不同糖化血紅蛋白臨床檢驗方法檢測結果的相關性和一致性評價

朱秀霞 （第一作者），潘曉芳 （第一作者），吳靜標，張潤鋒，黃宇哲，鐘乘坊 （通信作者）

1廣東省醫療器械質量監督檢驗所 （廣東廣州 510663）；2江西省贛州市贛縣區人民醫院（江西贛州 341100）

糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin，HbA1c）是典型的糖基化蛋白，能夠反映受試者測定前120 d的平均血糖水平，可用于糖尿病早期診斷和病后血糖監測［1－3］。與血糖相比，HbA1c具有生物學變異性小、不易受血糖波動影響、無需空腹或特定時間取血、分析前穩定性高等特點。WHO糖尿病學會和許多國家的糖尿病學會均將HbA1c作為診斷糖尿病的首選指標［3］。

《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監督管理總局令第5號）第十七條規定，根據產品風險程度的高低，將體外診斷試劑依次分為第三類、第二類、第一類產品。HbA1c檢測試劑（盒）屬于第二類產品中的第4小類，按二類產品進行管理［4］。目前，臨床實驗室普遍采用的HbA1c檢驗方法主要有基于HbA1c與非HbA1c所帶電荷不同的離子交換層析法和電泳法，以及基于HbA1c與非HbA1c結構不同的免疫法、親和層析法及酶法［3］。不同檢驗方法所依據的原理各不相同，所測組分亦不同，如離子交換色譜法測定的為HbA1c，親和層析法測定的為總HbA1c，國際臨床化學與醫學實驗室聯盟 （International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）及“美國國家HbA1c標準化計劃（National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）” 均規定以“HbA1c”結果報告［3］。

NGSP將高效液相色譜法作為測定HbA1c的參考方法，其也是測定HbA1c的指定比對方法［5］。ARKRAY Factory，Inc.公司的高效液相色譜系統已被廣泛應用于我國大型醫院中，在國內具有較高的市場占有率，檢測HbA1c的效果較好［6－8］。基于此，本研究以ARKRAY Factory，Inc.檢測系統為對照系統，分析高效液相色譜法、硼酸親和色譜層析法、免疫比濁法與ARKRAY Factory，Inc.檢測系統測定HbA1c結果的相關性及一致性，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

高效液相色譜法（A考核系統）：儀器為全自動糖化血紅蛋白分析儀（廣東優尼德生物科技有限公司，型號：HA－120），試劑均由廣東優尼德生物科技有限公司提供，分別為HbA1c洗脫緩沖液A試劑盒（高效液相色譜法）和HbA1c洗脫緩沖液B試劑盒（高效液相色譜法）、HbA1c溶血劑、HbA1c校準品、HbA1c質控品。

硼酸親和色譜層析法（B考核系統）：儀器為特定蛋白分析儀（廣東優尼德生物科技有限公司，型號：UNT5000），試劑均由廣東優尼德生物科技有限公司提供，分別為HbA1c檢測試劑盒 （硼酸親和色譜層析法）、HbA1c質控品。

免疫比濁法（C考核系統）：儀器為全自動生化分析儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司，型號：邁瑞BS800M），試劑均由廣東優尼德生物科技有限公司提供，分別為HbA1c測定試劑盒（酶法）、HbA1c校準品、HbA1c質控品。

ARKRAY Factory，Inc.檢測系統（D對照系統）：儀器為全自動糖化血紅蛋白分析儀（ARKRAY Factory，Inc.，型號：HA－8180），試劑均由ARKRAY Factory，Inc.提供，分別為洗脫緩沖液ELUENT 80A（高效液相色譜法）和洗脫緩沖液ELUENT 80B（高效液相色譜法）、HbA1c溶血劑、HbA1c校準品、HbA1c質控品。

1.2 樣本和方法

選取118份靜脈全血樣本（來自糖尿病患者和普通血糖測試者）作為檢測樣本，分別采用A、B、C考核系統和D對照系統單次檢測所有樣本，操作均按照對應儀器的說明書開展，檢測前，確保儀器已經校準且室內質控在控，檢測后，分別計算A、B、C考核系統和D對照系統檢測的HbA1c含量。

2 檢驗原理

2.1 高效液相色譜法

依據樣本中各組分蛋白所帶電荷不同，分離HbA1c與其他蛋白組分。不帶正電荷的HbA1c首先被快速洗脫下來，帶正電荷的非糖基化血紅蛋白（non－glycated hemoglobin，HbA0）最后被洗脫下來。不同血紅蛋白組分經比色計檢測得到對應的吸光度值，根據Lambert－Beer定理，便可計算各成分的含量，從而計算HbA1c占總血紅蛋白的百分比。

2.2 硼酸親和色譜層析法

樣本與紅細胞裂解液反應后，紅細胞發生裂解，藍色的硼酸鹽化合物與HbA1c的順式二醇配合物相結合形成藍色HbA1c，其余的血紅蛋白轉變為紅色沉淀，使用分析儀分別檢測藍色（HbA1c）和紅色（血紅蛋白）的顏色強度進行定量分析，從而測定樣本中HbA1c占總血紅蛋白的百分比。

2.3 免疫比濁法

樣本中的HbA1c與膠乳、HbA1c特異性單克隆抗體結合形成膠乳－HbA1c－HbA1c特異性單克隆抗體的復合物，此復合物由于羊抗鼠lgG抗體而形成凝集，凝集量與膠乳表面固相化的HbA1c的量有關，樣本吸光度代入HbA1c校準曲線后，可反推出樣本中HbA1c占總血紅蛋白的百分含量。

3 結果

參照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》、《北京市第二類體外診斷試劑臨床試驗指導原則（2016版）》、EP9－A《Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples》等法規性文件［9－11］，對A、B、C考核系統和D對照系統測定HbA1c的結果進行線性相關性和Bland－Altman分析。

3.1 線性相關性分析

依據《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》［9］，以A與D、B與D、C與D兩兩檢測系統為一組研究對象，用EXCEL 2013作散點圖［11］（見圖1），由圖1可知，R2（A與D為0.9763、B與D為0.9995、C與D為0.9848）均＞0.95，表明A與D、B與D、C與D兩兩檢測系統間的檢測結果均具有良好的線性關系。

圖1 A與D、B與D、C與D兩兩檢測系統間檢測HbA1c結果的散點圖

3.2 Bland－Altam分析

以A與D、B與D、C與D兩兩檢測系統檢測結果比值的均值為橫坐標，比值為縱坐標，用MedCalcv19.0.7醫學統計軟件進行分析和作圖［12］，結果見表1和圖2。A與D、B與D、C與D分別只有0、4.24% （5／118）、1.69% （2／118）的點（均＜5%）在95%一致性界限以外，大多數檢測結果均在d－1.96SD～d＋1.96SD以內。A與D、B與D、C與D 的95% 一致性界限分別為 （0.920，1.084）、（1.030，1.057）、（0.942，1.079），均在LoA的可信區間范圍內，即對于大多數樣本，A與D、B與D、C與D的測量結果相差8.0%～8.1%、3.0% ～5.7%、5.2% ～7.9%，此差異在臨床上均可接受，因此，A與D、B與D、C與D兩兩檢測系統的檢測結果一致性良好，檢測結果可以互換。

表1 Bland－Altam分析數據

圖2 A與D、B與D、C與D檢測系統間HbA1c檢測結果的Bland－Altman圖

4 結論

A與D、B與D、C與D檢測系統的檢測結果具有良好的線性相關性和一致性，A、B、C考核系統均可代替ARKRAY Factory，Inc.分析系統檢測HbA1c，但因不同分析系統采取的檢測原理不同，干擾因素亦不同，臨床上應根據可能存在的干擾因素，選擇合適的分析系統，以獲得準確的檢測結果，為臨床工作提供更好的支持。