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不同產地衢枳殼藥材質量的熵權TOPSIS法綜合評價

2021-07-20 10:38:25馮敬騫李姜言宋劍鋒王思為毛碧增
中國藥房 2021年11期

馮敬騫 李姜言 宋劍鋒 王思為 毛碧增

摘 要 目的:綜合評價不同產地衢枳殼藥材的質量。方法:采用高效液相色譜法(HPLC)測定衢枳殼藥材中圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷的含量;采用紫外-可見分光光度法測定衢枳殼藥材中總黃酮的含量;采用2020年版《中國藥典》(四部)附錄2204 揮發油測定法甲法測定衢枳殼藥材中揮發油的含量。以14批不同產地衢枳殼藥材中上述6個黃酮類成分、總黃酮及揮發油的含量為指標,采用熵權TOPSIS法綜合評價衢枳殼藥材的整體質量。結果:14批不同產地衢枳殼藥材中圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、總黃酮的含量分別為2.530 4~2.915 1、4.273 7~5.313 8、34.715 8~36.695 8、3.061 1~4.456 0、4.560 9~5.773 5、45.153 6~47.019 7、145.480 1~157.022 5 mg/g,揮發油的含量為0.034~0.040 mL/g。熵權TOPSIS法分析結果顯示,上述各指標權重分別為0.109 0、0.140 7、0.148 3、0.125 5、0.067 0、0.139 0、0.124 2、0.146 3;14批不同產地衢枳殼藥材的平均相對貼近度分別為0.809 0、0.711 9、0.807 0、0.681 5、0.447 0、0.363 1、0.439 8、0.349 6、0.449 6、0.376 5、0.486 6、0.458 7、0.282 0、0.167 0。質量排名前4位的衢枳殼藥材分別為常山縣大寶山、常山縣太公山、常山縣鷺山和常山縣小翠山產樣品。結論:采用熵權TOPSIS法可對衢枳殼藥材質量進行綜合評價;常山縣所產衢枳殼藥材質量較優。

關鍵詞 衢枳殼;含量測定;熵權TOPSIS法;質量評價

ABSTRACT? ?OBJECTIVE: To evaluate the quality of Citrus Paradisi from different producing areas comprehensively. METHODS: The contents of eriocitrin, narirutin, naringin, naringenin, hesperidin and neohesperidin in Citrus Paradisi were determined by HPLC method; the contents of total flavonoids were determined by UV spectrophotometry; the contents of volatile oil were determined by volatile oil measurement method A stated in appendix 2204 of Chinese Pharmacopoeia (part Ⅳ). Using the contents of above 6 kinds of flavonoids componets, total flavonoids and volatile oil in 14 batches of Citrus Paradisi from different habitats as indexes, the overall quality of Citrus Paradisi was evaluated by using entropy weight TOPSIS method. RESULTS: The contents of eriocitrin, narirutin, naringin, naringenin, hesperidin, neohesperidin, total flavonoids in 14 batches of Citrus Paradisi from different producing areas were 2.530 4-2.915 1, 4.273 7-5.313 8, 34.715 8-36.695 8, 3.061 1-4.456 0, 4.560 9-5.773 5, 45.153 6-47.019 7, 145.480 1-157.022 5 mg/g, and that of volatile oil was 0.034-0.040 mL/g, respectively. The entropy weight TOPSIS analysis showed that the weights of them were respectively 0.109 0, 0.140 7, 0.148 3, 0.125 5, 0.067 0, 0.139 0, 0.124 2, 0.146 3. The relative closeness degree of 14 batches of samples from different areas were respectively 0.809 0, 0.711 9, 0.807 0, 0.681 5, 0.447 0, 0.363 1, 0.439 8, 0.349 6, 0.449 6, 0.376 5, 0.486 6, 0.458 7, 0.282 0, 0.167 0. Top 4 samples in the quality evaluation were collected from Dabaoshan, Taigongshan, Lushan and Xiaocuishan of Changshan county. CONCLUSIONS: The entropy weight TOPSIS method can be used for the comprehensive quality evaluation of Citrus Paradisi. The quality of Citrus Paradisi from Changshan county is better than that of samples from other areas.

KEY WORDS? ?Citrus Paradisi; Content determination; Entropy weight TOPSIS method; Quality evaluation

衢枳殼主產于浙江省衢州市,為蕓香科植物常山胡柚Citrus changshan-huyou Y.B.Chang的未成熟果實,一般于每年6~7月采收(此時果實直徑約5~7 cm)[1],收載于《浙江省中藥炮制規范》(2015年版)[2]。衢枳殼具有理氣寬中、行滯消脹等功效,臨床上常將其用于治療胸脅氣滯、脹滿疼痛、食積不化、痰飲內停、臟器下垂等[2]。現代藥理研究還發現,衢枳殼具有抗氧化、抗菌、抗病毒、降血脂和降血糖等藥理作用[3-7]。

衢枳殼藥材含有多種揮發油和黃酮類成分[8-10],但在《浙江省中藥炮制規范》(2015年版)中僅對柚皮苷和新橙皮苷2個黃酮類成分進行含量測定[2],較為片面。因此,有必要建立一種對衢枳殼藥材中總黃酮類和揮發油類成分進行整體質量評價的方法。

TOPSIS法(Technique for order preference by similarity to an ideal solution)是一種多指標的決策分析方法,可根據有限個評價對象與理想化目標的接近程度進行排序,并客觀地對各指標進行權重賦值,能有效避免人為主觀因素對結果的影響,目前已被廣泛用于多種中藥材的質量評價中[11-14]。

本課題組在前期建立了同時測定衢枳殼藥材中12個成分(圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮內酯、木犀草素、橙皮內酯、川陳皮素、桔皮素、橙皮油內酯)含量的方法[15],且在實際應用中取得了較好的效果,極大地保障了衢枳殼藥材的內控質量。但該方法所測得衢枳殼藥材中圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷等6個黃酮類成分的含量較高,其余6個成分的含量較低(低于前6個成分的1/10)。筆者前期采用熵權TOPSIS法進行預評價后發現,圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷這6個黃酮類成分對衢枳殼整體質量控制的貢獻度較大,評價權重也較大。另外,因總黃酮和揮發油是衢枳殼藥材中最主要的成分,可更好地從整體上反映該藥材的質量,有助于該藥材質量的綜合評價。基于此,筆者采用高效液相色譜(HPLC)法同時測定衢枳殼藥材中上述6個黃酮類成分的含量,再結合藥材中總黃酮和揮發油的含量,采用熵權TOPSIS法建立綜合質量評價模型,以期為完善衢枳殼藥材的質量控制方法提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

1260型HPLC儀及配備的Agilent系列柱溫箱、Agilent 可變波長紫外掃描檢測器、Aglient 系列泵系統購自安捷倫科技(中國)有限公司;UV-2450 型紫外-可見分光光度計購自島津企業管理(中國)有限公司;PA2251型十萬分之一分析天平購自賽多利斯(上海)貿易有限公司;KQ5200E型超聲波清洗機購自昆山市超聲儀器有限公司;HYJD-T型實驗室超純水機購自杭州永潔達凈化科技有限公司;KA-1000C型臺式離心機購自上海安亭科學儀器廠。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用衢枳殼藥材分別于2020年6月中下旬采自14個不同產地的常山胡柚標準化種植基地,經衢州市食品藥品檢驗研究院宋劍鋒主任中藥師鑒定為常山胡柚C. changshan-huyou Y.B.Chang的未成熟果實;鑒定后,將其對半切開,并于50 ℃條件下烘干,封口包裝,備用。

其他藥品與試劑有:圣草次苷對照品(上海安譜實驗科技股份有限公司,批號CDGB-89194,純度98.56%),蕓香柚皮苷對照品、柚皮素對照品(四川省維克奇生物科技有限公司,批號分別為131208、130908,純度均不低于98%),柚皮苷對照品、橙皮苷對照品、新橙皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號分別為110722-201312、110721-201316、111857- 201102,純度均不低于98%);其余試劑為實驗室常用規格,水為超純水。衢枳殼藥材的樣品信息見表1。

2 方法與結果

2.1 衢枳殼藥材中6個黃酮類成分的含量測定

參考文獻[15-16]方法進行含量測定。

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Agilent Extend C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈溶液(B),梯度洗脫(0~2 min,90%A;2~5 min,90%A→82%A;5~10 min,82%A;10~25 min,82%A→80%A;25~45 min,80%A→50%A;45~70 min,50%A→0%A);采用二極管陣列檢測器(DAD)進行檢測,檢測波長為330 nm;柱溫為35 ℃;流速為1.0 mL/min;進樣量為10 μL。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別取圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷的對照品適量,以70%甲醇溶解制成上述成分質量濃度分別為16.53、45.04、354.14、41.14、22.88、349.58 μg/mL的混合對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取衢枳殼樣品粉末(編號為S2,過三號篩)0.2 g,置于100 mL具塞錐形瓶中,加入70%甲醇50 mL,密塞,稱定質量,超聲(功率200 W,頻率40 kHz)提取30 min;放冷至室溫,再次稱定質量,并以70%甲醇補足減失的質量,搖勻;以0.45 μm的微孔濾膜濾過,取續濾液,即得。

2.1.4 系統適用性試驗 取“2.1.2”“2.1.3”項下混合對照品溶液和供試品溶液適量,按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析,記錄色譜圖。結果,圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷各色譜峰之間的分離度均大于1.5,理論板數以柚皮苷峰計大于4 000,對稱因子為0.95~1.05。混合對照品和供試品溶液的高效液相色譜圖見圖1。

2.1.5 線性關系考察 分別取“2.1.2”項下混合對照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、10.0 mL,置于10 mL量瓶中,加70%甲醇,定容,搖勻,制成系列質量濃度的線性工作溶液,然后按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析,記錄色譜圖。以各成分質量濃度為橫坐標(x,μg/mL)、峰面積為縱坐標(y)進行線性回歸。結果,圣草次苷的回歸方程為y=3.771x+0.380(r=0.999 7),線性范圍為1.65~16.53 μg/mL;蕓香柚皮苷的回歸方程為y=9.011x+0.238(r=0.999 8),線性范圍為4.50~45.04 μg/mL;柚皮苷的回歸方程為y=29.321x+0.152(r=0.999 8),線性范圍為35.41~354.14 μg/mL;柚皮素的回歸方程為y=8.101x+0.665(r=0.999 7),線性范圍為4.11~41.14 μg/mL;橙皮苷的回歸方程為y=5.411x+0.677(r=0.999 7),線性范圍為2.29~22.88 μg/mL;新橙皮苷的回歸方程為y=27.251x+0.334(r=0.999 9),線性范圍為34.96~349.58? ?μg/mL。這表明上述6個黃酮類成分在各自檢測質量濃度范圍內的線性關系均良好。

2.1.6 檢測限與定量限考察 取“2.1.2”項下混合對照品溶液適量,加入70%甲醇逐級稀釋后,按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積。當信噪比為3 ∶ 1時,測得檢測限;當信噪比為10 ∶ 1時,測得定量限,詳見表2。

2.1.7 精密度試驗 精密吸取“2.1.2”項下混合對照品溶液,按“2.1.1”項下色譜條件連續進樣6次,連續測定3 天,記錄峰面積。結果,圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷的日內RSD分別為0.23%、0.27%、0.31%、0.22%、0.24%、0.29%(n=6),日間RSD分別為0.25%、0.21%、0.33%、0.26%、0.28%、0.20%(n=3),表明儀器的精密度良好。

2.1.8 重復性試驗 精密稱取衢枳殼藥材粉末(編號為S8,過三號篩)約0.2 g,平行取樣6份,按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積并按外標法計算含量。結果,圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷含量的RSD分別為2.35%、2.13%、2.08%、2.17%、2.25%、2.11%(n=6),表明該方法的重復性良好。

2.1.9 穩定性試驗 精密稱取衢枳殼藥材粉末(編號為S8,過三號篩)適量,按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,于室溫下放置0、2、4、8、12、18、24 h后,按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積。結果,圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷的峰面積的RSD分別為1.32%、1.75%、1.29%、1.83%、1.42%、1.34%(n=6),表明供試品溶液在室溫下放置24 h 內穩定性良好。

2.1.10 加樣回收率試驗 取已知含量的衢枳殼藥材粉末(編號為S8,過三號篩)約0.2 g,共9份,精密稱定,分別按各成分已知含量的50%、100%、150%加入相應對照品,按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定,記錄峰面積,并計算各待測成分的加樣回收率,結果見表3。

2.1.11 含量測定 分別取14批不同產地衢枳殼藥材粉末(過三號篩)各約0.2 g,精密稱定,按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液,再按“2.1.1”項下色譜條件進樣分析,記錄峰面積并按外標法計算各成分含量。每批樣品平行操作3次,結果見表4。

2.2 衢枳殼藥材中總黃酮的含量測定

參照參考文獻[16-17]方法進行測定。精密稱取柚皮苷對照品3.04 mg,置于50 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得質量濃度為60.8 μg/mL的對照品溶液。分別精密移取上述對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL至10 mL量瓶中,加甲醇定容,搖勻,即得線性考察工作液。以甲醇為空白對照,采用紫外-可見分光光度法測定各線性考察工作液在283 nm波長處的吸光度。以柚皮苷質量濃度為橫坐標(x,mg/g)、吸光度為縱坐標(y)繪制標準曲線,得回歸方程為y=0.031 5x-0.566 9(r=0.999 9),表明柚皮苷的檢測質量濃度線性范圍為3.04~30.40 μg/mL。

分別取14批不同產地衢枳殼藥材粉末(過三號篩)0.2 g,精密稱定,置于100 mL具塞錐形瓶中;精密加入甲醇50 mL,密塞,稱定質量,超聲(功率200 W,頻率40 kHz)提取30 min;放冷至室溫,密塞,再次稱定質量,以甲醇補足減失的質量;搖勻,濾過,取續濾液1 mL置于50 mL量瓶中,加甲醇定容,搖勻,即得14批樣品溶液。取上述樣品溶液1 mL,采用紫外-可見分光光度法測定其在283 nm波長處的吸光度,然后代入上述回歸方程中計算總黃酮的含量。每批樣品平行操作3次,結果見表4。

2.3 衢枳殼藥材中揮發油的含量測定

參照參考文獻[16,18]方法進行測定。稱取14批不同產地衢枳殼藥材粉末(過三號篩)各約100 g,精密稱定,置于揮發油提取器中,按2020年版《中國藥典》(四部)附錄2204 揮發油測定法甲法進行測定[19],每批樣品平行操作3次,結果見表4。

2.4 不同產地衢枳殼藥材質量的熵權TOPSIS 法分析

參考文獻[20-21]方法,以14批不同產地衢枳殼藥材中6個黃酮類成分、總黃酮和揮發油的含量測定結果為指標,對其進行標準化處理,確定評價權重和正負理想解,得到最優方案;并計算各批衢枳殼樣品到最優方案的距離及其貼近度,通過排序確定其質量優劣,從而進行質量綜合評價。

2.4.1 衢枳殼藥材中各指標數據標準化處理 以表4中不同產地衢枳殼藥材中6個黃酮類成分、總黃酮和揮發油的含量測定結果建立初始決策矩陣。按公式(1)對含量測定結果的原始試驗數據進行歸一化處理,并按公式(2)建立標準化決策矩陣Y,具體公式如下所示。

上述公式中,yij為經過無量綱化處理的第i個樣本的第j個指標,xij為第i個樣本的第j個指標的原始值,Yij為標準化決策矩陣中第i個樣本的第j個指標,n表示樣本的n個決策指標(1,2,…,n)(下同)。

2.4.2 衢枳殼藥材中各指標評價權重的確定 熵權TOPSIS法可基于評價指標的信息熵大小與差異離散程度,通過計算指標權重,來評價指標的重要性,可以有效地排除主觀因素的影響,使評價結果更加客觀[20]。基于此,本研究通過計算各指標的信息熵值和信息效用值,確定信息權重值,即按公式(3)計算6個黃酮類成分、總黃酮和揮發油成分共8個指標的信息熵值(e),按公式(4)計算信息效用值(d),按公式(5)計算信息權重值(w),具體公式如下,結果見表5。

上述公式中ej為第j個指標的信息熵值,dj為第j個指標的信息效用值,wj為第j個指標的信息權重,m表示決策矩陣有m個樣本(1,2,…,m)(下同)。

2.4.3 衢枳殼藥材中各指標加權決策矩陣的建立和正負理想解的確定 按公式(6)將“2.4.1”項下Yij與“2.4.2”項下各指標的權重wj相乘,即得加權決策矩陣C,具體公式如下所示。

C=(wj×Yij)m×n…(6)

另外,設正理想解C*的第j個屬性值為c*

j,負理想解c0的第j個屬性值為c0

j,得出正負理想解分別如下,結果見表6。

[max cij,j為效益型屬性

min cij,j為成本型屬性,j=1,2,…,n][i][i] [正理想解c*

j=]

[min cij,j為效益型屬性

max cij,j為成本型屬性,j=1,2,…,n][i][i] [負理想解c0

j=]

2.4.4 14批衢枳殼藥材樣品到正負理想解的距離和相對貼近度計算 分別按公式(7)、(8)計算14批衢枳殼藥材樣品(每批樣品平行3份)到正理想解和負理想解的距離s*

i和s0

i;按公式(9)計算相對貼近度f *

i,并計算各批次3分樣品的平均相對貼近度(f *

i),然后根據f *

i進行排序,具體公式如下所示,結果見表7。

s*

i=[√] [∑][j=1][n][(cij-c*

j)2],i=1,2,…,m…(7)

s0

i=[√] [∑][j=1][n][(cij-c0

j)2],i=1,2,…,m…(8)

f *

i=s0

i/(s0

i+s*

i),i=1,2,…,m…(9)

由表7可知,衢枳殼藥材質量排名前4位的分別為常山縣大寶山、常山縣太公山、常山縣鷺山和常山縣小翠山產樣品,表明常山縣產衢枳殼藥材質量優于其他產地藥材,也驗證了常山產的衢枳殼藥材具有一定的道地優勢[22]。

3 討論

本課題組在預實驗中,結合前期研究中所測得的衢枳殼藥材中12個成分的含量[18],采用熵權法得到了各成分的權重值,并進行預評價,結果發現圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷等6個黃酮類成分的權重在0.1以上,而水合橙皮內酯、木犀草素、橙皮內酯、川陳皮素、桔皮素、橙皮油內酯的權重均小于0.05。因此,本實驗選擇含量高、權重大的6個黃酮類成分作為衢枳殼藥材的整體質量評價的指標。另因總黃酮和揮發油是衢枳殼中較為重要的成分[8-10],故也將這兩個成分作為衢枳殼藥材的整體質量評價指標,使得本評價方法更全面、更綜合。

經熵權TOPSIS法分析后發現,衢枳殼藥材中圣草次苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷等6個黃酮類、總黃酮含量和揮發油含量的權重分別為0.109 0、0.140 7、0.148 3、0.125 5、0.067 0、0.139 0、0.124 2、0.146 3,且柚皮苷、揮發油、蕓香柚皮苷和新橙皮苷含量的權重排前4位,由此可知,《浙江省中藥炮制規范》(2015年版)將柚皮苷作為衢枳殼藥材的一個定量指標具有一定實際意義[2]。衢枳殼藥材中揮發油含量的權重高達0.146 3,由此推測其對該藥材的質量控制也具有重要的意義;另外,總黃酮是衢枳殼藥材發揮抗氧化、抗菌、抗病毒、降血脂和降血糖等藥理作用的主要活性成分[3-7],故筆者建議可將揮發油和總黃酮的含量也作為衢枳殼藥材質量評價的指標。

據相關文獻報道,當貼近度越接近1時,表示該評價對象越接近最優水平;當其越接近0時,表示該評價對象越接近最劣水平[11,23]。本研究結果顯示,14批不同產地衢枳殼藥材的平均相對貼近度分別為0.809 0、0.711 9、0.807 0、0.681 5、0.447 0、0.363 1、0.439 8、0.349 6、0.449 6、0.376 5、0.486 6、0.458 7、0.282 0、0.167 0,且常山縣4個產地所產的衢枳殼藥材(編號S1~S4)的平均相對貼近度均大于0.6,而其他產地的平均相對貼近度均小于0.5。由此推測,常山縣所產的衢枳殼藥材質量優于其他產地藥材。

綜上所述,本研究采用熵權TOPSIS法可對衢枳殼藥材的整體質量進行評價,且常山縣所產衢枳殼藥材質量較優。后續本課題組將對常山產衢枳殼藥材的道地性進行探索,以期找出不同產地衢枳殼藥材中化學成分和藥效方面的差異。

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(收稿日期:2021-02-28 修回日期:2021-04-19)

(編輯:唐曉蓮)

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