳良萍

（南寧海關技術中心 530021）

沙門氏菌屬(salmonella)是一種寄生于人類和動物腸道內的細菌，可以引起禽傷寒、豬霍亂、鼠傷寒沙門氏菌病、豬副傷寒、馬流產沙門氏菌等疾病，是一種需氧或兼性厭氧菌。適合的生長溫度是35℃～37℃，不耐熱，55℃的溫度下1h即可被殺死。在外界的生活力很強，在糞便、土壤、食品中可以存活2個月，更久的能存活2年之久[1]。沙門氏菌血清型眾多，有2500種以上，在中國發現的有500多種。許多血清型的沙門氏菌均能產生毒素尤其是腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌，能致多種動物的沙門氏菌病[2]。沙門氏菌是飼料中的主要危害菌群，國內已有多次報道，因沙門氏菌污染的飼料而導致畜禽大量死亡，給養殖業造成巨大的經濟損失。人的大多數沙門氏菌感染直接或間接地與動物性食品有關， 而動物的沙門氏菌感染和帶菌與所食用的動物性飼料中的沙門氏菌污染有直接的關系[3-4]。沙門氏菌的傳播途徑很廣，食品在加工、運輸、出售、烹飪、儲存過程中被其感染的可能性很大，尤其是動物飼料中沙門氏菌的感染情況對全球的肉類加工廠都是很大的隱患[1]。因此， 檢測飼料中的沙門氏菌，控制沙門氏菌的安全性非常重要。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品：飼料，來自飼料生產企業。

1.1.2 標準菌株：沙門氏菌（AB94007），購自中國典型菌種保藏中心，作為檢測過程中的陽性對照菌株。

1.1.3 試劑：緩沖蛋白胨水（BPW），氯化鎂孔雀綠（RV）增菌液，亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液，亞硫酸鉍分離培養基，三糖鐵瓊脂，賴氨酸脫羧酶，硫化氫，靛基質，pH 7.2尿素，氰化鉀（KCN）生化管，均購自北京陸橋，科瑪嘉沙門氏菌顯色培養基，寧波天潤沙門氏菌診斷血清（60種）。

1.1.4儀器：德國美默爾特HCP246恒溫培養箱。

1.2 方法

1.2.1 前增菌：無菌稱取25g(mL)飼料樣品，加入裝有225mL BPW的均質袋中，用均質器拍打2～3 min，36℃培養18h。

1.2.2 選擇性增菌：各取1 mL搖勻后的培養物，分別轉接于10mL的RV和SC試管中，RV增菌液于42℃培養18～24 h，SC增菌液于36℃培養18～24h。

1.2.3 分離培養：用接種環從RV和SC試管中各挑取一環，分別劃線于BS和科瑪嘉沙門氏菌顯色培養基上，BS培養基于36 ℃培養44～48h，科瑪嘉沙門氏菌顯色培養基則36℃培養18～24h 。沙門氏菌在BS上的典型菌落為黑色，帶金屬光澤，周圍培養基呈黑色或棕色，在科瑪嘉沙門氏菌顯色培養基上則為紫色。

1.2.4 生化試驗：挑取2個以上典型菌落或可疑菌落接種三糖鐵瓊脂，賴氨酸脫羧酶試驗培養基及在營養瓊脂平板上分純。

1.2.5 鑒定：沙門氏菌的生化試驗判定標準按照GB/T 13091-2018 6.4《飼料中沙門氏菌檢測方法》來判定[5]。

1.2.6 血清分型，參照4789.4-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》[6]，對分離株進行血清分型。

2 實驗結果與分析

從48份飼料及其添加劑樣品中分離得到可疑菌株5株，經生化試驗鑒定，以上5株可疑菌株皆為沙門氏菌，5株可疑菌株的生化試驗結果如表1所示，其中菜籽粕（18份），分離出2株，陽性率11.1%；大豆粉（12份），分離出1株，陽性率8.3%；大豆片（12份），分離出1株，陽性率8.3%；魚粉（6份），分離出1株，陽性率16.7%。并對以上5株沙門氏菌進行血清分型，得到納西沙門氏菌（S.Tennessee）、山夫登堡沙門氏菌（S.Senftenberg）、姆班達卡沙門氏菌（S.Mbandaka）、布倫登盧普沙門氏菌（S.Braenderup）、布雷登尼沙門氏菌（S.Bredeney）各1株。血清分型結果見表2。

表1 飼料及其添加劑中5株可疑分離株生化試驗結果

表2 飼料及其添加劑中沙門氏菌血清分型結果

3 討論

本次分離得到沙門氏菌5 株，主要分布在C1群，大豆、菜籽粕、魚粉是常見的飼料及飼料添加劑，營養豐富，適于微生物繁殖，污染沙門氏菌的概率也較高，要嚴格把控飼料的安全性。首先飼料生產企業要以身作則，立足生命健康安全第一，而不是只圖眼前利益，要有嚴格的衛生控制程序，對生產環境的清潔度把控，對員工進行衛生管理、健康檢查和樣品檢驗方面的培訓，做到從源頭上切斷沙門氏菌的污染，其次監督管理部門要加強衛生監督及各種飼料運輸、加工等方面的衛生措施，以及在動物產品運輸、加工、經營等方面的衛生監督，要嚴格控制污染途徑， 切斷肉品運輸、加工、經營環節的再次污染，對不合格樣品生產企業及經營企業加大處罰力度。