精索靜脈曲張對(duì)精子DNA碎片、活力、形態(tài)及體外受精結(jié)局的影響

曾廣旦 廣東省深圳市寶安區(qū)寶安中醫(yī)院集團(tuán)檢驗(yàn)科 518101

精索靜脈曲張(VC)是指精索靜脈受損、瓣膜功能失常或減弱等原因造成精索靜脈變形、屈曲、伸長(zhǎng)，是導(dǎo)致男性不育的常見病因[1]。目前VC導(dǎo)致男性不育的原因可能與精液質(zhì)量降低及精子活力改變相關(guān)，其具體機(jī)制尚未完全闡釋清楚[2]。現(xiàn)有研究證實(shí)，精子細(xì)胞核DNA碎片率異常升高是某些男性不育的病因，而VC患者精液中可檢測(cè)到過量活性氧的存在，過量的活性氧物質(zhì)可引發(fā)精子DNA的斷裂，使DNA碎片增加，增加男性不育的風(fēng)險(xiǎn)[3]。為探究VC患者精液、精子相關(guān)參數(shù)的變化及與不育的關(guān)系，本文比較了VC患者及健康已育男性志愿者精液質(zhì)量及精子相關(guān)參數(shù)，并與近期進(jìn)行體外受精(IVF)受試者妊娠結(jié)局進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年6月—2019年6月我院收治的60例伴有VC的男性不育患者納入VC組，所有患者均采用臨床查體并結(jié)合彩色多普勒超聲確診，排除其他目前已知的可導(dǎo)致不育的疾病及環(huán)境因素；另擇同期于我院檢查的50例健康已育男性志愿者作為對(duì)照組；選擇本院同期進(jìn)行體外受精的556例患者為同期組。VC組患者年齡27～36歲，平均年齡(31.22±3.38)歲；對(duì)照組年齡26～37歲，平均年齡(30.96±4.02)歲；同期組年齡27～38歲，平均年齡(31.44±3.96)歲。各組年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 (1)精液常規(guī)形態(tài)學(xué)分析：囑受試者禁欲2～7d，收集新鮮精液置于取精杯，37℃恒溫培養(yǎng)，精液完全液化后進(jìn)行精液常規(guī)參數(shù)測(cè)定；進(jìn)行HE染色，按照Kruger評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。(2)染色質(zhì)擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：①采用培養(yǎng)液將液化的新鮮精子標(biāo)本濃度調(diào)至5×106/ml，取50μl已融化的1%低熔點(diǎn)瓊脂糖與20μl稀釋的精液標(biāo)本混勻，吸取混合液20μl滴在預(yù)先用1%瓊脂糖包被的載玻片上，蓋上蓋玻片，將標(biāo)本置于4℃冰箱內(nèi)5min以使瓊脂糖凝固，小心移去蓋玻片，留取載玻片備用。②載玻片置于0.08mol/L的HCI溶液中8min，小心取出放入中和裂解液Ⅰ中15min；然后取出放入中和裂解液Ⅱ中5min，最后取出放于TBE緩沖液2min；將處理好的載玻片分別放入濃度為70%、90%、100%的乙醇溶液中逐級(jí)脫水，每種溶液處理2min，脫水完畢后取出備用。③將瑞氏染液與磷酸緩沖液按照1∶1的比例混勻，將玻片置于混合染色液中染色10min，蒸餾水沖洗并自然晾干。④在顯微鏡下進(jìn)行500個(gè)精子計(jì)數(shù)，參考Fernandez標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，分為大光暈精子(暈輪寬度≥核心較小直徑)、中光暈精子(暈輪寬度介于大暈圈及小暈圈之間)、小光暈精子(暈輪寬度≤1/3×核心較小直徑)、無光暈精子及退化精子；其中小光暈、無光暈精子及退化精子為DNA損傷精子。(3)IVF-胚胎移植：①促排卵：從月經(jīng)周期第21天時(shí)給予促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑皮下注射，達(dá)到降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)后，給予促性腺激素注射，當(dāng)觀察到3個(gè)主導(dǎo)卵泡直徑達(dá)18mm時(shí)停止給藥，停藥當(dāng)晚給予人絨毛膜促性腺激素(HCG)1 000IU肌注，36h后進(jìn)行穿刺取卵。②IVF：取卵當(dāng)日常規(guī)授精，16～18h后觀察授精情況，可見2個(gè)原核及第二極體即為正常授精；授精成功后42h及72h可觀察卵裂情況。

1.3 觀察指標(biāo) 進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析統(tǒng)計(jì)前向精子活力、精子濃度、正常形態(tài)精子率及圓形細(xì)胞數(shù)；計(jì)算受試者精子碎片率(DFI)、IVF受精率、卵裂率及妊娠情況：其中精子DFI=DNA損傷精子/500×100%；IVF受精率=受精胚胎數(shù)量/卵子數(shù)量×100%；生化妊娠的標(biāo)準(zhǔn)為行胚胎移植后14d可測(cè)定血清β-HCG≥25mUI/ml。

2 結(jié)果

2.1 VC組與對(duì)照組精液常規(guī)參數(shù)比較 VC組患者精液體積、精子濃度、前向精子活力、正常精子形態(tài)等參數(shù)均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；兩組受試者圓形細(xì)胞數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 VC組與對(duì)照組精液常規(guī)參數(shù)比較

2.2 VC組與對(duì)照組精液精子碎片率比較 VC組患者大光暈精子比率明顯少于對(duì)照組(P<0.05)，中光暈、小光暈、無光暈及退化精子比率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，DFI明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 VC組與對(duì)照組精液精子碎片率比較

2.3 VC組及同期組妊娠相關(guān)指標(biāo)比較 VC組受精率、卵裂率均明顯低于同期組(P<0.05)。見表3。

表3 VC組及同期組妊娠相關(guān)指標(biāo)比較

3 討論

VC是因精索內(nèi)靜脈叢回流受阻或瓣膜失效等引起的血液流動(dòng)受阻，長(zhǎng)期發(fā)展即可導(dǎo)致靜脈叢蔓延伸長(zhǎng)[5]。既往研究表明，VC的發(fā)生與睪丸體積下降密切相關(guān)，VC可能可直接導(dǎo)致睪丸功能降低[6]；另有研究表明，VC可導(dǎo)致精子活力及正常精子所占比率下降[7]。本文對(duì)比了VC患者及對(duì)照組健康受試者精液質(zhì)量，結(jié)果顯示VC組患者伴有精液體積、精子濃度、前向精子活力、正常精子比率降低，提示VC的發(fā)生與精液質(zhì)量具有較強(qiáng)的相關(guān)性。

本文結(jié)果顯示，與對(duì)照組健康者比較，VC患者DNA正常精子比率明顯降低，異常比率明顯升高，精子碎片率明顯升高，提示VC患者存在精子DNA碎片化升高現(xiàn)象。目前認(rèn)為VC導(dǎo)致精子碎片化的機(jī)制可能與機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)升高相關(guān)，過量的氧化應(yīng)激可導(dǎo)致精子細(xì)胞膜損傷，引發(fā)精子細(xì)胞核破裂及核DNA碎片增多，另外細(xì)胞核的破壞可使精子DNA直接暴露在活性氧物質(zhì)中，導(dǎo)致DNA鏈斷裂及破壞[8]。對(duì)妊娠結(jié)局進(jìn)行分析，結(jié)果顯示VC患者IVF受精率及卵裂率較低，提示VC可降低受精率，結(jié)合前述結(jié)論，VC患者DNA正常精子比率降低可能為受精率降低的相關(guān)機(jī)制之一。精子DNA完整性是IVF授精成功的必要因素，精子DNA碎片的增加可減弱精子染色質(zhì)的穩(wěn)定性[9]。既往劉群龍等[10]研究證實(shí)與精液正常者比較，VC患者優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率存在一定的下降趨勢(shì)；而崔險(xiǎn)峰等[11]證實(shí)VC患者優(yōu)質(zhì)胚胎率及生化妊娠率與同期進(jìn)行IVF受試者比較無明顯差異，本文中優(yōu)胚率及生化妊娠率與后者研究結(jié)果類似，分析其原因，可能為我院同期進(jìn)行IVF的受試者以不同原因?qū)е律δ芟陆档幕颊呔佣啵瑢?dǎo)致優(yōu)質(zhì)胚胎率較低，兩者比較并無明顯差異，因此VC對(duì)臨床妊娠的影響仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

綜上所述，VC患者可伴有異常形態(tài)精子比率升高、活力降低及精子碎片率升高，另外也可導(dǎo)致IVF受精率、卵裂率降低，對(duì)妊娠結(jié)局有不良影響。