IL28B基因多態(tài)性對HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者抗病毒療效及停藥后復發(fā)的影響

李 莎，莫雨靈，呂建楠

我國現(xiàn)有慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者約為2000萬，其中30%～50%為HBeAg陰性，而HBeAg陰性患者更易進展為肝硬化和肝細胞癌[1]。核苷（酸）類似物[nucleos(t)ide analogues,NAs]、聚乙二醇干擾素-α（pegylated interferon-α,Peg-IFN-α）及普通 IFN-α 單藥、聯(lián)合或序貫治療是當前國內(nèi)指南推薦的首選抗HBV方案，然而療效存在較大的個體差異，因此，推測宿主遺傳背景下的免疫反應可能影響HBV感染后的疾病轉(zhuǎn)歸及抗病毒療效[2]。IL-28B即IFN-λ3，在動物體內(nèi)以及細胞模型中均具有良好的抗HBV/HCV活性[3]，其基因多態(tài)性與HCV感染者的自發(fā)性病毒清除及IFN治療誘導的病毒清除密切相關(guān)[4]。但IL28B基因多態(tài)性對HBV感染者的IFN療效預測價值存在爭議[5-7]，尚需在不同地域以及不同種族人群間進行深入研究。本研究以廣西漢族人群為研究對象，探討IL28B rs12979860不同基因型與HBeAg陰性CHB患者應用富馬酸替諾福韋酯（tenofovir disoproxil fumarate,TDF）序貫或聯(lián)合普通IFN-α療效間的關(guān)系，從而為加深對慢性HBV感染免疫發(fā)病機制的理解以及指導臨床治療提供思路。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2016年1月—2019年12月在南寧市第四人民醫(yī)院和北海市人民醫(yī)院門診或住院的119例初次接受TDF治療有效并完成序貫或聯(lián)合普通IFN-α抗病毒治療的HBeAg陰性CHB患者作為研究對象。HBeAg陰性CHB的診斷標準符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[8]中的標準。具體診斷標準為：血清HBsAg和HBV DNA陽性，HBeAg持續(xù)陰性，抗-HBe陽性或陰性，血清ALT反復或持續(xù)異常，或肝組織學檢查有肝炎病變。納入標準：①無其他肝臟疾病；②年齡＞18周歲；③用藥依從性良好，能完成全程抗病毒治療及隨訪觀察。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 119例患者初始均給予TDF[葛蘭素史克（天津）有限公司，規(guī)格300 mg，批號19055076]300 mg，1次/d，口服，且均達到HBV DNA持續(xù)檢測不到水平。根據(jù)治療144周時HBsAg水平進行個體化治療分組。對于HBsAg≤1000 IU/ml者序貫應用普通IFN-α2b（北京凱因科技股份有限公司，規(guī)格1 ml∶500萬IU，批號20191278）500萬IU，隔日1次，皮下注射，連續(xù)用藥48周；對于HBsAg＞1000 IU/ml者則聯(lián)合應用普通IFN-α2b 500萬IU，隔日1次，皮下注射，連續(xù)用藥48周。所有患者根據(jù)治療192周時HBsAg水平?jīng)Q定是否停藥，停藥者平均隨訪18（6～30）個月。停藥標準：依據(jù)《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[8]推薦的停藥標準，即HBeAg陰性CHB患者采用NAs治療至少4年，HBV DNA陰轉(zhuǎn)，HBV DNA持續(xù)檢測不到超過3年，肝功能持續(xù)正常，HBsAg≤1000 IU/ml（HBsAg定量對HBeAg陰性CHB患者抗病毒治療效果和停藥后療效預測方面具有一定的臨床指導意義[9]）。

1.2.2 指標檢測 采用PCR產(chǎn)物直接測序方法對患者IL28B rs12979860多態(tài)性進行測序分型：所有患者均采集外周血2 ml，用EDTA管收集并于-70 ℃凍存?zhèn)溆茫捎秒x心柱法提取人基因組DNA，用PCR對基因進行擴增并進行產(chǎn)物純化回收；采用BigDye Terminator v1.1試劑盒，通過ABI 3730測序儀對測序引物進行測序分型，利用3730 Fast System V1.3.1 SDS圖像分析軟件分析IL28B rs12979860多態(tài)性分型結(jié)果。采用肝臟瞬時彈性成像掃描儀（Fibroscan，法國Echosens公司）測量并記錄受試者不同時間點的肝臟硬度測定值（liver stiffness measurement,LSM）。采用EasyCuta全自動時間分辨熒光分析儀（珀金埃爾默儀器有限公司）對患者不同時間點的HBV血清學標志物（抗-HBs、HBsAg、抗-HBe、HBeAg）進行定量檢測。采用實時熒光定量PCR方法對患者不同時間點血清標本中HBV DNA含量進行檢測，檢測儀器采用ABI-7500實時熒光定量PCR擴增儀（美國應用生物系統(tǒng)公司）。

1.3 療效判定 抗病毒治療的病毒學應答、免疫學應答及組織學應答定義符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[8]中的標準。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料用±s表示，計數(shù)資料用例（%）表示；計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者基線特征及不同IL28B rs12979860基因型患者的差別 119例患者的基線特征見表1。IL28B rs12979860 CC基因型和非CC基因型患者各基線特征比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）。

表1 患者基線特征及不同IL28B rs12979860基因型患者的差別Table 1 Baseline characteristics of patients and differences in patients with different IL28B rs12979860 genotypes

2.2 治療192周時不同IL28B rs12979860基因型患者血清學應答狀況 治療192周時HBsAg≤1000 IU/ml的患者比例為60.5%（72/119），其中4例發(fā)生HBsAg血清學轉(zhuǎn)換。IL28B rs12979860 CC基因型患者中HBsAg≤1000 IU/ml者占65.7%（65/99），而非CC基因型患者中HBsAg≤1000 IU/ml者占35.0%（7/20），2組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。治療192周時，IL28B rs12979860 CC基因型患者HBsAg下降水平為（1.0±0.4）lg IU/ml，而非CC基因型患者僅為（0.8±0.3）lg IU/ml，2組比較差異有統(tǒng)計學意義（t=2.116，P=0.036），而且4例發(fā)生HBsAg血清學轉(zhuǎn)換的患者均為CC基因型表達者。

表2 不同IL28B rs12979860基因型患者的血清學應答狀況（例）Table 2 Serological response in patients with different IL28B rs12979860 genotypes(cases)

2.3 治療192周時不同IL28B rs12979860基因型患者肝臟組織學應答情況 治療192周時IL28B rs12979860 CC基因型患者LSM的平均下降水平為（3.4±1.3）kPa，而非CC基因型患者僅為（2.6±1.4）kPa，2組比較差異有統(tǒng)計學意義（t=2.788，P=0.015）。

2.4 IL28B rs12979860基因型與停藥隨訪6個月時復發(fā)的關(guān)系 治療至192周時，72例患者HBsAg≤1000 IU/ml，其中IL28B rs12979860 CC基因型患者65例，非CC基因型患者7例。停藥隨訪6個月時有16例復發(fā)，CC和非CC基因型患者所占的比例分別為16.9%（11/65）及71.4%（5/7），2組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同IL28B rs12979860基因型患者停藥隨訪6個月復發(fā)情況（例）Table 3 Relapse of patients with different IL28B rs12979860 genotypes at 6-month follow-ups after drug withdrawal(cases)

2.5 IL28B rs12979860基因型與抗病毒治療期間的藥物不良反應間的關(guān)系 119例患者在抗病毒治療期間的藥物不良反應主要包括血乳酸升高、血磷降低、一過性骨髓抑制、甲狀腺功能異常、食欲減退、體質(zhì)量減輕及脫發(fā)等，對不同IL28B rs12979860基因型患者的上述藥物不良反應發(fā)生率進行比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05），見表4。

表4 不同IL28B rs12979860基因型患者抗病毒治療期間的不良反應[例（%）]Table 4 Adverse reactions during antiviral therapy in patients with different IL28B rs12979860 genotypes[cases(%)]

3 討 論

本研究結(jié)果表明，HBeAg陰性CHB患者應用TDF序貫或聯(lián)合IFN-α可以獲得較好的免疫學及組織學應答，IL28B rs12979860 CC基因型可能是 HBeAg陰性CHB患者取得抗病毒療效及停藥6個月不復發(fā)的預測因素。對NAs經(jīng)治CHB患者序貫或聯(lián)合Peg-IFN-α可有效提升抗病毒療效，使部分患者獲得臨床治愈，并可以進一步降低HBV相關(guān)肝癌的發(fā)生率[1]。Tatsukawa等[10]研究表明，HBeAg陰性CHB患者應用NAs長期治療期間，序貫以長效IFN治療，對降低HBsAg水平的效果可能優(yōu)于聯(lián)合長效IFN治療。本研究證實，TDF經(jīng)治CHB患者序貫或聯(lián)合IFN-α治療至192周時，其血清學應答率為60.5%，有4例患者發(fā)生了HBsAg的血清學轉(zhuǎn)換。

先前研究證實，IL28B rs12979860基因多態(tài)性不僅與HCV感染者的疾病轉(zhuǎn)歸，而且與病毒載量密切相關(guān)[4]。IL28B基因編碼IFN-λ3，后者與IFN-α一樣，也是通過激活JAK-STAT信號并最終通過活化ISGs在抗HBV/HCV感染免疫中發(fā)揮重要的作用[4]。而且，在轉(zhuǎn)基因鼠肝細胞模型中，外源性IFN-λ2通過上調(diào)ISGs而發(fā)揮對HBV良好的抑制效應[11]。基于上述研究，推測IL28B基因多態(tài)性可能與慢性HBV感染者臨床轉(zhuǎn)歸及IFN-α抗病毒療效相關(guān)。但也有部分研究觀點與該推測相矛盾。一項針對亞洲人群的Meta分析表明，IL28B基因多態(tài)性與HBV感染者疾病進程無相關(guān)性[12]。來自Jilg 等[13]的研究認為，IL28B基因多態(tài)性與IFN治療CHB患者誘導的病毒清除間的關(guān)系較微弱，即使存在，可能也局限于某些亞組，如HBeAg狀態(tài)或某種HBV基因型患者。而來自Domagalski等[14]研究則證實，IL28B基因多態(tài)性對IFN治療兒童CHB效果具有良好的預測價值。

本研究以廣西漢族人群為研究對象，探討IL28B rs12979860多態(tài)性對HBeAg陰性CHB患者TDF序貫或聯(lián)合IFN-α抗病毒療效的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，序貫或聯(lián)合IFN-α 48周后攜帶IL28B rs12979860 CC基因型患者的HBsAg下降水平及肝臟纖維化改善情況均顯著優(yōu)于非CC基因型患者；而且在達到停藥標準的患者中，隨訪6個月時非CC基因型患者更容易復發(fā)。這與Wei等[7]的研究結(jié)果不同，該研究發(fā)現(xiàn)IL28B基因型與長效IFN治療HBeAg陰性和陽性的CHB患者的效果均不相關(guān)。然而，一項來自北歐和亞洲的多中心研究表明，IL28B基因多態(tài)性與IFN誘導的HBeAg血清學轉(zhuǎn)換及HBsAg血清學清除密切相關(guān)[5]。Lampertico等[6]通過研究HBV基因D型HBeAg陰性CHB患者采用IFN治療的效果與IL28B rs12979860多態(tài)性間的關(guān)系證實，IL28B基因型不僅與IFN治療結(jié)束時病毒學應答及持續(xù)病毒應答率相關(guān)，而且與長期隨訪的HBsAg血清學轉(zhuǎn)換密切相關(guān)[6]。IL28B基因多態(tài)性與IFN誘導的CHB患者的病毒學及血清學應答關(guān)系尚不十分清楚，可能與優(yōu)勢等位基因純合子基因型者高表達Ⅲ型IFN導致基線病毒水平較低相關(guān)。這與Vergori等[15]的研究結(jié)論相一致，該研究發(fā)現(xiàn)IL28B rs12979860 CC基因型患者HBsAg定量及HBV DNA水平顯著低于非CC基因型患者。但目前關(guān)于IL28B基因多態(tài)性與IFN誘導的CHB患者的病毒學及血清學應答相關(guān)研究結(jié)論存在差異，可能與在不同的研究隊列中納入的種族人群、樣本量大小、治療策略及療程以及隨訪時間不同有關(guān)，尚須進一步研究探討。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，應用NAs及IFN治療期間的常見不良反應在IL28B rs12979860 CC基因型和非CC基因型患者之間差異無統(tǒng)計學意義。而Lotrich等[16]研究發(fā)現(xiàn)，IL28B rs12979860 C等位基因與IFN相關(guān)的乏力、食欲下降及失眠等不良反應密切相關(guān)。Miyamura等[17]研究則發(fā)現(xiàn)，IL28B rs8099917 G等位基因與Peg-IFNα-2a/利巴韋林治療期間發(fā)生一過性骨髓抑制相關(guān)。這可能與種族人群的差異或HBV與HCV所誘導的宿主免疫應答不同所致，尚須深入研究。

總之，我國廣西漢族人群的IL28B rs12979860基因多態(tài)性不僅與HBeAg陰性CHB患者TDF序貫或聯(lián)合IFN-α治療的血清學應答及組織學應答密切相關(guān)，而且與停藥后6個月的是否復發(fā)相關(guān)。