22種植物提取物對黃瓜根結線蟲的毒殺活性

姬妍茹，董 艷，張正海，石 杰

(黑龍江省科學院大慶分院，黑龍江 大慶 163319)

0 引 言

根結線蟲是植物侵染性病害的重要病原物之一，寄主范圍廣，發生面積大，危害嚴重?？蓞f同促進真菌和細菌侵染植物，從而誘發其他植物病害，造成農作物減產，難以根治[1]。目前，根結線蟲的防治主要是微生物結合化學防治為主，1.8%阿維菌素乳油和10%噻唑磷顆粒劑常用于防治黃瓜根結線蟲[2]。隨著綠色環保理念的發展，線蟲防治已由化學殺滅為主發展為綜合治理，原則上以減少經濟損失為前提，強調生物防御，重視生物防治與生態防控手段的結合使用，弱化化學農藥的使用，在宏觀上保持寄生線蟲與植物之間的動態平衡[3]，保護環境，促進生態環境的可持續發展。

生物農藥是生物防治的主要手段，是利用生物活體或其代謝產物加工而成的可殺滅有害生物的制劑。植物源殺線蟲劑是其中一員，其源于天然植物，容易降解，對環境友好，無污染，符合現代農藥的研究理念和發展目標[4]，因而成為目前生物農藥領域的研究熱點之一。自然界植物種類豐富，已知有50萬種之多，主要化學成分被檢測分析的僅有10%[5]，其中約有2 400種植物對有害生物具有抑殺活性[6]。植物是天然產物的寶庫，生長進化過程中難免受到有害昆蟲的侵害，長期的被動防御刺激，促使植物體內產生豐富的次生代謝產物，已知的有生物堿、類黃酮等40萬種[7]。植物的種類不同，生長環境不同，體內的次生代謝產物種類自然有所不同。研究不同種屬植物的藥理特性，從中篩選具有殺線蟲功效的植物，明確其有效活性物質，一方面可以將其直接開發為植物源殺線蟲劑，另一方面可以作為先導化合物采用人工仿生合成的方式研發新型生物農藥。為了挖掘對線蟲具有毒殺活性的植物資源，以22種具有清熱、解毒功能的植物為原料，以乙醇為溶劑進行提取，濃縮獲得粗提物，以采集于大慶大棚的黃瓜根結線蟲為受體，篩選具有毒殺活性的植物，為研發新型植物源殺線蟲劑提供理論支撐。

亞當·斯密認為，人類的“愛”是“有層次的”，而自由市場通過平等自愿的交換，讓人們能夠“以自私為目的，達成利他的結果，最終使每個人都互惠互利”。從制度經濟學的角度看，破除以地方政府為代表的政府機會主義，重塑政治生態，有耐于持之以恒、與時俱進地優化“規則”。正如布坎南所指出的那樣：“要改變一種游戲或競賽的結果，改變參加競賽的人并不重要，而改變競賽規則最為重要?！?/p>

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試線蟲，采自大慶市讓湖路區宏偉二隊蔬菜大棚。

供試植物。供試植物一共22種，種類見表1。甘草、白鮮、黃芩、龍膽和蒼術購自大慶市東風新村福瑞邦藥店，其他17種植物為大慶周邊野生植物。采集的樣品經60℃烘干，然后粉碎過20目篩，4℃冷藏保存。

表5顯示了不同育肥條件下母羊小腸及胰腺的胰蛋白酶活性。表5結果可見，TMR組母羊十二指腸和胰腺胰蛋白酶活性顯著高于NG組母羊（P=0.003、P=0.02）；回腸胰蛋白酶活性有高于NG組母羊的趨勢（P=0.08）；空腸胰蛋白酶活性略高于NG組母羊，但差異不顯著（P=0.46）。

從表1提取率來看，以乙醇為溶劑進行超聲提取，不同植物的提取率有所不同。龍膽的提取率最高，為25.31%，漢麻的提取率最低，為4.60%，這可能與提取的植物部位有關。除小藜和反枝莧外，20種植物乙醇提取物對黃瓜根結線蟲的2齡幼蟲均有一定的毒殺活性，顯著高于空白對照10%丙酮水溶液(P<0.05)，且呈現隨著時間延長抑殺活性增強的趨勢(48 h校正死亡率均高于24 h)。有18種植物提取物對黃瓜根結線蟲的抑殺活性顯著高于無菌蒸餾水(P<0.05)，白鮮、扁蓄、萬壽菊和酸模葉蓼對黃瓜根結線蟲具有極強的抑殺作用(48 h校正死亡率>80%)，殺線蟲效果明顯。龍葵、甘草、車前草、小薊、漢麻等13種植物提取物對根結線蟲也有較強抑殺活性(50%>校正死亡率>80%)，龍膽、苘麻、小藜和反枝莧對黃瓜根結線蟲抑殺活性較弱。

1.2 試驗方法

每個處理均進行3次平行試驗，數據以平均值±標準誤(means±sem)格式表示，采用DPSV 7.05軟件處理數據，組間比較以單因素方差分析(One-way ANOVA)進行，并做 Turkey 檢驗，當P<0.05 時，表示具有顯著性差異。

試劑與儀器?；瘜W試劑均為國產分析純，DHG-9070A型鼓風干燥箱(上海飛躍實驗儀器有限公司生產)，FW型高速粉碎機(濟南海博實驗儀器有限公司生產)，ME204E型分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產)，HH-1型恒溫水浴鍋(金壇市盛藍儀器制造有限公司生產)。

殺線蟲活性測定。粗提物水溶液配制：參試植物提取物以丙酮助溶，加無菌水配制成1%(W/V)的溶液，其中丙酮含量為10%(V/V)。以3 cm直徑的培養皿為容器，加入3 mL參試提取物溶液，再加入60條左右的2齡線蟲，25℃恒溫箱培養，24 h和48 h分別用清水復蘇2 h，觀察記錄線蟲死亡情況。死亡率的計算參考文艷華[8]等方法，每個處理設3次平行，以10%丙酮無菌水溶液作為空白對照。

低年級寫話教學是學生學習寫作的基礎，也是低年級學生學習語文的重點之一。在日常寫話教學中，經常發現低年級學生寫話往往語句不完整、用詞不當，總是干巴巴的，缺少畫面感。怎樣讓學生寫話的內容變得具體生動？我覺得借助文本指導學生寫話是比較有效的。

1.3 數據處理

樣品提取。稱取50 g植物樣品粉末，置于500 mL三角瓶中。按照料液比1∶5加入80%乙醇，超聲輔助提取，超聲功率200 W，提取時間20 min。過濾，濾液在40℃條件下旋轉蒸發濃縮，計算提取率，4℃冷藏備用。

2 結果與分析

2.1 22種植物提取物對黃瓜根結線蟲2齡幼蟲的抑殺效果

了解到問題的根源，我決定來一招釜底抽薪——我把孩子在校的情況如實向家長匯報，并建議家長不要再給孩子零花錢，這樣可以從源頭上對孩子進行控制。我們還商定對小胡進行“無縫”監管，每天由家長親自送孩子進校門，放學及時到校門來接孩子，不給他的任性留時間。隨后的一個星期，除了正常上課，小胡必須時時跟在我身邊。歷時一個多星期的持久“捆綁”戰，終于祛除了他身上的戾氣，他看我的目光也開始帶著敬畏。

根結線蟲卵囊孵化抑制試驗。卵囊的挑取、預處理及抑制孵化率計算參照邱雪柏[9]的方法，設22個處理，每個處理3次重復，分別設清水和10%丙酮溶液作為對照。25℃恒溫培養，96 h后檢查孵化出的幼蟲數，計算抑制孵化率。

續表1

2.2 22種植物提取物對黃瓜根結線蟲卵囊孵化的抑制效果

從圖1可以看出，除小藜和反枝莧外，其余20種植物提取物對黃瓜根結線蟲卵囊孵化的抑制率均顯著高于空白對照10%丙酮水溶液(P<0.05)，有13種植物提取物對黃瓜根結線蟲卵囊的孵化抑制率顯著高于無菌蒸餾水(P<0.05)，白鮮、扁蓄、萬壽菊、酸模葉蓼等14種植物提取物對黃瓜根結線蟲卵囊孵化具有較強的抑制作用，96 h時孵化抑制率均大于50%。其中，孵化抑制率高于70%的植物排序為白鮮>扁蓄>萬壽菊>酸模葉蓼。抑制效果顯著性比較來看，白鮮與扁蓄無顯著差異(P>0.05)，扁蓄與萬壽菊之間無顯著差異(P>0.05)，萬壽菊與酸模葉蓼之間差異不顯著(P>0.05)。

圖1 植物提取物對黃瓜根結線蟲卵囊孵化抑制效果Fig.1 Inhibitory effect of plant extractives on oocyst hatching of cucumber root knot nematode

3 結論與討論

通過18S rDNA特征性序列分析比對，確定采自大慶大棚的黃瓜根結線蟲屬于象耳豆根結線蟲(Meloidogyneenterolobii)。分別以此線蟲的2齡幼蟲和卵囊為受體，測定了22種植物提取物的毒殺活性。結果表明，參試植物提取物對黃瓜根結線蟲2齡幼蟲和卵囊均具有一定的毒殺活性，白鮮和扁蓄的毒殺活性最強，48 h 校正死亡率和 96 h 的卵囊孵化抑制率均高于80%。

白鮮的藥用部位為蕓香科植物白鮮的干燥根皮，是中國藥典收錄的多年生草本中藥材[10-11]。白鮮皮味道微苦，有特殊濃烈的羊膻味兒，具有清熱解毒、祛風除濕[12-13]的功效。白鮮皮主要的化學組成成分是生物堿和內酯化合物[14-16]，白鮮堿是其重要的活性成分[17-18]。王雨萌[19]以乙醇為溶劑對白鮮皮進行提取，并且鑒定出提取液中含有檸檬苦素、白鮮堿、梣酮和黃柏酮，通過試驗證明白鮮皮醇提物對多種害蟲具有毒殺活性，對粘蟲、雙斑螢葉甲、綠豆象和菜青蟲有觸殺作用，對榆紫葉甲有胃毒作用，其有效成分為白鮮堿和梣酮。扁蓄(PolygonumaviculareL.)為蓼科蓼屬植物，全草可入藥，主要活性成分為黃酮類化合物扁蓄甙和槲皮素甙，具有利尿、降壓、抗菌等作用[20-22]。有文獻表明，扁蓄乙醇提取物對小菜蛾幼蟲和枸杞蚜蟲具有較高的觸殺活性[23-24]。關于白鮮和扁蓄的乙醇提取物對根結線蟲的毒殺活性未見報道。

白鮮和扁蓄提取物對黃瓜根結線蟲幼蟲的毒殺和卵囊孵化抑殺率的測定都是在室內離體培養條件下完成的，是否能夠作為殺線蟲劑還需要經過盆栽培試驗和田間試驗的驗證，因為殺蟲劑實際應用情況比較復雜，作物本身的生長情況、土壤條件、溫濕度的不規律變化等因素都會影響藥效的發揮。下一步還將對白鮮和扁蓄的化學成分進行分析鑒定，明確具有殺線活性的化學成分種類，以期發現有價值的新型先導化合物，為人工仿生合成生物殺蟲劑提供理論依據。