三七活絡(luò)膏的初步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

鄺潔容　陳伯叢　羅德祥（廣東省佛山市中醫(yī)院藥劑科　佛山　528000）

三七活絡(luò)膏的初步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

鄺潔容陳伯叢羅德祥（廣東省佛山市中醫(yī)院藥劑科佛山528000）

目的：建立三七活絡(luò)膏的薄層色譜鑒別方法，為其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的制定提供試驗(yàn)依據(jù)。方法：采用薄層色譜鑒別法鑒別處方中的骨碎補(bǔ)、樟腦、羌活、甘草、防風(fēng)等多味藥。結(jié)果：處方中的骨碎補(bǔ)、樟腦、羌活、甘草、防風(fēng)五味藥的薄層色譜具有鑒別特征，斑點(diǎn)均清晰，陰性無(wú)干擾。白芷、三七斑點(diǎn)不明顯，不能作為薄層色譜法鑒別的方法。結(jié)論：薄層色譜鑒別方法簡(jiǎn)便快捷，專屬性及重現(xiàn)性好，為三七活絡(luò)膏的質(zhì)量控制提供有力的支撐。初步穩(wěn)定性試驗(yàn)表明本品質(zhì)量穩(wěn)定。

三七活絡(luò)膏 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 薄層色譜法 初步穩(wěn)定性試驗(yàn)

三七活絡(luò)膏是由三七、骨碎補(bǔ)、白芷、羌活、防風(fēng)、木瓜、甘草、樟腦、薄荷腦、當(dāng)歸、伸筋草等二十一味藥材制成的中藥制劑，具有活血祛瘀、消腫止痛、祛風(fēng)去濕、舒經(jīng)活絡(luò)作用，治跌打損傷、瘀腫疼痛、筋骨酸軟、關(guān)節(jié)不利，臨床用于治療多種骨折創(chuàng)傷，毒副作用相對(duì)西藥較小，患者的順應(yīng)性也好，對(duì)于跌打損傷的治療有一定的意義。因此建立三七活絡(luò)膏的薄層色譜法定性鑒別質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，不僅對(duì)制劑的工藝設(shè)計(jì)提供數(shù)據(jù)的參考，保證質(zhì)量，提高療效，方便患者使用，而且具有較大的市場(chǎng)發(fā)展前景。

1　材料與儀器

1.1材料：羌活、骨碎補(bǔ)、樟腦、防風(fēng)、甘草等藥材（均購(gòu)自廣東天泰藥業(yè)有限公司中藥飲片廠），經(jīng)中藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定符合藥典中的藥材來(lái)源與標(biāo)準(zhǔn)；三七跌打軟膏，自制；硅膠G（青島海洋化工有限公司）；香草醛、乙酸乙酯、氯仿等試劑均為分析純；甘油、白凡士林等均為化學(xué)純。

1.2儀器：HH數(shù)顯恒溫水浴鍋、ZF-20D暗箱式紫外分析儀、85-2A型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器、TDL-80-2B離心機(jī)、SK8200H超聲波清洗器、數(shù)顯鼓風(fēng)干燥器。

2　方法與結(jié)果

2.1骨碎補(bǔ)的薄層鑒別：取本品20g，加水100mL，超聲提取40 min，過(guò)濾，取濾液50mL，用氯仿萃取兩次，每次50mL，舍去氯仿萃取液；藥液部分繼續(xù)用乙酸乙酯萃取兩次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，于水浴上濃縮至干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。取骨碎補(bǔ)對(duì)照藥材1g，加乙酸乙酯溶液20mL，其余做法與供試品相同作為對(duì)照藥材溶液。陰性對(duì)照溶液制法與供試品溶液制備方法相同。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2μL，對(duì)照藥材溶液4μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸-水（1∶12∶2.5∶3）為展開劑，預(yù)飽和30min，上行展開，取出晾干，噴以硫酸香草醛溶液，在105℃下烘至斑點(diǎn)顯色清晰。在日光下檢視。（見圖1）［1］

2.2羌活的薄層鑒別：取本品20g，加水100mL，超聲提取30min，過(guò)濾，取濾液50mL，用乙醚萃取兩次每次50mL，萃取液舍去。藥液部分繼續(xù)用三氯甲烷萃取兩次，每次30mL，合并萃取液于水浴濃縮至干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取羌活對(duì)照藥材1g，加入甲醇10mL，其余做法參照供試品溶液的做法，為對(duì)照藥材溶液。陰性對(duì)照溶液按供試品溶液制備方法制成。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取以上三種試液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶1.5∶0.5）為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。（見圖2）［2］

2.3樟腦的薄層鑒別：取本品20g，加水100mL，低溫超聲，過(guò)濾，濾液用三氯甲烷萃取兩次，每次30mL，合并濾液，取濾液2mL，作為供試品溶液。取樟腦對(duì)照藥材1g，加1%乙醇溶液10mL溶解，制成對(duì)照藥材溶液。陰性對(duì)照溶液按供試品溶液制備方法制成。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各5μL，對(duì)照藥材溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（9∶2）為展開劑，預(yù)飽和15min，上行展開，取出晾干，噴以5%硫酸香草醛溶液，在105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。（見圖3）［3］

2.4甘草的薄層鑒別：取本品20g，加水100mL，超聲，過(guò)濾，取濾液50mL，用50mL乙醚萃取，共兩次，合并乙醚液，濃縮至干，用甲醇2mL使殘?jiān)芙猓瑸楣┰嚻啡芤骸?/p>

取對(duì)照藥材甘草1g，加入甲醇10mL，超聲提取30min，濾過(guò)，濾液水浴上蒸干，用甲醇2mL將殘?jiān)芙猓瑸閷?duì)照藥材溶液。陰性對(duì)照溶液按供試品溶液制備方法制成。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取以上三種試液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-水（5∶2∶0.1）為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。（見圖4）［4］

2.5防風(fēng)的薄層鑒別：取本品20g，加水100mL，超聲，過(guò)濾，取濾液50mL，用乙醚萃取兩次每次50mL，藥液部分繼續(xù)用三氯甲烷30mL萃取，共兩次，合并萃取液，于水浴上濃縮至干，加甲醇2mL使殘?jiān)芙猓瑸楣┰嚻啡芤骸７Q取對(duì)照藥材防風(fēng)1g，加入三氯甲烷20mL，超聲提取20min，濾過(guò)，濾液水浴上蒸干，用甲醇2mL使殘?jiān)芙猓瑸閷?duì)照藥材溶液。制成陰性對(duì)照溶液方法與供試品溶液相同。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取以上三種試液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。（見圖5）［5］

3　討論

該實(shí)驗(yàn)主要以薄層色譜法對(duì)三七活絡(luò)膏的質(zhì)量進(jìn)行控制，三七活絡(luò)膏為0/W型乳膏，因?yàn)槠鋭┬吞攸c(diǎn)，在供試品制備過(guò)程中遇到較大的問(wèn)題：供試品溶液過(guò)于黏稠、沒(méi)有出現(xiàn)特征斑點(diǎn)、斑點(diǎn)模糊及陰性干擾大等現(xiàn)象。最后根據(jù)文獻(xiàn)等資料選擇了一條途徑重新制備供試品，經(jīng)過(guò)多次預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：根據(jù)分步萃取的思路和藥典及文獻(xiàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定常用提取部位，選擇了乙醚→氯仿→乙酸乙酯→水飽和正丁醇的提取路線，供試品制備方法為：取本品20g，加水100mL，超聲30min，過(guò)濾，濾液用乙醚萃取兩次，每次30mL，合并乙醚液，乙醚液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液乙醚部位，藥液繼續(xù)用氯仿萃取兩次，每次30mL，合并氯仿液，氯仿液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液氯仿部位，藥液繼續(xù)用乙酸乙酯萃取兩次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品乙酸乙酯部位，藥液繼續(xù)用水飽和正丁醇萃取兩次，每次30mL，合并水飽和正丁醇液，水飽和正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液水飽和正丁醇部位，根據(jù)所要研究的成分性質(zhì)選擇實(shí)驗(yàn)需要的部位。

復(fù)方制劑中由于藥材品種多，各種藥材所含的成分更多，它們相互之間影響因素不一樣，就算兩種藥材或兩個(gè)復(fù)方制劑均含有同一種成分，但是它們受到的影響環(huán)境不一樣，得出的結(jié)果也不可能相同，結(jié)果很難有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)衡量，可能出現(xiàn)的情況是：可能斑點(diǎn)的Rf值相同，但是斑點(diǎn)顏色不一樣，或者斑點(diǎn)顏色一樣，但是Rf值不相同。出現(xiàn)這種情況的原因就是它們之間的各個(gè)成分相互干擾，哪種成分干擾沒(méi)有進(jìn)一步研究，對(duì)科技工作者提出了新的要求，是今后努力的方向。有時(shí)能找到兩個(gè)藥材的相同成分，但是要排除陰性干擾，又要找出所研究的復(fù)方制劑的各藥材之間的不同成分，但是它們又不是主要成分、活性成分，沒(méi)有進(jìn)一步研究的價(jià)值。在鑒別過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)薄層色譜實(shí)驗(yàn)常出現(xiàn)的問(wèn)題，如：斑點(diǎn)拖尾；Rf值過(guò)大過(guò)小、斑點(diǎn)不清晰或分不開、斑點(diǎn)顏色較淺、邊緣效應(yīng)等。經(jīng)過(guò)查找大量文獻(xiàn)，收集了較多的解決方法，有：調(diào)整點(diǎn)樣量大小，原點(diǎn)直徑應(yīng)不大于3mm；噴顯色劑使斑點(diǎn)清晰或加大供試品溶液點(diǎn)樣量或者濃度；展開劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，預(yù)飽和時(shí)間應(yīng)為30min，展開缸的密閉性應(yīng)良好等，建立了骨碎補(bǔ)、羌活、甘草、防風(fēng)及樟腦的薄層鑒別方法，經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究，也做了方法學(xué)考察，表明該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可行性、重現(xiàn)性及耐用性良好，可以作為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］張彬，李萍.跌打活血散中的骨碎補(bǔ)薄層色譜鑒定［J］.山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，10（27）：15-16.

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R286.0

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1672-8351（2016）09-0012-02