余甘子中有效成分與礦質元素含量的相關性研究

楊曉瓊,何 璐*,袁建民,許智萍,孔維喜,雷 虓

(1.云南省農業科學院 熱區生態農業研究所,云南 元謀 651300;2.云南省元謀干熱河谷植物園,云南 元謀 651300)

余甘子為大戟科(Euphorbiaceae)葉下珠屬PhynanthusLinn.植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的成熟果實[1],俗名橄欖子、油甘子、滇橄欖。余甘子源產于緬甸和印度,現在菲律賓、印度尼西亞、中南半島、中國等國家和地區均有分布,在中國的產量較多[2]。余甘子是一種“藥食同源”的植物,具有悠久的藥用歷史,其性涼,味酸、澀、甘,具有清熱涼血、生津止咳、消食健胃等功效[3]。現代研究表明,余甘子具有抗菌消炎[4]、降血糖血脂[5]、保肝[6]、抗糖尿病[7]、提高機體免疫力[8]、美白[9]等生理功效。余甘子中富含鞣質、黃酮、多酚、多糖、三萜、維生素和有機酸等多種活性物質[10-12],其中最具特征的成分是多酚,約占余甘子成分的20%,其中有效多酚的主要成分是沒食子酸[13-16],沒食子酸具有抗氧化、抗癌、降糖、降脂、抗菌、消炎等生物活性[17-18]。

余甘子富含礦質元素。袁建民等[19]利用ICP-OES法測定了干熱河谷區余甘子不同器官中的礦質元素,發現不同器官中各礦質元素含量存在顯著性差異,其中Fe、Zn、Mg、Mn元素含量豐富。蔡英卿等[20]利用火焰原子吸收法測定了余甘子不同器官中的礦質元素含量,發現Fe、Cu、Mn、Zn元素在余甘子不同器官中都有一定的分布。礦質元素在植物的生理活動中發揮著極其重要的作用,例如Mg直接影響植物的光合作用,且是構成葉綠素的元素,同時也是多種酶的活化劑[21]。礦質元素與人體健康息息相關,在體內具有激活酶、運載宏量元素、代謝核酸和參與激素生成等生物學功能[19]。近年來的研究發現,礦質元素不僅會影響植物的生長發育,還會影響其有效成分的累積,從而影響中醫臨床的治療效果[22-23]。余甘子作為一種“藥食同源”的藥材[3],因富含礦質元素和有效活性成分,又具有較好的藥用價值,所以被應用到各種中藥和保健品的研發中。目前,對余甘子化學成分、含量分析、藥理藥效的研究報道較多,但對其礦質元素與有效活性成分之間的相關性研究尚未見報道。因此,明確余甘子中礦質元素與有效活性成分之間的相關性,可為余甘子的質量控制提供參考依據[22]。

本研究利用高效液相色譜法測定了18種余甘子中有效成分沒食子酸的含量,利用ICP-OES(電感耦合等離子體發射光譜)法測定了余甘子中20種礦質元素(Al、B、Fe、Cr、Cu、Ca、Mn、K、P、Na、S、Si、Zn、Se、Mg、Mo、Ni、Cd、Co、Pb)的含量,并對余甘子中主要有效成分沒食子酸含量與礦質元素含量之間的相關性進行了分析,以期為其質量的控制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料概況 供試材料余甘子樣品分別采集于元謀(YM)、元江(YJ)、賓川(BC),詳細信息見表1。采集時間為2019年12月,采集時期為余甘子果實成熟期,均由云南省農業科學院熱區生態農業研究所分析測試中心野外采集。

1.1.2 儀器設備與試劑 Agilent1260高效液相色譜儀,含Agilent ZORBAX Eclipse XRD-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);Milestone Ethos up微波消解儀(意大利邁爾斯通);PQ-9000電感耦合等離子體發射光譜儀(德國耶拿);GZX-9140MBE電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博訊);UPH-IV-20T超純水儀(中國優普);ATX224萬分之一電子分析天平(日本島津);QM3SP行星式球磨機(南京馳順);RAININ移液槍(美國瑞寧);超聲波清洗機(寧波新芝,300 W,40 kHZ);0.45 μm微孔濾膜;粉碎機。

表1 余甘子樣品及產地信息

將實驗用的18批余甘子樣品于60 ℃電熱恒溫鼓風干燥箱中烘至恒重,過60目尼龍篩,混勻,保存備用。乙腈(色譜純)、甲醇(色譜純)、氫氧化鈉(AR)、磷酸(AR)、沒食子酸對照品(純度99.8%)、無水乙醇(AR)、硝酸鋁(AR)、蘆丁標準品(純度99%)、亞硝酸鈉(AR)、30%過氧化氫(GR)、濃硝酸(GR)、超純水，均為市購;氬氣(純度99.999%)、多元素混合標準溶液以及單個元素(Fe、B、Mg、Cr、Al、Mn、Zn、Cd、Ni、Cu、Co、Pb、Ca、Na、S、P、Se、K、Mo)標準溶液,購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心。

1.2 實驗方法

1.2.1 有效成分含量的測定方法 (1)色譜條件：Agilent ZORBAX Eclipse XRD-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動相為乙腈+0.2%磷酸水溶液(5∶95),等度洗脫;流速為1.000 mL/min；進樣量為5 μL；檢測波長為273 nm；柱溫為30 ℃[23]。

(2)對照品溶液的配制：精確稱取20 mg沒食子酸對照品,溶解,加入濃度為50%的甲醇溶液定容至10 mL棕色容量瓶,得到濃度為2.0 mg/mL的沒食子酸對照品溶液。

(3)供試品溶液的制備：將采集的新鮮余甘子洗凈、去核、烘干、粉碎、過篩后,保存備用；用萬分之一的電子天平準確稱取0.1000 g余甘子粉末,每份樣品平行3次,置于10 mL容量瓶中,加入10 mL 50%的甲醇溶液,超聲提取90 min(超聲功率為300 W,頻率為40 kHZ)；然后冷卻,再稱定質量,用50%的甲醇溶液補足質量,搖勻，最后用0.45 μm有機系微孔濾膜過濾；取濾液,待上機測試。

(4)線性關系考察：精密吸取沒食子酸對照品溶液(2.00 mg/mL)適量,用50%的甲醇進行梯度稀釋,分別配制成濃度為0.030、0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/mL的系列對照品溶液,按1.2.1節(1)中的色譜條件進行測定。

(5)檢出限與定量限試驗：取1.2.1節(2)中濃度為2.00 mg/mL的沒食子酸對照品溶液適量,進行倍比稀釋,按1.2.1節(1)中的色譜條件連續進樣6次,記錄峰面積。當信噪比為3∶1時,得出檢出限;當信噪比為10∶1時,得出定量限。

(6)精密度試驗：取濃度為2.00 mg/mL的沒食子酸對照品溶液適量,按1.2.1節(1)中的色譜條件連續進樣6次,計算峰面積的RSD。

(7)穩定性試驗：依據1.2.1節(3)中的方法制備余甘子提取液,按1.2.1節(1)中的色譜條件對同一樣品在0、2、4、6、8、10、12、24 h分別進行測定,計算余甘子中沒食子酸含量的RSD。

(8)重復性試驗：參照1.2.1節(3)中的方法平行制備6份余甘子提取液,在1.2.1節(1)中的色譜條件下進行測試,計算余甘子中沒食子酸含量的RSD。

(9)加標回收率試驗：按照1.2.1節(3)中的方法制備余甘子提取液,加入不同濃度的沒食子酸標準品溶液,按1.2.1節(1)中的色譜條件進行測試，計算加標回收率。

(10)樣品含量的測定：參照1.2.1節(3)中的方法制備18批余甘子樣品提取液,在1.2.1節(1)中的色譜條件下,連續進樣3次,分別計算18批余甘子樣品中沒食子酸的含量。

1.2.2 礦質元素含量的測定方法 (1)樣品的前處理：準確稱取18批余甘子樣品各0.2000 g,每批樣品平行稱取3份,置于聚四氟乙烯高壓微波消解罐中,分別加入6 mL濃HNO3和2 mL H2O2,擰緊消解罐,在確保完全密封的條件下將消解罐放入微波消解爐內,設定微波消解程序(微波消解最大功率為1800 W；首先設置溫度為140 ℃,爬升時間設置為15 min,保持時間為5 min;然后將溫度升高至180 ℃,爬升時間設置為10 min,保持時間為20 min;最后冷卻至室溫)進行消解。在微波消解完畢后,先利用趕酸儀趕酸60 min左右；再用2%HNO3溶液少量多次洗滌高壓消解內罐,合并洗液，將其轉入50 mL容量瓶,定容并混勻；最后用0.22 μm微孔濾膜過濾,取濾液,待上機測試。同時制備空白對照品[21]。

(2) ICP-OES的工作參數：利用軸向(axial)作為等離子體觀測方式;氬氣壓力為0.65 MPa;高頻發射器功率為1200 W;冷卻氣流量為12 L/min;霧化氣流量為0.5 L/min;輔助氣流量為0.5 L/min;快泵流速為4.0 mL/min;蠕動泵正常流速為1.00 mL/min;測定次數為3次。

(3)標準曲線的繪制：準確吸取濃度為100 μg/mL的多元素標準溶液10 mL于100 mL容量瓶中,定容搖勻,從而得到濃度為10 μg/mL的標準溶液。吸取一定量的10 μg/mL標準溶液,進行梯度稀釋,得到濃度分別為0.00、0.10、0.50、1.00、2.50和5.00 mg/L的系列標準溶液,待上機測試,從而獲得礦質元素的標準曲線。

(4)待測樣品礦質元素含量的測定：對18批余甘子樣品的待測液分別進行Al、B、Mn、Zn、Fe、Cu、Ca、Cr、K、S、Cd、Se、P、Na、Si、Mg、Mo、Ni、Co、Pb共20種礦質元素含量的測定,每批平行測定3次。

1.3 數據分析

利用SPSS 20.0和SAS統計分析軟件對所有試驗數據進行單因素方差分析(ANOVA)；差異性多重比較采用LSD(least significant difference)分析法；雙變量相關性分析(Pearson correlation analyis)的顯著性水平為0.05；采用Origin 8.6繪制系統聚類分析結果圖。

2 結果與分析

2.1 采用HPLC法測定余甘子中沒食子酸含量

2.1.1 色譜條件的選擇 為了考察供試品余甘子提取液的系統適用性,采用甲醇+0.2%磷酸水(5∶95)進行等度洗脫,結果發現余甘子中沒食子酸峰的理論塔板數不理想，分離度低，重現性差(圖1)；采用乙腈+0.2%磷酸水(5∶95)進行等度洗脫,發現余甘子中沒食子酸峰的理論塔板數高于2000，分離度較好，出峰快，重現性好,因此選擇乙腈+0.2%磷酸水(5∶95)作為流動相條件測定余甘子中沒食子酸的含量。目前大部分研究中沒食子酸的檢測波長為273 nm[25],因此選擇273 nm作為檢測波長。

圖1 沒食子酸對照品A和供試品B的HPLC圖譜

2.1.2 線性關系考察 以沒食子酸對照品溶液的濃度(x)為橫坐標,以峰面積(y)為縱坐標繪制標準曲線,得到回歸方程y=18934x-16.921,R2=0.9999 (n=7),結果表明,沒食子酸在0.030～2.00 mg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系(圖2)。檢出限為0.17614 mg/kg,定量限為0.58938 mg/kg,此方法具有較低的檢出限和定量限,因此其靈敏度較高。

圖2 沒食子酸的標準曲線圖譜

2.1.3 精密度、穩定性、重復性與回收率 通過對沒食子酸對照品進行精密度考察,計算得到沒食子酸峰面積的相對標準偏差(RSD)為0.21%,說明儀器的精密度較高;對供試品提取液進行穩定性考察,發現沒食子酸峰面積的RSD為1.01% (n=6),說明供試品溶液在室溫下放置24 h穩定性較好;取供試品進行重復性實驗,計算得到沒食子酸峰面積的RSD為0.79%,表明該方法的重復性良好。在余甘子提取液中按照0.5、1.0、5.0 mg/kg三個水平分別添加沒食子酸,每個添加水平重復6次。添加回收試驗結果如表2所示,在0.5～5.0 mg/kg 3個添加水平下,余甘子中沒食子酸的平均回收率在92.2%～98.7%, RSD為2.12%～5.63%,說明本試驗方法具有較好的回收率且加標回收結果準確可靠。

表2 沒食子酸的添加回收率與相對標準偏差

2.2 18種余甘子中沒食子酸含量的變化

由圖3可知,18種余甘子中沒食子酸的含量差異顯著,其中以BCYY的沒食子酸含量最高,高達(3011.589±34.368)mg/kg；以BCYS的含量最低,僅有(215.209±2.097)mg/kg；BCYY的沒食子酸含量是BCYS的14倍，差異顯著(P<0.05)。YMYY中沒食子酸的含量略低于BCYY中的沒食子酸含量,為(2403.698±28.623)mg/kg,但高于其他種質的含量。方差分析結果表明：YM02和BCJY的沒食子酸含量無顯著性差異(P>0.05)；YMJY和YJ01、YJ03、YJ06、YJ08的沒食子酸含量無顯著性差異(P>0.05)；在其余種質間沒食子酸的含量具有顯著性差異。表3列出了18種余甘子中沒食子酸含量的平均值、標準偏差、最大值、最小值和變異系數,通過平均值可知BCYY中沒食子酸的含量最高,且平行測定3組數據間的變異系數較小,說明測定結果準確。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

表3 不同種質余甘子中沒食子酸含量的統計值(n=3)

2.3 18種余甘子中礦質元素含量的變化

2.3.1 礦質元素的標準曲線方程 使用ICP-OES(電感耦合等離子體發射光譜儀)測試多種元素混合標準溶液,繪制標準曲線并計算線性回歸方程及相關系數。結果如表4所示,當線性范圍為0～5.00 mg/L時,Al、B、Mn、Zn、Fe、Cu、Ca、Cr、K、S、Cd、Se、P、Na、Si、Mg、Mo、Ni、Co、Pb共20種元素在相關系數范圍0.9968～0.9999內具有較好的線性關系。

2.3.2 18種余甘子中礦質元素含量的比較 利用單因素方差分析法分析余甘子中礦質元素含量是否存在差異性,由表5可以看出,18種余甘子中20種礦質元素的含量差異性顯著,其中K元素的含量最高,其次是Mg元素,而Ni、Cr元素的含量居后兩位。在18種余甘子中個別礦質元素的含量差異顯著,其中YJ05中Mn元素的含量是YM02的5.7倍,YM05中Fe元素的含量是YJ05的7.6倍,而Ca元素的含量又是BCJY的7.5倍。18種余甘子均含有人體必需的微量元素如Fe、Zn、Mn、Cu、Ni、B和Si,同時含有人體必需的礦質元素如Ca、Mg、P和Na；有害元素Pb、Cd在18種余甘子中均未檢出。由變異系數可知：Cu元素的變異系數最大,為139.05%,說明18種余甘子中Cu元素的含量差異較大；其次是Al、B,變異系數分別為136.86%、106.47%；Mg元素含量的變異系數最小,為6.14%,說明18種余甘子中Mg元素的含量差異最小。

表4 線性回歸方程及其相關系數

2.3.3 18種余甘子中礦質元素含量的相關性分析 相關性分析結果(表6)表明：18種余甘子中Fe元素含量與Al、B、Cr、Ni、Ca、Na、Si元素含量之間存在極顯著的正相關關系,相關系數分別為0.944、0.675、0.923、0.700、0.352、0.405、0.813,說明在Fe元素含量高的余甘子產地,其Al、B、Cr、Ni、Ca、Na、S元素的含量也較高；Al元素含量與B、Cr、Ni、Ca、Na、Si元素含量之間存在極顯著正相關關系；B含量與Cr、Ni、Ca、Na、S含量間呈極顯著正相關；Cr含量與Ni、Ca、Na、S含量間呈極顯著正相關；Fe、Al、B、Cr、Ni、Ca、Na、Si含量在18種余甘子中存在正相關關系；Cu與Ni、Zn之間呈極顯著正相關；Mn與Mg呈顯著正相關，與P呈極顯著負相關；Ni與Zn、Si之間存在極顯著正相關；Zn與Na呈極顯著正相關；Ca與K、Na、Mg之間存在極顯著正相關；K與Na、Mg之間存在顯著正相關,與S元素存在極顯著負相關；Na與Mg存在顯著正相關。

2.3.4 18種余甘子中礦質元素含量的聚類分析 采用系統聚類法對18種余甘子中的礦質元素含量進行聚類分析,結果如圖4所示,可將18種余甘子樣品分為3類：YM02、YM03、YMJY、YJ05、YJ06、YJ07、YJ08、BCYY、BCYS為Ⅰ類群,其特點為Mn元素含量較高,而Cr、P、Si元素的含量較低;YM01、YM04、YM05、YJ01、YJ02、YJ03為Ⅱ類群,其特點為K、Ca、Na三種元素的含量較高;YMYY、YJ04、BCJY為Ⅲ類群,其特點為P元素的含量較高,而Mn、Zn、Cu、K四種元素的含量較低。

2.4 沒食子酸含量與礦質元素含量間的相關性

對18種余甘子中的沒食子酸含量和礦質元素含量進行雙變量相關性分析。由表7可知：沒食子酸含量與Ca元素含量存在極顯著的負相關,相關系數為-0.374,與Na元素含量存在顯著的負相關,相關系數為-0.286,說明當Ca、Na元素含量較高時,余甘子中沒食子酸的含量較低。沒食子酸作為一種次生代謝產物,其含量會受到礦質元素的影響,同時礦質元素也會參與植物次生代謝產物的合成,最終影響植物次生代謝產物的形成和積累[26]。

3 討論

余甘子在金沙江干熱河谷區分布較為廣泛,以野生居多,作為一種在干熱河谷區具有較好發展前景的“藥食同源”特色資源植物,其種質資源優勢和加工利用價值未得到充分發揮,存在優良品種栽培少、開發利用率低、加工技術滯后等問題。目前干熱河谷區余甘子主要作為藥材或者食品的初級加工原料,大多停留在初級產品、粗提階段。余甘子富含鞣質、黃酮、多酚、多糖等多種活性物質[10-12],其酚酸類物質是主要的活性成分,其中沒食子酸具有抗菌、抗氧化、消炎、降糖、抗癌、降脂等生物活性功能[17-18]。同時余甘子富含多種礦質元素,礦質元素在植物的生理活動中發揮著極其重要的作用,不僅影響植物的生長發育,還會影響有效活性成分含量的累積[22-23]。因此,探索余甘子中礦質元素如何影響其有效活性成分的積累,對于干熱河谷區余甘子植物資源的開發利用及質量控制具有一定的意義。

本研究發現利用乙腈+0.2%磷酸水(5∶95)進行等度洗脫時余甘子中沒食子酸峰具有較高的理論塔板數，分離度好，出峰快，重現性好,說明乙腈具有更好的分離效果。沒食子酸對照品在0.030～2.00 mg/mL濃度范圍內與峰面積具有良好的線性關系,檢出限為0.17614 mg/kg,定量限為0.58938 mg/kg,因此本試驗方法的靈敏度較高。對沒食子酸進行精密度、穩定性、重復性考察,分別得到沒食子酸峰面積的RSD為0.21%、1.01%、0.79%,說明儀器的精密度較高，供試品溶液的穩定性好，本方法的重復性良好。加標回收試驗顯示,余甘子中沒食子酸在0.5～5.0 mg/kg3個添加水平下,平均回收率在92.2%～98.7%,RSD為2.12%～5.63%,表明此方法具有較好的回收率且加標回收結果準確可靠。

表5 18種余甘子中礦質元素含量的比較 mg/kg

樣品CdSePNaSiMgMoNiCoPbYM01NDND1025.83±26.9669.17±7.6511.67±1.445076.67±1.44ND2.50±0.02NDNDYM02NDND772.50±11.6624.17±2.895.00±1.505075.00±5.00ND0.00±0.00NDNDYM03NDND920.00±6.6119.17±3.042.50±0.504953.33±44.74ND2.50±0.50NDNDYM04NDND1052.50±10.0024.17±1.2915.00±0.205074.17±1.44ND2.50±0.02NDNDYM05NDND911.67±11.2746.67±3.8228.33±2.895067.50±4.33ND10.00±1.50NDNDYMJYNDND1067.50±2.5034.17±3.8210.00±0.104869.17±6.29ND2.50±0.10NDNDYMYYNDND1140.00±25.0012.50±0.507.50±4.334557.50±2.50ND2.50±0.05NDNDYJ01NDND850.83±6.2915.83±1.297.50±0.055075.00±5.00ND2.50±0.50NDNDYJ02NDND927.50±20.4623.33±2.202.50±0.025080.00±10.21ND0.00±0.00NDNDYJ03NDND1160.83±6.2925.83±2.894.17±0.445065.83±14.22ND0.00±0.00NDNDYJ04NDND736.67±3.8222.50±1.505.83±0.894377.50±20.50ND1.67±0.44NDNDYJ05NDND580.00±15.0020.00±4.332.50±0.305077.50±12.46ND2.50±0.10NDNDYJ06NDND804.17±9.4617.50±2.618.33±0.445077.50±20.32ND2.50±0.20NDNDYJ07NDND749.17±3.8210.83±0.6412.50±2.505075.00±30.14ND2.50±0.05NDNDYJ08NDND600.00±2.5021.67±3.775.00±0.205070.00±14.33ND2.50±0.10NDNDBCJYNDND1045.83±11.279.17±0.4420.83±1.203980.00±2.50ND2.50±0.20NDNDBCYYNDND950.83±28.9821.67±1.4415.00±0.505046.67±35.03ND5.00±0.40NDNDBCYSNDND802.50±9.0126.67±1.4410.00±2.505080.00±10.20ND9.17±3.82NDND變異系數/%0.000.0018.8661.8672.576.140.0092.830.000.00

表6 18種余甘子中礦質元素含量間的相關系數

18種余甘子中沒食子酸的含量差異顯著,其中BCYY的沒食子酸含量最高,BCYS的含量最低；YMYY的沒食子酸含量略低于BCYY的，但高于其他種質的。這可能是因為BCYY和YMYY為“盈玉”新品種,YMYY種植于元謀,BCYY種植于賓川,是選育出的新品種,其單果果形較大,單果均重38.43 g[27],因是人工種植的品種,外部施加化肥和水分較為充足，可能導致沒食子酸的含量較高。而BCYS中沒食子酸含量最低,可能是因為其在野外生長，加之賓川地區氣溫較高、干旱缺水、缺肥，導致其沒食子酸的含量較低。方差分析結果表明：YM02和BCJY中沒食子酸含量無顯著性差異；YMJY和YJ01、YJ06、YJ03、YJ08中沒食子酸含量無顯著性差異；在其余種質間沒食子酸的含量均具有顯著性差異。這可能是因為次生代謝產物的合成與積累除了受遺傳特性的影響外,還可能與環境因子、土壤、人工種植與否、采摘時間等因素有關[26,28]。

圖4 18種余甘子中礦質元素含量的聚類分析樹狀圖

表7 18種余甘子中沒食子酸含量與礦質元素含量間的相關系數

余甘子除了富含鞣質、多酚、黃酮、多糖等多種有效化學成分外,還含有對人體健康極其重要的微量元素,其在機體中起著非常重要的作用,與機體正常代謝等生理功能息息相關[29]，例如：骨骼的發育功能不僅與礦質元素Ca有關,還與微量元素Fe、Mn、Zn有關;Mg具有預防心臟動脈硬化、降低“三高”發生幾率的功效;Cu會對機體的毛發色素、自由基解毒、造血機能、神經遞質分泌和血液凝固等方面有影響[29]。本研究分析了18種余甘子中20種礦質元素含量的差異性,發現K、Mg元素的含量較高,而Ni、Cr元素的含量較低；余甘子富含人體必需的微量元素Fe、Cu、Si、Zn、Ni、B和Mn,同時含有人體必需的礦質元素Ca、Mg、P和Na,而有害元素Pb、Cd未檢出。在不同余甘子種質間個別礦質元素的含量差異顯著,例如YM05中Fe元素的含量是YJ05的7.6倍。這可能是因為余甘子中礦質元素含量與其生長土壤所含的礦質元素含量有一定關系[30]。

礦質元素之間存在著復雜的相互作用機制,既有協同、拮抗,又有替換、補充等關系[31]。相關分析結果顯示：18種余甘子中Fe元素與Al、B、Cr、Ni、Ca、Na、Si元素之間存在極顯著的正相關關系；Cu與P呈極顯著負相關。利用系統聚類法對18種余甘子中的礦質元素含量進行聚類分析,最終將18種余甘子樣品分為3個類群：YM02、YM03、YMJY、YJ05、YJ06、YJ07、YJ08、BCYY、BCYS為Ⅰ類群;YM01、YM04、YM05、YJ01、YJ02、YJ03為Ⅱ類群;YMYY、YJ04、BCJY為Ⅲ類群。

本研究對18種余甘子中的沒食子酸含量和礦質元素含量進行了雙變量相關性分析,發現沒食子酸含量與Ca元素含量存在極顯著的負相關,與Na元素含量存在顯著的負相關,說明余甘子中的沒食子酸與Ca、Na元素存在拮抗作用。因此,研究余甘子有效活性成分與礦質元素之間的相關性，以及不同生態環境條件對余甘子次生代謝產物含量的影響,對于其良種培育、養分管理、現代化栽培生產具有重要意義[32]。