邁瑞BC6800-PLUS血液分析儀8倍光學模式在低值血小板計數檢測中的臨床應用價值

郭浩翔，李濤，許穎（浙江省臺州醫院.檢驗科，.心內科，浙江臺州 371000）

低值血小板計數（PLT）是臨床疾病診斷的重要依據，也是血小板輸注的重要指標。國外輸血指南推薦，預防性的血小板輸注閾值為10×109／L［1］；國內輸血指南推薦，當PLT在（10～50）×109時，需要根據臨床出血情況來輸注血小板，當PLT低于5×109／L時，應立即給予血小板輸注［2］。目前，全自動血液分析儀的普及和應用大大提高了PLT 檢測的效率，但仍存在一定的局限性。常用的電阻抗法受到大血小板、小紅細胞、紅細胞碎片、血小板聚集等諸多因素的干擾，影響PLT。邁瑞BC6800-PLUS血液分析儀除用電阻抗通道和光學通道檢測PLT外，還裝載了其特有的8 倍倍增模式，即8 倍光學法，在檢測過程中，儀器將獲取較光學法模式下的8倍PLT統計量，來提高低值PLT 檢測的準確性。本研究將對該模式進行臨床應用的評價。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑 邁瑞BC6800-PLUS血液分析儀、SC-120自動血涂片制備儀（深圳邁瑞公司），BA53F顯微鏡（日本Olympus公司），XB-K-25 血細胞計數板（上海安信光學儀器制造公司），按《全國臨床檢驗操作規程（第3版）》配制PLT稀釋液（草酸銨法稀釋液）［3］。

1.2 標本來源與分組 收集本院2020 年1 月至2021 年1 月PLT≤50×109／L 的全血標本共335例，其中男176 例，女159 例，年齡2～87 歲。335例標本中，按濃度梯度挑選5例（經鏡檢無干擾）檢測重復性，其余330例標本根據有無血小板干擾分成無干擾組120 例，有干擾組210 例，其中有干擾組分成假性增高120例，假性減低90例。330例按PLT（×109／L）分為0～10、10～30、30～50組。

1.3 檢測方法

1.3.1 儀器檢測法 335 例標本用邁瑞BC6800-PLUS血細胞分析儀的電阻抗法、光學法、8 倍光學法檢測PLT，分別記為PLT-I、PLT-O、PLT-O8。

1.3.2 手工法 由2 名技術熟練的主管技師采用雙盲法嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程（第3版）》［3］手工計數PLT，取2次計數結果的平均值（2次誤差控制在5%以內），記為PLT-M。

1.3.3 染色鏡檢法 將335 例標本用血涂片制備儀制成血涂片，高倍鏡下觀察血小板干擾情況，并用油鏡確認，分類并記錄，有紅細胞碎片和小紅細胞干擾的歸為假性增高組，有大血小板和血小板聚集干擾的歸為假性減低組。

1.4 統計學分析 用SPSS 19.0 和Excel 2007 軟件對數據進行分析。用Excel 2007 對儀器進行重復性評價，用SPSS 19.0 對3 種儀器方法和手工法檢測結果進行配對樣本的t檢驗；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 重復性 結果見表1。比較5 例標本PLT-I、PLT-O、PLT-O8 結果可見，PLT-O8 的CV和s均小于PLT-I、PLT-O的CV和s，說明PLT-O8 的重復性結果最好，精密度高。

表1 5例低值PLT標本重復性檢測結果

2.2 無干擾組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表2。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較，差異均無統計學意義（P均＞0.05）；說明PLT無干擾時，PLT-I、PLT-O、PLT-O8結果可靠。

表2 120例無干擾組3種儀器方法與手工法比較結果

2.3 假性增高組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表3。120例假性增高標本，經鏡檢，有小紅細胞干擾者28 例，有紅細胞碎片干擾者43 例，上述干擾均存在者49 例。將PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M比較發現，PLT-I與PLT-M差異有統計學意義（P＜0.05）；當PLT 在0～10×109／L 時，PLT-O與PLT-M 差異有統計學意義（P＜0.05），而PLT-O8與PLT-M差異無統計學意義（P＞0.05）；表明PLT在0～10×109／L 且有紅細胞碎片和小紅細胞干擾時，PLT-O8準確性更好。

表3 120例假性增高標本3種儀器方法與手工法比較結果

2.4 假性減低組3 種儀器方法與手工法比較 結果見表4。90 例假性減低標本中，經鏡檢，血小板聚集者57 例，大血小板干擾者33 例。PLT-I、PLT-O、PLT-O8 分別與PLT-M 比較發現，PLT-I 與PLT-M 差異有統計學意義（P＜0.05），PLT-O、PLT-O8與PLT-M 比較差異無統計學意義（P＞0.05）；表明血小板在有大血小板和血小板聚集干擾時，PLT-O和PLT-O8可靠。

表4 90例假性減低組3種儀器方法與手工法比較結果

3 討論

隨著科技的進步，市面上出現了很多型號的全自動血液分析儀，PLT的檢測方法也由過去的電阻抗法發展到現在的光學法、熒光法等，大大提高了臨床實驗室PLT 檢測的效率［4］。有研究報道，當PLT＜80×109／L時，與電阻抗法和光學法相比，熒光法檢測PLT具有更好的精密度和準確性［5］，但對于當PLT低于10×109／L時抗干擾檢測的報道并不多見。本研究數據顯示，當PLT＜10×109／L 且有紅細胞碎片或小紅細胞干擾時，邁瑞BC6800-PLUS 血液分析儀的8倍光學法準確性和精密度較高，可應用于臨床。

邁瑞BC6800-PLUS 血液分析儀的8 倍倍增模式是利用光學法原理，結合半導體激光和RNA 核酸熒光染色法，用前向散射光反映細胞大小，側向散射光的熒光強度反映細胞內核酸物質含量，在一定程度上檢測顆粒細胞內部結構和形態，分辨不同性質的顆粒細胞，由于小紅細胞、紅細胞碎片等沒有RNA不會被熒光染色，因此有效地消除了小紅細胞、紅細胞碎片等帶來的干擾。此光學通道還利用了PLT解聚技術，在恒定的溫度和pH 下加入解聚劑，再通過速度達到1 400 r／min 的物理攪拌，有效地解離聚集的血小板，能基本解決由于EDTA抵抗造成的血小板聚集問題。另外其8 倍倍增模式在以上原理基礎上獲取了對低值PLT 8 倍的粒子統計量，大大提高了低值PLT檢測的準確性。

臨床上，紅細胞碎片、白細胞碎片、小紅細胞是引起PLT假性增高常見的干擾成分［6］。有研究表明［7］，由于紅細胞和血小板是同一個計數通道，當紅細胞體積＜70 fL 時，會對PLT 產生干擾，而本研究的假性增高組只統計了小紅細胞和紅細胞碎片兩項干擾因素，對于其他白細胞碎片、未成熟紅細胞的干擾因素尚未可知。當外周血出現體積＜70 fL的真菌、有核紅細胞等干擾時，該模式是否適用需要作進一步研究。大血小板、血小板聚集（以EDTA 抗凝劑依賴常見）［8］常引起臨床上的PLT假性減低。本研究數據顯示，假性減低組中的57例血小板聚集標本有2 例標本并不能利用光學通道有效解決也無法手工計數，這可能與EDTA誘發血小板膜蛋白與GPⅡb／Ⅲa抗體反應，結合后的抗體Fc 端與單核細胞或者淋巴細胞膜上的Fc 受體牢固結合而產生的聚集現象有關，此時無法用光學法解聚血小板，而需要重新采集并用枸櫞酸鈉抗凝或者末梢血來糾正。另外，全血標本若采集后立即檢測PLT也會假性減低，這可能與血小板的可逆性聚集有關，此時需要標本靜置30 min 后重新檢測［9］。

綜上所述，當PLT用電阻抗法檢測出現低值報警時，如血小板聚集報警、直方圖、散點圖等，應該首先涂片復檢，以觀察到血小板的數量、大小、形態、有無聚集、聚集多少等。若鏡檢有血小板聚集、大血小板、紅細胞碎片、小紅細胞等干擾存在時，可選用光學法和8倍光學倍增模式檢測，若有紅細胞碎片和小紅細胞干擾存在且PLT＜10×109／L 時可選用8倍光學倍增模式。若遇到PLT其他干擾時，比如大塊血液凝固、白細胞碎片、真菌、有核紅細胞等，此時尚未有研究表明該8 倍光學模式可靠，這時還需要結合手工法和血涂片鏡檢法，才能保證PLT檢測的準確和質量，為臨床提供更可靠的檢驗信息。