不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下副溶血性弧菌的生長(zhǎng)異質(zhì)性

張布克，史 俊，潘迎捷,,3，趙 勇,,3，劉海泉,,3,4,

（1.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；2.上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術(shù)研究中心，上海 201306；3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（上海），上海 201306；4.上海海洋大學(xué)食品熱加工工程技術(shù)研究中心，上海 201306）

在天然的生態(tài)環(huán)境中影響副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）生存的因素有很多，溫度、鹽度、pH值等都是影響Vp生長(zhǎng)的重要環(huán)境因子；除此之外，寡營(yíng)養(yǎng)條件也是影響自然界中Vp生長(zhǎng)的環(huán)境因子。自然環(huán)境下土壤和海洋中含有的營(yíng)養(yǎng)含量都非常低，而且大部分不可被菌株利用，任何一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏都能導(dǎo)致菌株進(jìn)入寡營(yíng)養(yǎng)條件[1]。

自然界中不同Vp菌株處于寡營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)下會(huì)形成不同的生長(zhǎng)特性[2]，有的Vp菌株在長(zhǎng)期寡營(yíng)養(yǎng)條件下呈活的不可培養(yǎng)狀態(tài)[3-4]，有的Vp菌株可以通過(guò)細(xì)胞外部形態(tài)和內(nèi)部生理結(jié)構(gòu)的逐步變化在寡營(yíng)養(yǎng)條件下存活相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間[5-6]。同種屬Vp菌種不同菌株在實(shí)驗(yàn)室中通過(guò)單一培養(yǎng)后，菌株間會(huì)出現(xiàn)的生長(zhǎng)行為、遺傳和生理等方面的差異性，這種表現(xiàn)被稱為微生物的異質(zhì)性[7-8]。而生長(zhǎng)特性方面的差異，稱之為生長(zhǎng)異質(zhì)性[9-10]；除此之外還有毒力、失活以及生物被膜形成異質(zhì)性等[11]。微生物生長(zhǎng)方面異質(zhì)性主要通過(guò)生長(zhǎng)參數(shù)延滯期、最大比生長(zhǎng)速率及最大菌濃度表現(xiàn)。Murphy[12]和Anderson等[13]在研究中提到微生物異質(zhì)性是菌株的特性，不會(huì)隨實(shí)驗(yàn)的次數(shù)而改變。研究Vp菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性能降低菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性對(duì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的影響，從而真實(shí)地反映菌株的差異性。

由于弧菌引發(fā)的疾病具有發(fā)病率高、流行性廣、危害嚴(yán)重等特點(diǎn)，每年給海產(chǎn)品養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失[14-17]；此外，消費(fèi)者攝入了含有致病性Vp的食品后可引起腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、腸胃炎等疾病[18]。國(guó)內(nèi)外目前都有因Vp引起食源性疾病的病例[19-20]。國(guó)內(nèi)外Vp生長(zhǎng)異質(zhì)性主要包括不同海產(chǎn)品，不同溫度、鹽度、pH值條件下的研究[21-24]，而對(duì)于寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)異質(zhì)性預(yù)測(cè)尚待明確。實(shí)驗(yàn)室課題組已經(jīng)做了不同溫度鹽度、耐藥性及食品介質(zhì)條件下Vp生長(zhǎng)異質(zhì)性的比較研究[25]，研究寡營(yíng)養(yǎng)條件下Vp的生長(zhǎng)異質(zhì)性有助于建立更加完善的食品中Vp生長(zhǎng)異質(zhì)性研究網(wǎng)絡(luò)體系。

本研究探討Vp在寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)異質(zhì)性，有助于闡明微生物在自然環(huán)境中的生長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)而幫助進(jìn)行更精準(zhǔn)的食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和更科學(xué)的食源性致病菌疾病防控。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)采用的20 株不同Vp菌株，分別從淡水、海水養(yǎng)殖蝦中分離。其中Vp1、Vp3、Vp6、Vp7、Vp9、Vp11、Vp12、Vp14、Vp16、Vp17、Vp18、Vp19、Vp20分離自淡水養(yǎng)殖蝦，Vp2、Vp4、Vp5、Vp8、Vp10、Vp13、Vp15分離自海水養(yǎng)殖蝦。在制備樣本前，所有菌株保存于25%甘油管中，存放在－80 ℃冰箱內(nèi)。

TCBS培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯（trypticase soy broth，TSB）培養(yǎng)基 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Bioscreen C全自動(dòng)微生物生長(zhǎng)曲線分析儀 芬蘭Oy Growth Curves Ab公司；MLS-3750型高壓滅菌鍋日本三洋電機(jī)生物醫(yī)藥株式會(huì)社；全自動(dòng)臺(tái)式離心機(jī)德國(guó)Eppendorf公司；OptiMair?垂直流超凈工作臺(tái)、Airstream?A2型二級(jí)生物安全柜 Esco China公司；GHP-9270型隔水式恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化與接種液制備

預(yù)實(shí)驗(yàn)得到Vp菌株在低于25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+（3%NaCl，下同）占此的培養(yǎng)基稀釋液中無(wú)明顯生長(zhǎng)活動(dòng)，因此選擇100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占此的培養(yǎng)基稀釋液范圍作為培養(yǎng)菌株的寡營(yíng)養(yǎng)條件，參照Liu Bingxuan等[25]Vp菌株的活化及接種液制備方法，當(dāng)菌株生長(zhǎng)到達(dá)指數(shù)后期（109CFU/mL）時(shí)，再?gòu)拿總€(gè)試管中每次吸取10 μL菌液分別接種至100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占此的培養(yǎng)基稀釋液中，然后用磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)菌濃度（OD600nm值），使其約在0.3～0.6之間，并以此為初始接種液。

1.3.2 不同寡營(yíng)養(yǎng)條件中Vp生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

在全自動(dòng)微生物生長(zhǎng)曲線分析儀配套的100 微孔板中分別加入180 μL寡營(yíng)養(yǎng)條件為100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占此的培養(yǎng)基稀釋液，分別吸取初始接種液20 μL接種至對(duì)應(yīng)梯度的培養(yǎng)液中，并分別加入10 孔 200 μL 100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占此的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照，每株菌4 種生長(zhǎng)條件，3 個(gè)平行，2 個(gè)對(duì)照，3 次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，將已加樣品液和空白對(duì)照的100 微孔板放入全自動(dòng)微生物生長(zhǎng)曲線分析儀樣品槽中，將儀器設(shè)置為每1 h讀取OD600nm值一次，培養(yǎng)溫度設(shè)定為37 ℃，測(cè)定Vp的生長(zhǎng)曲線。

1.3.3 生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)的擬合

1.3.3.1 微生物預(yù)測(cè)一級(jí)模型

參照Liu Bingxuan[25]、Ma Fengli[26]等和姬華[27]分別使用修正Gompertz模型、修正Logistic模型、Baranyi模型得到菌株的延滯期（λ）、最大比生長(zhǎng)速率（μmax）、最大生長(zhǎng)密度（ymax），計(jì)算擬合相關(guān)系數(shù)（R2）、均方根誤差（root mean square error，RMSE）、準(zhǔn)確因子（Af）和偏差因子（Bf）、變異系數(shù)（coefficient of variation，CV），稍作調(diào)整。模型表達(dá)式如下：

修正Gompertz模型：

式中：A為最初的細(xì)菌接種量OD值；C為最大菌種量與初始菌種量OD值之差；μm為最大比增長(zhǎng)速率/h－1；t為時(shí)間/h；λ為延滯期/h。

Baranyi方程：

式中：y（t）為任意時(shí)間菌量（OD值）的對(duì)數(shù)值；y0、ymax為y（t）的初始值和最大值；A（t）為達(dá)到漸近線的最大菌量（OD值）；μmax為最大比生長(zhǎng)速率/h－1；λ為延滯期/h；m、v、q0為模型參數(shù)。

修正Logtistic模型：

式中：y、A和C都與修正的Gompertz方程中的參數(shù)意義相同；B、M為模型參數(shù)。

μmax、λ、CV計(jì)算公式如下：

本研究應(yīng)用Origin 9.1軟件（OriginLab公司）描述Vp的生長(zhǎng)曲線，修正Gompertz模型和修正Logistic模型選用Origin 9.1軟件進(jìn)行擬合，而B(niǎo)aranyi模型采用原英國(guó)食品研究所開(kāi)發(fā)的DMfit軟件對(duì)Vp的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到擬合相關(guān)系數(shù)（R2）。

1.3.3.2 微生物預(yù)測(cè)二級(jí)模型

二級(jí)模型首先用修正Ratkowsky（μmax-N）和Nonlinear Arrhenius（λ-N）模型[28]進(jìn)行擬合，由于擬合系數(shù)過(guò)低或無(wú)法擬合，本實(shí)驗(yàn)主要采用生長(zhǎng)參數(shù)折線圖直觀比較，通過(guò)折線圖對(duì)二級(jí)生長(zhǎng)參數(shù)直觀比較。

1.3.3.3 模型評(píng)價(jià)

相關(guān)系數(shù)R2值在0～1之間，且越靠近1即表明預(yù)測(cè)模型的參考價(jià)值越高。計(jì)算公式如下：

RMSE是說(shuō)明模型預(yù)測(cè)值的離散程度的一種數(shù)值指標(biāo)。計(jì)算公式如下：

準(zhǔn)確因子（Af）和偏差因子（Bf）計(jì)算如下：

Af=1說(shuō)明預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)觀測(cè)值相等，Af值越大表明預(yù)測(cè)模型與觀測(cè)值的平均精準(zhǔn)度偏低；Bf主要用于判斷預(yù)測(cè)模型的偏差度，Bf＝1，說(shuō)明所選用模型的擬合結(jié)果與實(shí)驗(yàn)觀測(cè)值相同，所選用模型的擬合效果較好。式中：obs表示實(shí)驗(yàn)觀測(cè)值；pred表示模型預(yù)測(cè)值；n為觀測(cè)值個(gè)數(shù)[28]。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下20 株Vp的μmax趨勢(shì)

本研究測(cè)得菌株的μmax值用600 nm波長(zhǎng)處OD值變化表示，100%、75%、50%、25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下菌株的μmax值分別在0.215～0.730、0.149～0.460、0.026～0.178、0.031～0.253 h－1之間，其中Vp2在25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值比50%、75%和100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比大，Vp3在50%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值比75%和100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比大，Vp3在75%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值比100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比大，Vp4和Vp6在25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值比50%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比大，結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可以看到，Vp1～Vp20號(hào)菌株在100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下的平均μmax值呈現(xiàn)階梯狀增長(zhǎng)的趨勢(shì)；通過(guò)把100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下20 株不同來(lái)源Vp的μmax值作為參考標(biāo)準(zhǔn)，可以發(fā)現(xiàn)75%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值沒(méi)有顯著遞增趨勢(shì)，50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值不遞增趨勢(shì)顯著。在100%和75%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下，Vp1菌株μmax值最小，Vp20菌株μmax值最大；在50%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下，Vp4菌株μmax值最小，Vp3菌株μmax值最大，Vp1菌株μmax值處于不同來(lái)源20 株Vp菌株μmax平均值中間值偏下，Vp20菌株μmax值處于不同來(lái)源20 株Vp菌株μmax平均值中間值偏下上；在25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下，Vp19菌株μmax值最小，Vp2菌株μmax值最大，Vp1菌株μmax值處于不同來(lái)源20 株Vp菌株μmax平均值中間值偏下，Vp20菌株的μmax值處于不同來(lái)源20 株Vp菌株μmax平均值中間值偏下。

圖1 20 株不同來(lái)源Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的μmaxFig.1 Specific growth rate μmax of 20 Vps from different sources under different oligotrophic conditions

本研究與Liu Bingxuan等[25]同類研究Vp的生長(zhǎng)異質(zhì)性進(jìn)行比較，把100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下20 株不同來(lái)源Vp的μmax值作為參考標(biāo)準(zhǔn)，在Liu Bingxuan等[25]同類研究中選取與本研究相同的Vp菌株進(jìn)行排序，研究菌株同在100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，生長(zhǎng)環(huán)境均為37 ℃、3% NaCl，但兩者的初始菌液接種量OD值不同，本研究為0.353～0.562之間，Liu Bingxuan等[25]同類研究中為0.073～0.217之間。

如圖2所示，本研究平均μmax值在0.215～0.730 h－1之間，Liu Bingxuan等[25]同類研究中平均μmax值在0.019～0.077 h－1之間?？梢园l(fā)現(xiàn)在100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下，Liu Bingxuan等[25]同類研究中μmax值沒(méi)有顯著的遞增趨勢(shì)。在本研究中Vp1菌株的μmax值最小，為0.215 h－1，Vp20菌株μmax值最大，為0.730 h－1；在Liu Bingxuan等[25]同類研究中Vp13菌株的μmax值最小，為0.019 h－1，Vp1菌株的μmax值最大，為0.077 h－1。其中Vp1菌株μmax值最大，為0.077 h－1，處于不同來(lái)源20 株Vp菌株平均μmax值最大處，Vp20菌株μmax值為0.03 h－1，處于不同來(lái)源20 株Vp菌株平均μmax值中間值附近。

圖2 本研究與同類研究Vp的生長(zhǎng)差異比較Fig.2 Comparison between Vp growth observed in the present and previous studies

2.2 不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下20 株Vp的一級(jí)模型擬合優(yōu)度

本研究分別采用修正Gompertz模型、Baranyi模型、Logtistic模型擬合20 株不同來(lái)源Vp分別在100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)，修正Baranyi模型、Logtistic一級(jí)模型擬合相關(guān)系數(shù)R2整體低于0.900，不易選用，修正Gompertz一級(jí)模型對(duì)20 株不同來(lái)源的Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)擬合良好，結(jié)果如表1所示。

20 株不同來(lái)源Vp分別在100%、75%、50%和25%的標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)均可以采用修正Gompertz一級(jí)模型進(jìn)行擬合，且擬合效果良好，修正決定系數(shù)R2值區(qū)間在0.791～0.997之間，只有Vp2、Vp10菌株在25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下的修正決定系數(shù)R2值在0.918以下，分別為0.791、0.830；75%和50%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比時(shí)擬合模型修正決定系數(shù)R2值整體比100%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比擬合模型修正決定系數(shù)R2值更高。

表1 20 株不同來(lái)源Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的模型評(píng)價(jià)參數(shù)Table 1 Model evaluation parameters for 20 strains of Vps from different sources under different oligotrophic conditions

續(xù)表1

在生長(zhǎng)模型擬合優(yōu)度分析中，平均算術(shù)RMSE值靠近0時(shí)，表明模型中數(shù)據(jù)擬合優(yōu)度更高，越大表明模型的預(yù)測(cè)值不貼近真實(shí)值，本實(shí)驗(yàn)RMSE值在0.012 2～0.149 5之間，其中有5 種條件下RMSE值在0.102以上。Af值表示預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值的平均精準(zhǔn)度，Bf值表示預(yù)測(cè)值與觀測(cè)值的平均偏差，兩者越靠近1，表明擬合值與觀測(cè)值相貼近，表明所選模型良好。本實(shí)驗(yàn)Af、Bf值區(qū)間為1±0.070。

2.3 不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下20 株Vp的二級(jí)模型生長(zhǎng)參數(shù)分析

根據(jù)修正Gompertz一級(jí)模型對(duì)20 株不同來(lái)源的Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)擬合，得到20 株不同來(lái)源的Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的延滯期（λ）、最大比生長(zhǎng)速率（μmax）、最大生長(zhǎng)密度（ymax），并計(jì)算CV，取20 株菌株的生長(zhǎng)參數(shù)平均值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 20 株不同來(lái)源Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的動(dòng)力學(xué)生長(zhǎng)參數(shù)Table 2 Kinetic growth parameters of 20 Vps from different sources under different oligotrophic conditions

Liu Bingxuan等[25]同類研究中在100%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下20 株Vp菌株平均μmax值為0.04 h－1，CV值為38.3%。

由圖3可知，Vp菌株平均λ值隨標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比的減少而增大，平均μmax、ymax值隨標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比的減少而降低，而代表菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性的CV值先隨標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比的減少而降低，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比過(guò)低時(shí)Vp菌株的生長(zhǎng)異質(zhì)性增高。

圖3 20 株不同來(lái)源Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下λ、μmax、ymax和CV均值二級(jí)模型Fig.3 Secondary models fitted to describe delay period (λ), maximum specific growth rate (μmax), maximum growth density (ymax) and CV mean value of 20 strains of Vps from different sources under different oligotrophic conditions

2.4 不同來(lái)源對(duì)Vp生長(zhǎng)異質(zhì)性的影響

圖4直觀展示了不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下兩類Vp的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性，淡水與海水Vp顯著性差異通過(guò)對(duì)應(yīng)淡水與海水Vp菌株的平均μmax值統(tǒng)計(jì)。100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下其P值分別為0.176、0.145、0.421及0.229，不具有顯著差異。

圖4 不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下20 株淡水與海水Vp的箱線圖Fig.4 Box plot for significant difference between the growth of Vp strains from prawns and shrimps under different oligotrophic conditions

3 討 論

國(guó)內(nèi)外關(guān)于Vp的預(yù)測(cè)模型主要為一級(jí)和二級(jí)模型，唐曉陽(yáng)等[28]研究了不同致病性和溫度對(duì)Vp μmax的影響，盧曉鳳[29]、Zwietering[30]、楊振泉[31]和田金玲[32]等主要用Gompertz方程擬合菌株的生長(zhǎng)曲線，Ma Fengli等[26]、姬華[27]采用3 種一級(jí)模型擬合菌株的生長(zhǎng)曲線，比較了它們的擬合度。郭丹鳳等[33]研究菌株的延滯期、最大菌濃度等在不同溫度下的異質(zhì)性。此外，還有關(guān)于微生物生長(zhǎng)預(yù)測(cè)的Huang、MMF等一級(jí)模型。關(guān)于Vp二級(jí)預(yù)測(cè)模型，Yoon[34]、Al-Dagal[35]、Miles[36]等研究了Vp的修正Gompertz生長(zhǎng)模型和二級(jí)平方根模型；王璐華等[37]探究了Vp的溫度-鹽度雙因素預(yù)測(cè)模型，二級(jí)模型采用平方根模型進(jìn)行擬合；Nishina等[38]采用二級(jí)響應(yīng)面模型研究了菌株在不同pH值、鹽度和溫度條件下的生長(zhǎng)變化；劉代新等[39]采用Design-Expert軟件研究了VpJ33的較優(yōu)培養(yǎng)條件。選取不同的數(shù)字預(yù)測(cè)[40-44]模型進(jìn)行擬合，可以得到更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

本研究分別采用修正Gompertz模型、Baranyi模型、Logtistic一級(jí)模型擬合20 株不同來(lái)源Vp分別在100%、75%、50%和25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)，修正Baranyi模型、Logtistic一級(jí)模型擬合相關(guān)系數(shù)R2整體低于0.900不易采用，尚未使用Huang、MMF等其他關(guān)于微生物生長(zhǎng)預(yù)測(cè)的一級(jí)模型和菌株隨標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比變化的動(dòng)態(tài)模型。修正Gompertz一級(jí)模型對(duì)20 株不同來(lái)源的Vp在不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)擬合良好，綜合分析修正一級(jí)Gompertz模型的擬合評(píng)價(jià)R2、RMSE、Af和Bf值，得到不同Vp菌株在模型擬合的優(yōu)度上存在一定的差異，這表明預(yù)測(cè)模型適用于一定條件下的菌株生長(zhǎng)預(yù)測(cè)，選用擬合度高的模型使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具準(zhǔn)確性。

二級(jí)模型首先用修正Ratkowsky（μmax-N）和Non-linear Arrhenius（λ-N）模型[28]進(jìn)行擬合，由于擬合系數(shù)過(guò)低或無(wú)法擬合，主要采用生長(zhǎng)參數(shù)折線圖直觀比較。不同寡營(yíng)養(yǎng)條件會(huì)對(duì)菌株λ、μmax、ymax和CV值產(chǎn)生影響，說(shuō)明不同環(huán)境條件下Vp的生長(zhǎng)異質(zhì)性隨著環(huán)境不利程度的增高而加大。另本研究中不同來(lái)源20 株Vp整體μmax值隨標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比的減少而降低，只有Vp2菌株在25%標(biāo)準(zhǔn)TSB+占比條件下μmax值顯著異常，這可能與該營(yíng)養(yǎng)條件下Vp2菌株生長(zhǎng)模型參數(shù)的擬合優(yōu)度低有關(guān)。本研究不同來(lái)源20 株Vp整體μmax值明顯大于Liu Bingxuan等[25]同類研究，說(shuō)明相同營(yíng)養(yǎng)條件下初始菌液接種量不同擬合所得Vp的μmax值也會(huì)不同。

由寡營(yíng)養(yǎng)條件下兩種不同來(lái)源Vp的P值可知，不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下兩類Vp的平均μmax值都表現(xiàn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)非顯著性差異。在天然環(huán)境下的亞熱帶和溫帶沿海地區(qū)的淡水與海水常常屬于寡營(yíng)養(yǎng)條件，Liu Bingxuan等[25]在自然環(huán)境條件下分離自淡水和海水的Vp菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性有顯著差異，食源性致病菌的生長(zhǎng)異質(zhì)性影響因素有外部因素和內(nèi)在因素。外在因素包括pH值、水分活度、溫度、來(lái)源等，這表明預(yù)測(cè)微生物在不同來(lái)源的Vp生長(zhǎng)異質(zhì)性需要綜合考慮影響因素。本實(shí)驗(yàn)得出分離自淡水和海水的Vp菌株在同種營(yíng)養(yǎng)條件下產(chǎn)生了相似的μmax，并且有相對(duì)一致的生長(zhǎng)異質(zhì)性。

4 結(jié) 論

本研究發(fā)現(xiàn)不同寡營(yíng)養(yǎng)條件會(huì)對(duì)Vp菌株的λ、μmax、ymax和生長(zhǎng)異質(zhì)性CV值產(chǎn)生較大影響，不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下Vp菌株在模型擬合的優(yōu)度上存在一定的差異，選擇適合的模型對(duì)分析菌株的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)準(zhǔn)確性至關(guān)重要，不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下不同來(lái)源Vp菌株平均μmax值均無(wú)顯著性差異，補(bǔ)充了李藍(lán)天[1]天然海水條件下Vp菌株的生長(zhǎng)特性，且得到營(yíng)養(yǎng)條件一致時(shí)，初始菌液接種量也會(huì)對(duì)菌株生長(zhǎng)異質(zhì)性產(chǎn)生影響。本研究不足之處為未能找到現(xiàn)有的二級(jí)生長(zhǎng)模型擬合不同寡營(yíng)養(yǎng)條件會(huì)對(duì)Vp菌株的λ、μmax、ymax和生長(zhǎng)異質(zhì)性CV值的非線性關(guān)系，以及不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下Vp菌株的生長(zhǎng)參數(shù)動(dòng)態(tài)模型，今后可通過(guò)寡營(yíng)養(yǎng)和富營(yíng)養(yǎng)條件下Vp菌株大數(shù)據(jù)生長(zhǎng)參數(shù)構(gòu)建不同寡營(yíng)養(yǎng)條件下二級(jí)生長(zhǎng)參數(shù)模型和動(dòng)態(tài)模型，闡明Vp在寡營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)規(guī)律，獲得食源性致病菌生長(zhǎng)異質(zhì)性對(duì)食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和預(yù)測(cè)模型，從而更科學(xué)地進(jìn)行食源性致病菌疾病防控。