野生博落回總黃酮提取方法篩選及含量測定

鄭梅霞 蘇海蘭 王旭卉 陳宏 朱育菁

鄭梅霞，1986年生，助理研究員，主要從事微生物多糖菌株的引進(jìn)、創(chuàng)制與應(yīng)用研究及中藥材成分分析。主持福建省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)、福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新項(xiàng)目等6項(xiàng)，參與國家基金延伸項(xiàng)目、國家“948”項(xiàng)目、福建省種業(yè)創(chuàng)新項(xiàng)目和福建省自然基金等18項(xiàng)。獲福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技獎一等獎1項(xiàng)（排名第3）、喜迎建院六十周年福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年創(chuàng)新研究大比武活動一等獎1項(xiàng)（排名第1）、福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新創(chuàng)意創(chuàng)業(yè)大賽二等獎1項(xiàng)（排名第1），獲得授權(quán)國家專利5項(xiàng)（3項(xiàng)排名第1，2項(xiàng)排名第2）。在國內(nèi)外刊物上發(fā)表第一作者和通信作者論文30余篇，其中在Carbohydrate Polymers、Food Chemistry和International Journal of Biological Macromolecules等TOP期刊上發(fā)表SCI論文5篇（3篇第一作者，2篇通信作者）。

摘 要：為了探究不同提取方法對野生博落回總黃酮含量的影響和分析不同地區(qū)不同生長部位的野生博落回的總黃酮含量差異，采集福建省南平市光澤縣和福建省三明市明溪縣兩地的野生博落回樣品，采用甲醇提取法、超聲甲醇提取法、超聲甲醇補(bǔ)足提取法、超聲乙醇提取法和乙醇提取法等5種不同的提取方法對博落回中總黃酮進(jìn)行提取，利用NaNO2·Al（NO3）3比色法對總黃酮的含量進(jìn)行測定，并利用SPSS 18.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。結(jié)果表明，超聲甲醇補(bǔ)足提取法的提取效果最好，博落回葉的總黃酮含量和提取率最高。光澤和明溪兩地的野生博落回葉中的總黃酮含量和總黃酮提取率均高于根和莖，光澤野生博落回樣品各部位中總黃酮含量和總黃酮提取率比明溪的略高，但無顯著差異。

關(guān)鍵詞：博落回;總黃酮;提取方法;提取效率;不同部位

中圖分類號：S 567.239?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號：0253-2301（2021）05-0001-05

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2021.05.001

Screening of Extraction Methods and Content Determination ofTotal Flavonoids in Wild Macleaya Cordata

ZHENG Mei-xia， SU Hai-lan*， WANG Xu-hui， CHEN Hong， ZHU Yu-jing*

（Institute of Agricultural Biological Resources， Fujian Academy ofAgricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350003， China）

Abstract： In order to explore the effects of different extraction methods on the total flavonoid content of wild Macleaya cordata and to analyze the difference of total flavonoid content in different growth parts of wild Macleaya cordata in different regions， the samples of wild Macleaya cordata from Guangze County of Nanping City and Mingxi County of Sanming City in Fujian Province were collected， and five different extraction methods， including the methanol extraction， ultrasonic-methanol extraction， ultrasonic-methanol supplement extraction， ultrasonic-ethanol extraction， and ethanol extraction， were used to extract the total flavonoids from Macleaya cordata. Then， NaNO2·Al（NO3）3 colorimetry was used to determine the content of total flavonoids， and SPSS18.0 was used for the data statistics and analysis. The results showed that? the ultrasonic-methanol supplemental extraction method had the best extraction effect， and the content and extraction rate of total flavonoids were the highest. The content and extraction rate of total flavonoids in the leaves of wild Macleaya cordata in Guangze and Mingxi were higher than those in the roots and stems. The content and extraction rate of total flavonoids in different parts of the samples of wild Macleaya cordata in Guangze were slightly higher than that in Mingxi， but there was no significant difference.

Key words： Macleaya cordata;Total flavonoids;Extraction method;Extraction efficiency;Different parts

博落回Macleaya cordata Wild.R.Br.，系罌粟科博落回屬植物，又名號筒桿、山梧桐、三錢三和山號筒等，產(chǎn)于湖南、安徽、貴州、江蘇、浙江、江西和云南等地區(qū)，為我國廣泛的野生草本植物[1]。博落回全草可入藥，具有發(fā)汗解毒、祛暑化濕和利尿消腫的作用[2]。博落回中含多種化學(xué)成分，其中以苯駢菲啶異喹啉類和托品類生物堿為主[3-5]，此外還含有黃酮、多糖、留體、萜類、皂苷、強(qiáng)心苷、香豆素內(nèi)酯和揮發(fā)油類等成分[6]。彭懿等[7]從博落回葉中鑒定到2個黃酮類化合物（1個黃酮苷和1個槲皮素）。鄒惠亮等[8]從博落回中鑒定到槲皮素3OβD葡萄糖苷。黃酮類化合物是以C6C3C6為基本骨架的天然化合物[9]，以糖苷或游離態(tài)（苷元）的形式廣泛存在于植物中，具有獨(dú)特的生物活性[10]。黃酮類化合物在增強(qiáng)免疫、保護(hù)血管細(xì)胞、清除自由基、抗炎、降糖和抗腫瘤等方面發(fā)揮藥理活性作用[11]。如黃芪總黃酮具有抗氧化性，薇甘菊葉部黃酮具有抑菌性、抗瘤性和降低血脂等多種功效[12]。

從植物中提取的總黃酮綠色環(huán)保，安全性好，在醫(yī)藥、食品加工中均有廣闊的應(yīng)用前景?？茖W(xué)、成熟的提取技術(shù)和生產(chǎn)工藝可最大限度地保留總黃酮的活性。總黃酮的提取方法主要有熱水提取法、有機(jī)溶劑提取法、堿溶酸沉法、微波輔助提取法、超聲波輔助提取法、酶輔助提取法和超臨界流體萃取法[13]。韓雅慧等[11]研究表明乙醇回流法提取甘草總黃酮含量遠(yuǎn)大于水提法。鐘楚楚等[14]以利用醇浸漬法、醇回流提取法和超聲輔助醇提取法進(jìn)行夏枯草總黃酮的提取，其中，超聲輔助醇提取法的提取時間最短，提取率最高。本研究通過回流法與超聲提取法，比較不同溶劑對福建省南平市光澤縣和福建省三明市明溪縣的野生博落回葉中總黃酮的提取效果，并對博落回根、莖和葉等不同部位的總黃酮含量進(jìn)行分析，為博落回的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試樣品

野生博落回樣品采自福建省南平市光澤縣（GZ）寨里鎮(zhèn)和福建省三明市明溪縣（MX）雪峰鎮(zhèn)，兩個地區(qū)博落回的根（G）分別命名為GZG1、GZG2、GZG3、MXG1、

MXG2和MXG3;莖（J）分別命名為GZJ1、GZJ2、GZJ3、MXJ1、MXJ2和MXJ3;葉（Y）樣品分別命名為GZY1、GZY2、GZY3、MXY1、MXY2和MXY3。將各樣品洗凈后于60℃烘干至恒重，通過粉碎機(jī)和石臼將樣品粉碎并過50目篩，備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5 mg，用80%乙醇溶解，定容于25 mL容量瓶中，搖勻，得0.2 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。移液管精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加入0.4 mL 5%NaNO2，搖勻，放置5 min;加入0.4 mL 10% A1（NO3）3，搖勻，放置6 min;加入4.0 mL 5% NaOH，再加蒸餾水至刻度，搖勻，在80℃水浴中保溫10 min。使用酶標(biāo)儀測定各溶液在510 nm波長處的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 博落回葉中總黃酮提取方法優(yōu)化 采用甲醇提取法、超聲甲醇提取法、超聲甲醇補(bǔ)足提取法、超聲乙醇提取法和乙醇提取法等5種不同的提取方法[14]對光澤和明溪兩地野生博落回葉中總黃酮進(jìn)行提取（表1）。采用NaNO2·Al（NO3）3比色法對總黃酮含量進(jìn)行測定，分別精確吸取各博落回總黃酮提取溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，加入0.4 mL 5%的NaNO2溶液搖勻，放置5 min后加入0.4 mL 10% A1（NO3）3溶液，搖勻，放置6 min;加入4.0 mL 5% NaOH溶液，再加蒸餾水至刻度搖勻，在80℃水浴中保溫10 min;放置90 min后取200 μL在酶標(biāo)儀用510 nm波長處測定吸光度，并根據(jù)吸光值計(jì)算總黃酮含量和提取率，以蘆丁為對照品。

1.2.3 不同地區(qū)博落回不同部位中總黃酮含量分析 選用超聲甲醇補(bǔ)足提取法分別對明溪和光澤野生博落回根、莖和葉的總黃酮進(jìn)行提取和

測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 18.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取方法對博落回葉總黃酮含量的影響

5種不同提取方法對光澤和明溪野生博落回葉中總黃酮含量的影響見表2，超聲甲醇補(bǔ)足提取法的提取率最高，光澤和明溪野生博落回葉中總黃酮提取率分別為2.042%和1.544%;甲醇提取法的提取率最低，光澤和明溪野生博落回葉中總黃酮提取率分別為0.231%和0.594%。后續(xù)試驗(yàn)采用超聲甲醇補(bǔ)足提取法對博落回其他部位中總黃酮進(jìn)行提取。

2.2 博落回不同部位中總黃酮含量分析

2.2.1 博落回葉中總黃酮含量分析 從表3可知，光澤野生博落回葉中總黃酮含量在9.261～12.700 mg·g-1，明溪野生博落回葉中總黃酮含量在8.587～11.050 mg·g-1。光澤野生博落回葉中總黃酮的提取率在0.926%～1.270%，明溪野生博落回的葉中總黃酮的提取率在0.0859～1.105%。

2.2.2 博落回莖中總黃酮含量分析 從表4可知，光澤野生博落回莖中總黃酮含量在2.835～3.091 mg·g-1，明溪野生博落回莖中總黃酮含量在2.492～3.006 mg·g-1。光澤野生博落回莖中總黃酮的提取率在0.283%～0.306%，明溪野生博落回莖中總黃酮提取率在0.249%～0.301%。

2.2.3 博落回根中總黃酮含量分析 從表5可知，光澤野生博落回根中總黃酮含量在4.717～5.191 mg·g-1，明溪野生博落回根中總黃酮含量在3.277～5.224 mg·g-1。光澤野生博落回根中總黃酮的提取率在0.435%～0.519%，明溪野生博落回根中的黃酮提取率在0.328%～0.522%。

2.2.4 方差分析 博落回各部位中總黃酮含量的方差分析見表6，光澤和明溪地區(qū)的博落回葉中總黃酮含量和總黃酮提取率與根和莖中的具有顯著性差異。光澤的博落回和明溪的相比，雖然各個部位的總黃酮含量和總黃酮提取率略高，但是無顯著性差異。

3 討論與結(jié)論

本研究采集福建省南平市光澤縣和福建省三明市明溪縣兩地的野生博落回樣品，探究5種不同提取方法對博落回樣品總黃酮含量和提取率的影響，結(jié)果表明超聲甲醇補(bǔ)足提取法為最優(yōu)提取方法，與前期研究的不同提取方法對博落回總生物堿含量的影響的結(jié)果一致[15]。

明溪和光澤野生博落回樣品根、莖和葉中總黃酮的含量分析結(jié)果表明：（1）兩地的野生博落回葉中總黃酮的含量和提取率均高于莖和根，且莖和根總黃酮含量和提取率差異不大。這與岳慧英等[16]的研究結(jié)果一致。（2）光澤野生博落回各部位中總黃酮含量比明溪的野生博落回樣品的略高，但無顯著差異。

中藥材的活性成分提取物能夠抑制食品腐敗菌和致病菌的生長，是理想的天然抑菌防腐材料，故這些中藥材在抑菌防腐領(lǐng)域的作用效果成為目前的研究熱點(diǎn)，具有廣泛的開發(fā)前景[17-19]。總黃酮作為博落回主要的生物活性成分之一，其進(jìn)一步的開發(fā)與應(yīng)用更是目前亟須解決的問題[20-21]。本研究采用不同提取方法對博落回中總黃酮進(jìn)行優(yōu)化并對不同地區(qū)不同部位野生博落回中總黃酮含量進(jìn)行分析，不僅為提高博落回的總黃酮的提取效率提供研究基礎(chǔ)，更為博落回資源的深度開發(fā)、綜合利用提供了理論依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：柯文輝）

收稿日期：2021-03-25

作者簡介：鄭梅霞，女，1986年生，碩士，助理研究員，主要從事農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用研究。

通信作者：朱育菁，女，1972年生，博士，研究員，主要從事農(nóng)業(yè)生物資源保護(hù)與利用（E-mail：zyjingfz@163.com）;蘇海蘭，女，1980年生，碩士，高級農(nóng)藝師，主要從事藥用植物資源利用與仿生栽培研究（E-mail：suhailan2019@163.com）。

基金項(xiàng)目：福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院自由探索科技創(chuàng)新項(xiàng)目（ZYTS2019010）;福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目——省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)（2020R1034008）。

野生博落回總黃酮提取方法篩選及含量測定