重組人干擾素聯(lián)合LEEP對宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P63、Ki-67表達及炎性因子的影響

趙晶蕾，韋廣月，劉艷潔

宮頸上皮內(nèi)瘤變是宮頸癌的癌前病變，若未及時規(guī)范治療，可進展為宮頸癌[1]。隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)宮頸上皮內(nèi)瘤變患者不僅存在炎癥反應，而且P16、P63、Ki-67在宮頸病變過程中可作用于細胞周期，參與細胞的增殖、分裂及腫瘤生成過程[2-3]。有研究表明，P16、P63、Ki-67在反映宮頸上皮內(nèi)瘤變診斷分級中具有重要意義[4-5]。宮頸環(huán)形電切術(LEEP)具有創(chuàng)傷小、切緣清晰、操作簡單等優(yōu)點，在宮頸上皮內(nèi)瘤變的治療中應用較廣[6]。干擾素由病毒刺激宿主細胞分泌產(chǎn)生，具有抑制細胞增殖、抗病毒譜廣等作用[7]。目前國內(nèi)學者已證實，重組人干擾素聯(lián)合LEEP對宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能、陰道微生態(tài)、炎癥反應等方面具有較好的改善作用[8-10]。但是，聯(lián)合治療對宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P67、Ki-67表達的影響報道較少。本研究采用重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療宮頸上皮內(nèi)瘤變，并對治療后P16、P67、Ki-67表達情況進行分析，有關結果報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月—2020年6月我院收治的宮頸上皮內(nèi)瘤變108例為研究對象。根據(jù)治療方法不同將患者分為觀察組和對照組，每組54例。觀察組年齡32～64(42.28±9.51)歲；分級：Ⅰ級23例，Ⅱ級31例；病程3～36(16.70±2.39)個月。對照組年齡32～65(41.93±9.26)歲；分級：Ⅰ級24例，Ⅱ級30例；病程3～36(16.57±2.48)個月。兩組年齡、分級、病程等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)學倫理委員會批準同意。

1.2納入與排除標準

1.2.1納入標準： ①經(jīng)活組織病理檢查、液基薄層細胞檢查確診為宮頸上皮內(nèi)瘤變；②分級為Ⅰ、Ⅱ級；③具有LEEP的手術指征；④入組前14 d未使用過抗生素、糖皮質激素等可能影響研究結果的藥物；⑤患者對本研究知情，且簽署知情同意書。

1.2.2排除標準：①合并淋病、滴蟲、支原體感染等疾病者；②確診為惡性瘤變或子宮上皮內(nèi)瘤變者；③過敏體質或對本研究藥物過敏者；④合并急性生殖道炎癥者；⑤妊娠或哺乳期患者；⑥合并其他重要臟器嚴重疾病者。

1.3治療方法 兩組均采用美國Wallach公司生產(chǎn)的QUANTUMA 2000型LEEP刀進行治療，功率50 W?；颊呷“螂捉厥唬植柯樽砗髽擞泴m頸表面移行區(qū)范圍，暴露病變位置；選擇合適的環(huán)形刀電極型號，通過宮頸環(huán)切入電圈，并環(huán)繞1周；根據(jù)電圈和碘示區(qū)范圍，控制切入深度，切除組織送病理檢查。觀察組在LEEP治療基礎上，給予重組人干擾素α-2b凝膠[兆科藥業(yè)(合肥)有限公司，國藥準字S20010054]治療，將重組人干擾素α-2b凝膠100萬U置于患者陰道后穹隆部，用紗布填塞6 h左右取出紗布。每天1次，連續(xù)10 d。

1.4觀察指標

1.4.1P16、P63和Ki-67表達情況：治療前取手術切除組織標本，治療30 d后在原病灶點取微量組織標本。標本常規(guī)固定、脫水、包埋。3 μm連續(xù)切片，HE染色。LEICA BOND MAX全自動免疫組織化學染色機測定，相關抗體由福州邁新生物技術開發(fā)有限公司提供。陰性對照染色使用PBS。陽性判斷標準：采用光學顯微鏡觀察顯色反應，細胞核內(nèi)(P16還需觀察細胞質)見棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞占比≥10%為陽性[11]。

1.4.2炎性因子檢測：治療前、治療30 d后于清晨空腹狀態(tài)抽取患者靜脈血5 ml，離心取血清冷凍待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定白細胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和C反應蛋白(CRP)水平，試劑盒由武漢艾迪抗生物科技有限公司提供，操作嚴格按照說明書進行。

1.4.3免疫功能檢測：治療前、治療30 d后于清晨空腹狀態(tài)抽取患者靜脈血5 ml，采用流式細胞術測定CD3+、CD4+、CD8+，試劑盒購自軍事醫(yī)學科學院，操作嚴格按照說明書進行。

1.4.4療效觀察：治療30 d后，評定患者療效,①顯效：陰道鏡及宮頸液基薄層細胞檢查未見宮頸上皮內(nèi)瘤變，宮頸光滑；②有效：陰道鏡及宮頸液基薄層細胞檢查示病變級別降低，病變范圍縮小>50%；③無效：陰道鏡及宮頸液基薄層細胞檢查示病變級別未降低，或病變范圍縮小<50%，甚至擴大[12]?？傆行?(顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4.5不良反應觀察：記錄兩組治療期間感染、出血、宮頸粘連等不良反應發(fā)生情況。

2 結果

2.1治療前后P16、P63、Ki-67陽性率比較 治療前，兩組P16、P63和Ki-67陽性率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，兩組P16、P63和Ki-67陽性率均較治療前降低，且觀察組低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表1。

表1 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組P16、P63、Ki-67陽性率比較[例(%)]

2.2治療前后炎性因子比較 治療前，兩組IL-10、TNF-α、CRP比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，兩組IL-10高于治療前，TNF-α、CRP均低于治療前，且觀察組IL-10高于對照組，TNF-α、CRP均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療前后炎性因子比較

2.3治療前后免疫功能比較 治療前，兩組CD3+、CD4+、CD8+比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，兩組CD3+、CD4+高于治療前，CD8+低于治療前，且觀察組CD3+、CD4+高于對照組，CD8+低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療前后免疫功能比較

2.4治療效果比較 觀察組總有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 采用不同方法治療宮頸上皮內(nèi)瘤變兩組治療效果比較[例(%)]

2.5不良反應發(fā)生情況 治療期間，觀察組出現(xiàn)感染、出血、宮頸粘連各1例，不良反應發(fā)生率為5.56%。對照組出現(xiàn)感染2例、出血1例、宮頸粘連2例，不良反應發(fā)生率9.26%。兩組不良反應發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變對女性健康和生命安全有極大威脅。相關臨床研究表明，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者多存在免疫功能惡化、陰道微生態(tài)破壞及炎癥反應加重等情況[13-15]。在“細胞學-陰道鏡-組織病理”三階段篩查推廣下，檢測P16、P63和Ki-67陽性表達情況有助于提高宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷準確率[16]。P16是一種抑癌基因，參與細胞周期調控，可以抑制細胞周期依賴性蛋白激酶4活性，阻止細胞進入S期。P63是P53基因家族成員，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及細胞凋亡過程。Ki-67存在于除G0期以外的細胞周期所有階段，被認為是一種可靠的核增殖標志物。目前多項研究表明，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者P16、P63和Ki-67均存在較高的陽性表達，且病情越嚴重，陽性表達率越高[17-19]。因此，P16、P63和Ki-67能作為宮頸上皮內(nèi)瘤變早期診斷的重要參考指標。LEEP通過超高頻低電壓技術，傳導高頻低電壓電波產(chǎn)生瞬時高壓，從而達到切除病變組織的目的,該手術具有微創(chuàng)、切除范圍大、止血效果好等優(yōu)點，逐步取代電凝、激光、冷凍等治療手段，在宮頸上皮內(nèi)瘤變的治療中得到了廣泛應用[20-22]。但是患者術后切口愈合時間較長，而且容易引發(fā)陰道出血、創(chuàng)面感染等風險。重組人干擾素可與干擾素受體特異性結合，阻止病毒蛋白質合成，抑制感染。此外，重組人干擾素還具有免疫功能和性激素分泌調節(jié)作用，促進機體免疫自穩(wěn)功能恢復和創(chuàng)面愈合[23]。

從本研究結果來看，觀察組總有效率高于對照組。該結果驗證了重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療宮頸上皮內(nèi)瘤變具有更好的臨床效果，結論與秦燕萍等[8]、馬小磊等[24]學者的報道相一致。炎癥反應被認為是宮頸上皮內(nèi)瘤變的致病機制之一。本研究發(fā)現(xiàn)，治療后，兩組IL-10高于治療前，TNF-α、CRP均低于治療前，且觀察組IL-10高于對照組，TNF-α、CRP低于對照組。該結果也證實重組人干擾素聯(lián)合LEEP有助于進一步減輕宮頸上皮內(nèi)瘤變患者體內(nèi)的炎癥反應。趙秀梅等[10]學者認為，聯(lián)合治療可以更好地誘導細胞表皮組織相容復合物抗原表達，改善機體免疫功能，并提高患者抗病毒能力，降低病毒感染風險，從而降低了炎癥反應。在人體內(nèi)CD8+起抑制作用，CD4+起促進作用，通過CD4+、CD8+的動態(tài)變化，從而實現(xiàn)機體免疫平衡。本研究還發(fā)現(xiàn)，治療后，兩組CD3+、CD4+高于治療前，CD8+低于治療前，且觀察組CD3+、CD4+高于對照組，CD8+低于對照組。該結果表明重組人干擾素聯(lián)合LEEP治療有助于改善宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能。此外，兩組治療后P16、P63和Ki-67陽性率均顯著低于治療前，且觀察組低于對照組。該結果提示P16、P63和Ki-67不僅可以作為診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的參考指標，而且可以作為預后判斷的參考指標。另外，上述結果還表明重組人干擾素聯(lián)合LEEP能夠改善宮頸上皮內(nèi)瘤變患者免疫功能、陰道微生態(tài)，減輕炎癥反應，同時抑制P16、P63和Ki-67陽性表達，在細胞層面調控病變進程。從不良反應來看，兩組不良反應發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義，肯定了聯(lián)合治療方案的安全性。

綜上所述，在LEEP基礎上，聯(lián)合重組人干擾素治療宮頸上皮內(nèi)瘤變，能夠更好地抑制P16、P63和Ki-67陽性表達，減輕炎癥反應，改善免疫功能，提高治療有效率，而且具有較高的安全性。