HBV抗原對乙型肝炎相關性肝細胞癌分化程度的影響*

羅昊翔，李秀惠

(1.右江民族醫學院，廣西百色 533000；2.首都醫科大學附屬北京佑安醫院，北京100086)

據流行病學統計，全球大約有3.5～4.0億人患HBV感染相關的疾病，而接近50%的慢性HBV感染者可能會發展為肝癌[1]。原發性肝癌在我國也是發病率和病死率均較高的惡性腫瘤之一，且有逐年增高的趨勢[2]。然而，乙型肝炎相關性肝細胞癌(HCC)的發生機制尚未完全清楚，目前對于HBV血清標志物組合模式與HCC發生的關系及HBsAg、HBeAg、HBcAg在HCC發生機制中的研究較少。探究HBV抗原導致肝細胞異常分化的機制對于乙型肝炎相關性HCC的診斷、治療、預防和預后有重要的意義。本研究通過收集乙型肝炎相關性HCC患者的住院病例資料，對乙型肝炎相關性HCC患者的HBV血清標志物、病理標本的免疫組織化學檢測結果與HCC分化類型的關系進行探討，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集首都醫科大學附屬北京佑安醫院2019年診斷HCC且HBV感染或既往感染的住院患者260例，性別和年齡不限。納入研究的HCC患者需同時具備以下要求：HBV感染或既往感染者；病理檢查有分化類型；須有免疫組織化學(HBsAg、HBcAg)的檢測結果；診斷須為HCC。排除標準：抗-HBs單一陽性者；合并HCV等其他肝炎病毒感染者；酒精性肝病等其他因素相關性肝癌患者；血清學、病理學和免疫組織化學(HBsAg、HBcAg)檢查資料任一項不全者；肝腺癌、膽管細胞癌等非HCC的類型。

1.2 資料收集及分析

收集患者的HBV血清學、免疫組織化學(HBsAg、HBcAg)和HCC病理學檢測高、中、低分化類型的資料，按照檢測結果指標，輸入SPSS21.00軟件進行統計分析。

1.3 統計學處理

使用SPSS21.00軟件對收集的數據進行處理和統計分析。將病例資料中的結果，根據HBV血清標志物組合模式的不同，分類輸入SPSS21.00統計軟件，使用χ2檢驗進行統計分析，理論頻數小于1時，使用Fisher確切概率法。并分別統計分析血清HBsAg、血清HBeAg、免疫組織化學檢測結果中HBsAg和HBcAg與HCC組織分化的關系。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HBV血清標志物組合模式與HCC分化程度的相關性

乙型肝炎HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)(簡稱“小三陽”)血清標志物組合模式152例(58.5%)，其中肝組織病理顯示HCC高分化類型3例(1.2%)，中、低分化類型149例(57.3%)；非“小三陽”血清組合模式共108例(41.5%)，其中HCC高分化類型7例(2.7%)，中、低分化類型有101例(38.8%)。HBV血清標志物組合模式對乙型肝炎相關性HCC分化類型的影響差異無統計學差異(χ2=0.125，P>0.05)，見圖1。

圖1 HBV血清標志物組合模式與HCC分化程度

2.2 血清HBsAg與HCC分化程度的相關性

在260例病例資料中，血清HBsAg陽性221例(85.0%)，其中屬于高分化類型7例(2.7%)，中、低分化類型214例(82.3%)；血清HBsAg陰性39例(15.0%)，屬于高分化類型3例(1.2%)，中、低分化類型36例(13.8%)，HBsAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異無統計學意義(χ2=0.366，P>0.05)。進一步通過Pearson相關性分析，r=-0.084，P>0.05。

2.3 HCC組織HBsAg與HCC分化程度的相關性

在260例病例資料中，HCC組織免疫組織化學HBsAg陽性206例(79.2%)，其中HCC高分化類型5例(1.9%)，中、低分化類型201例(77.3%)；HCC組織免疫組織化學HBsAg陰性54例(20.8%)，其中HCC高分化類型5例(1.9%)，中、低分化類型49例(18.8%)，HBsAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異有統計學意義(χ2=0.020，P<0.05)。經Pearson相關性分析，r=-0.144，P<0.05。

2.4 血清HBeAg與HCC分化程度的相關性

在260例病例資料中，血清HBeAg陽性19例(7.3%)，其中屬于HCC高分化類型0例，中、低分化類型19例；HBeAg陰性241例(92.7%)，其中屬于HCC高分化類型10例，中低分化類型231例，經Fisher確切概率法進行統計檢驗，HBeAg對HCC高分化和HCC中、低分化的影響差異無統計學意義(P>0.05)，經Pearson相關性統計分析，r=-0.056，P>0.05。

2.5 HCC組織HBcAg與HCC分化程度的相關性

在260例病例資料中，HCC組織HBcAg陽性39例(15.0%)，其中屬于HCC高分化類型2例(0.8%)，中低分化類型37例(14.2%)；HCC組織HBcAg陰性221例(85.0%)，屬于HCC高分化類型8例(3.1%)，中低分化類型213例(81.9%)，HBcAg對HCC高分化和HCC中低分化的影響差異無統計學意義(χ2=1.000，P>0.05)。Pearson相關性統計分析，r=0.028,P>0.05。

3 討 論

在我國，乙型肝炎為原發性肝癌的主要原因[3]，近年來仍呈上升趨勢，HBV血清標志物組合模式中，以“小三陽”模式患者更易發生HCC。以往文獻認為，乙型肝炎“小三陽”血清組合模式HBV DNA多為變異株，HBV DNA變異與原發性肝癌的發生有關，而且乙型肝炎“小三陽”血清組合模式多為慢性HBV感染；HBV在體內存在多年，HBV DNA可能已與細胞基因組整合，導致細胞基因突變，繼而和原發性肝癌的發生有關。近年來的研究表明，HBV的抗原有反式激活作用，通過反式激活細胞基因的表達，調控細胞信號傳導通路，進而與原發性肝癌的發生有關。然而，目前文獻顯示，HBV抗原對肝癌細胞分化影響的研究較少。本研究通過收集病例資料，對其統計分析，探討HBV的抗原與HCC分化程度的關系。

在本研究中，通過對260例乙型肝炎相關性HCC患者的病例資料進行分析，發現乙型肝炎相關性HCC中“小三陽”血清標志物組合模式有152例(58.5%)，其中HCC中、低分化類型有149例(57.3%)，雖然目前尚不能說明乙型肝炎“小三陽”血清標志物組合模式和乙型肝炎非“小三陽”血清標志物組合模式對乙型肝炎相關性HCC分化類型有影響，但是可以看出乙型肝炎相關性HCC的發病人群主要HBV血清標志物組合模式為“小三陽”者及乙型肝炎相關性HCC分化類型多為中、低分化的趨勢。

本研究發現，乙型肝炎相關性HCC組織中HBsAg陽性與乙型肝炎相關性HCC組織中HBsAg陰性對HCC高分化和中、低分化的影響差異有統計學意義(P<0.05)，且乙型肝炎相關性HCC高分化和中、低分化類型與HCC組織HBsAg的存在與否呈負相關(r=-0.144，P<0.05)，說明HBsAg在HCC組織的存在可能會影響HCC分化，且HBsAg在肝組織中存在時間越長及存在于肝組織中的水平越高，乙型肝炎相關性HCC的分化程度可能越低。TSENG等[4]的研究表明，在HBeAg陰性且低病毒載量的患者中，HCC的風險取決于HBsAg的水平、丙氨酸氨基轉移酶水平和年齡。HBsAg為HBV S基因編碼的蛋白，是構成HBV外衣殼的主要成分，也是HBV感染的重要指標。有研究表明，HBsAg是一種轉錄激活子，可以反式激活多種細胞基因包括癌基因[5]，如c-myc、c-fos、c-Ha-ras等，且能激活c-Raf-1/MEK /Erk2信號傳導途徑[6]，從而導致肝細胞惡性轉化。SHAN等[7]的研究表明，HBsAg的刺激可促進乙型肝炎相關性肝癌細胞的侵襲。高水平的HBsAg在肝細胞內積累可導致嚴重的肝損傷，而肝損傷又可以激活Met原癌基因，啟動HGF/MET信號傳導通路[8]，與肝癌的發生密切相關。然而，乙型肝炎相關性HCC患者血清HBsAg陽性和血清HBsAg陰性對HCC高分化和中低分化的影響差異無統計學意義(P>0.05)。HBsAg作為HBV大球形顆粒外衣殼和小球形顆粒及管型顆粒的主要成分，在肝細胞內產生后分泌到細胞外，主要在血清中存在，其在肝細胞中存在時間的長短及水平對肝細胞分化的調控可能起到一定作用。SALPINI等[9]的研究表明，阻止HBsAg的分泌與促進細胞增殖有關。

綜上所述，乙型肝炎相關性HCC組織分化程度主要與HCC組織中HBsAg有關。乙型肝炎相關性HCC組織中細胞的增殖和分化程度，可能與HBsAg長期留存于肝組織有關。

HBeAg和HBcAg都是HBV在細胞內復制時產生前基因組3.5 kb mRNA翻譯出的重要蛋白[10]，且這兩種抗原都由HBV C基因區編碼[11]，都是與HBV的復制過程同步的蛋白，一般將其視為HBV復制的指標，而高病毒載量往往是HCC發生的高危因素[12]。HBcAg為HBV大球形顆粒內衣殼的主要成分，HBcAg在細胞內產生后，可存在于HBV大球形顆粒的內衣殼，也可經內源性抗原提呈途徑提呈后表達在肝細胞表面，導致一系列免疫反應，進而與導致的肝損傷有關。HBV C基因區翻譯出的HBeAg的前體，經剪切加工后，分泌到肝細胞外，HBeAg主要在血清中存在。侯環榮等[13]的研究表明，HBcAg能促進HepG2.2.15細胞的侵襲力，而在本研究中，目前尚不能說明HCC組織中HBcAg及血清HBeAg的存在對HCC分化程度有影響，另外，與肝損傷有關的HBcAg在肝組織持續存在是否與HCC分化程度有關，有待于進一步研究。