KI-羅丹明6G熒光猝滅法測定火腿中的亞硝酸鹽

龐海霞，強瑾，姜敏，熊海濤，史娟

(陜西理工大學 化學與環境科學學院，陜西省催化基礎與應用重點實驗室，陜西 漢中，723001)

亞硝酸鹽廣泛存在于土壤、水域及植物中[1]，是一種常用的食品添加劑，乳制品、泡菜、腌臘肉等食物中含量較高[2]。這類添加劑能賦予食品良好的外觀色澤和獨特風味，延緩其氧化酸敗，延長貨架期，抑制腐敗菌的生長繁殖，阻止致病菌導致的食物中毒[3]。但是若從食物中攝取過量的亞硝酸鹽，會嚴重威脅人類健康。首先在亞硝酸鹽作用下，人體亞鐵血紅蛋白會喪失攜帶氧的能力，嚴重時會危及生命[4-5]，其次亞硝酸鹽在胃內酸性環境中，會與人體內的伯胺及酰胺類物質發生亞硝化反應生成N-亞硝胺；亞硝胺類化合物是一種強致癌物質，會引起食管癌，胃癌，咽喉癌，肝癌和大腸癌等[6]。此外，亞硝酸鹽還可能引發人類先天畸形，其是中樞神經系統先天畸形高發的重要原因之一[7-8]。因此，分析檢測食品中亞硝酸鹽的含量，無論是對食品企業的生產監督還是對消費者的飲食安全都具有極為重要的意義。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 儀器與設備

BSA124S型電子天平，北京賽多利斯儀器系統有限公司；UV-2600型紫外-可見分光光度，日本理學公司；Cary Eclipse熒光光度計，安捷倫科技有限公司；JXL-2S-2A數顯恒溫水浴鍋，江蘇省金壇市金祥龍電子有限公司；DHG-9070A電熱恒溫鼓風干燥箱，上海齊欣科學儀器有限公司。

1.1.2 試劑與材料

材料：火腿腸(2種品牌)，采購自超市。

1.2 實驗方法

1.3 樣品處理

準確稱取搗碎且混勻的火腿腸樣品10.00 g于燒杯中，加入6 mL飽和硼砂溶液，攪拌均勻，再加入60 mL 80 ℃熱水。置沸水浴中加熱15 min取出，邊攪拌邊加入5 mL 50 g/L的硫酸鋅溶液，以沉淀蛋白質。冷卻至室溫，轉入1 L容量瓶中，用水定容，搖勻。靜置15 min，棄去上層脂肪，清液用濾紙過濾，棄去初濾液10 mL，收集其余濾液存于試劑瓶中作為分析試液，進行樣品分析[13-14]。

2 結果與分析

圖1 不同濃度的存在時KI -羅丹明6G的熒光強度Fig.1 Fluorescence spectra of KI-rhodamine 6G with different concentration of

2.2 實驗條件的優化

2.2.1 H2SO4用量對測定結果的影響

按1.2中的實驗方法，保證其他條件不變，改變0.1 mol/L H2SO4的加入量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，測定羅丹明6G的熒光猝滅情況，結果如圖2-a所示。當H2SO4加入量為2.0 mL時，體系熒光猝滅值ΔF最大；隨著硫酸加入量的增大，熒光猝滅值ΔF有所減小。故實驗選擇0.1 mol/L H2SO4加入量為2.0 mL。

2.2.2 KI用量對體系測定結果的影響

固定其他條件及0.1 mol/L H2SO4用量2.0 mL不變，改變0.1 mol/L KI溶液的加入量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，按1.2實驗方法測定試液熒光猝滅值，結果如圖2-b所示。當KI加入量為2.0 mL時，體系熒光猝滅值ΔF最大，反應最靈敏，故實驗選擇0.1 mol/L KI加入量為2.0 mL。

2.2.3 吐溫-80用量對體系測定結果的影響

由于離子締合物具有疏水性，為使其穩定地存在于水溶液中，通常加入表面活性劑，吐溫-80可用于羅丹明光度分析的研究[15]。固定其他條件不變，硫酸、碘化鉀用量為上述討論的最佳用量，改變1.0 g/L吐溫-80加入量分別為0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，體系熒光猝滅值ΔF如圖2-c所示。吐溫-80加入量為0.5 mL時，體系的熒光猝滅值ΔF最大。故實驗選擇1.0 g/L吐溫-80加入量為0.5 mL。

2.2.4 羅丹明6G用量對體系測定結果的影響

在上述實驗確定的硫酸、碘化鉀、吐溫-80最佳用量的基礎上，分別考察了5×10-5mol/L羅丹明6G加入量為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL時，體系熒光猝滅值ΔF的變化，結果如圖2-d所示。當羅丹明6G加入量為2.0 mL時，體系的熒光猝滅值ΔF最大，故實驗選擇5×10-5mol/L羅丹明6G加入量為2.0 mL。

2.2.5 反應時間對體系測定結果的影響

a-0.1 mol/L H2SO4用量對體系熒光猝滅值的影響；b-0.1 mol/ L KI溶液用量對體系熒光猝滅值的影響；c-0.1 g/L吐溫-80用量對體系熒光猝滅值的影響；d-5×10-5 mol/L羅丹明6G用量對體系熒光猝滅值的影響；e-反應時間對體系熒光猝滅值的影響圖2 實驗條件優化Fig.2 Optimization of experimental conditions

2.3 工作曲線與精密度

圖3 標準曲線Fig.3 Calibration curves

2.4 共存離子的影響

2.5 樣品的測定及加標回收率試驗

按照1.3方法將2種火腿腸樣品各處理3份，移取處理好的火腿腸樣品溶液參照1.2實驗方法測定其熒光猝滅值ΔF，確定樣品中亞硝酸鹽的含量。為了檢驗該方法的準確度，同時也采用國標比色法進行對比測定，并做加標回收率試驗，結果如表1所示。采用該方法測定2種火腿腸樣品中亞硝酸鹽含量分別為11.18、18.72 mg/kg，測定值與比色法檢測結果基本一致，所測回收率為95.5%～105.3%，表明該方法具有較高的準確度與精密度，可用于實際樣品分析。

表1 火腿腸中亞硝酸鹽分析結果(n=3)Table 1 Analytical results of nitrite in ham sausage (n=3)

3 結語